Name: ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコHIV感染細胞の同定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 学ぶEcoHIV感染トランスジェニックマウスを用いたミクログリア操作とウイルス貯蔵庫の同定法。HIV関連神経認知障害におけるミクログリアの役割と脳内ウイルス分布を可視化する手法です。

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<meta charset="utf8"></head><body>ミクログリアの変化を研究するためのTmem119-EGFPマウスのEcoHIV感染

<ol><li>Vigorito, M., Lashomb, A. L., Chang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+learning+and+memory+in+HIV-1+transgenic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Spatial learning and memory in HIV-1 transgenic rats.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 2, 319-328 (2007).</li>
<li>Moran, L. M., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+and+time+again%3A+Temporal+processing+demands+implicate+perceptual+and+gating+deficits+in+the+HIV-1+transgenic+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Time and time again: Temporal processing demands implicate perceptual and gating deficits in the HIV-1 transgenic rat.</a> J. Neuroimmune Pharmacol. 8 (4), 988-997 (2013).</li>
<li>Repunte-Canonigo,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+consistent+with+neuroAIDS+and+impaired+working+memory+in+HIV-1+transgenic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes consistent with neuroAIDS and impaired working memory in HIV-1 transgenic rats.</a> Mol Neurodegener. 9, 26(2014).</li>
<li>Reid, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+HIV-1+transgenic+rat+that+develops+HIV-related+pathology+and+immunologic+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">An HIV-1 transgenic rat that develops HIV-related pathology and immunologic dysfunction.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98 (16), 9271-9276 (2001).</li>
<li>McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+timing%3A+NeuroHIV+progression+in+the+post-cART+era%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Disruption of timing: NeuroHIV progression in the post-cART era.</a> Sci Rep. 9, 827(2019).</li>
<li>Roscoe, R. F., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+transgenic+female+rat%3A+Synaptodendritic+alterations+of+medium+spiny+neurons+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">HIV-1 transgenic female rat: Synaptodendritic alterations of medium spiny neurons in the nucleus accumbens.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 9 (5), 642-653 (2014).</li>
<li>Denton, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+monoaminergic+and+histaminergic+circuit+dysregulation+following+long-term+HIV-1+protein+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22J+NeuroVirol%22%5BJournal%5D)">Selective monoaminergic and histaminergic circuit dysregulation following long-term HIV-1 protein exposure.</a> J NeuroVirol. 25 (4), 540-550 (2019).</li>
<li>Peng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HIV-1+transgenic+rat+as+a+model+for+HIV-1+infected+individuals+on+HAART%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">The HIV-1 transgenic rat as a model for HIV-1 infected individuals on HAART.</a> J Neuroimmunol. 218 (1-2), 94-101 (2010).</li>
<li>Abbondanzo, S. J., Chang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-1+transgenic+rats+display+alterations+in+immunophenotype+and+cellular+responses+associated+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">HIV-1 transgenic rats display alterations in immunophenotype and cellular responses associated with aging.</a> PLoS ONE. 9, e105256(2014).</li>
<li>Potash, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+study+of+systemic+HIV-1+infection%2C+antiviral+immune+responses%2C+and+neuroinvasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 102 (10), 3760-3765 (2005).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Illenberger, J. M., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+HIV-1+expression%3A+Role+in+HIV-1+associated+neurocognitive+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Microglial HIV-1 expression: Role in HIV-1 associated neurocognitive disorders.</a> Viruses. 13 (5), 924(2021).</li>
<li>Kaiser, T., Feng, G. Tmem119-EGFP and Tmem119-CreERT2 transgenic mice for labeling and manipulating microglia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaiser%2C+T+%22eNeuro%22">eNeuro</a>. 6 (4), (2019).</li>
<li>Bennett, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+tools+for+studying+microglia+in+the+mouse+and+human+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">New tools for studying microglia in the mouse and human CNS.</a> Proc Natl Acad Sci. USA. 113 (12), E1738-E1746 (2016).</li>
<li>Satoh, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TMEM119+marks+a+subset+of+microglia+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropathology%22%5BJournal%5D)">TMEM119 marks a subset of microglia in the human brain.</a> Neuropathology. 36 (1), 39-49 (2016).</li>
<li>Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+filamentous+actin+%28F-actin%29+puncta+in+rat+cortical+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons.</a> J Vis Exp. (108), e53697(2016).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rat+model+of+EcoHIV+brain+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A rat model of EcoHIV brain infection.</a> J Vis Exp. (167), e62137(2021).</li>
<li>Alfar, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+optimizing+production+and+quality+control+of+infective+EcoHIV+virions%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for optimizing production and quality control of infective EcoHIV virions.</a> STAR Protoc. 4 (3), 102368(2023).</li>
<li>Malatesta, P., Hartfuss, E., Götz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+radial+glial+cells+by+fluorescent-activated+cell+sorting+reveals+a+neuronal+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Isolation of radial glial cells by fluorescent-activated cell sorting reveals a neuronal lineage.</a> Development. 127 (24), 5253-5263 (2000).</li>
<li>Parpura, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate-mediated+astrocyte-neuron+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Glutamate-mediated astrocyte-neuron signaling.</a> Nature. 369 (6483), 744-747 (1994).</li>
<li>Wahl, A., Al-Harthi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+infection+of+non-classical+cells+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Retrovirology%22%5BJournal%5D)">HIV infection of non-classical cells in the brain.</a> Retrovirology. 20 (1), 1(2023).</li>
<li>Pandey, H. S., Seth, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Friends+turn+foe-astrocytes+contribute+to+neuronal+damage+in+NeuroAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Friends turn foe-astrocytes contribute to neuronal damage in NeuroAIDS.</a> J. Mol. Neurosci. 69 (2), 286-297 (2019).</li>
<li>Minagar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophage%2Fmicroglia+and+astrocytes+in+the+pathogenesis+of+three+neurologic+disorders%3A+HIV-associated+dementia%2C+Alzheimer%27s+disease%2C+and+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of macrophage/microglia and astrocytes in the pathogenesis of three neurologic disorders: HIV-associated dementia, Alzheimer's disease, and multiple sclerosis.</a> J Neurol Sci. 202 (1-2), 13-23 (2002).</li>
<li>Borrajo, A., Spuch, C., Penedo, M. A., Olivares, J. M., Agís-Balboa, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Important+role+of+microglia+in+HIV-1+associated+neurocognitive+disorders+and+the+molecular+pathways+implicated+in+its+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Med%22%5BJournal%5D)">Important role of microglia in HIV-1 associated neurocognitive disorders and the molecular pathways implicated in its pathogenesis.</a> Ann Med. 53 (1), 43-69 (2021).</li>
<li>González-Scarano, F., Martín-García, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropathogenesis+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The neuropathogenesis of AIDS.</a> Nat Rev Immunol. 5 (1), 69-81 (2005).</li>
<li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+proliferation+underlies+synaptic+dysfunction+in+the+prefrontal+cortex%3A+Implications+for+the+pathogenesis+of+HIV-1-associated+neurocognitive+and+affective+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Microglia proliferation underlies synaptic dysfunction in the prefrontal cortex: Implications for the pathogenesis of HIV-1-associated neurocognitive and affective alterations.</a> J. Neurovirol. 29 (4), 460-471 (2023).</li>
<li>Kim, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EcoHIV+infection+of+primary+murine+brain+cell+cultures+to+model+HIV+replication+and+neuropathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">EcoHIV infection of primary murine brain cell cultures to model HIV replication and neuropathogenesis.</a> Viruses. 16 (5), 693(2024).</li>
<li>Réu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lifespan+and+turnover+of+microglia+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">The lifespan and turnover of microglia in the human brain.</a> Cell Rep. 20 (4), 779-784 (2017).</li>
<li>Jones, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+of+glial+cell+modulators+in+the+management+of+substance+use+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Drugs%22%5BJournal%5D)">Potential of glial cell modulators in the management of substance use disorders.</a> CNS Drugs. 34 (7), 697-722 (2020).</li>
<li>Kaalund, S. S., Johansen, A., Fabricius, K., Pakkenberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Untreated+patients+dying+with+aids+have+loss+of+neocortical+neurons+and+glial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Untreated patients dying with aids have loss of neocortical neurons and glial cells.</a> Front Neurosci. 13, 1398(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>293FT細胞</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>33 G、スモールハブRNニードル、(ポイントスタイル:3、針の長さ:19.25 mm)</td><td>ハミルトン</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質-抗真菌溶液</td><td>Cellgro</td><td>30004CI</td><td>100x</td></tr><tr><td>C57BL / 6-TMEM119EM2Gfng / J</td><td>ジャクソン研究所</td><td>株#:031823</td><td></td></tr><tr><td>コーニングバイオコートゼラチン75cm&sup2;ベントキャップ付き長方形傾斜ネック細胞培養フラスコ</td><td>Life Technologies</td><td>354488</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp;L-グルタミン、4.5 g/L グルコース、ピルビン酸ナトリウム</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>10013CV</td><td></td></tr><tr><td>カバーガラス</td><td>VWR</td><td>637-137</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #5 鉗子</td><td>ワールド精密機器</td><td>14095</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #7 鉗子</td><td>ワールド精密機器</td><td>14097</td><td></td></tr><tr><td>エンドフリープラスミド マキシキット (10)</td><td>キアゲン</td><td>12362</td><td></td></tr><tr><td>エッペンドルフ&nbsp;スナップキャップ マイクロ遠心分離機 バイオプール セーフロックチューブ</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>22600028</td><td></td></tr><tr><td>フェザー ダブルエッジ 炭素鋼ブレード</td><td>テッド・ペラ社</td><td>121-9</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーバイオ試薬&nbsp;微生物学培地:LBブロス、ミラー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>ヒト組換え抗CD11b抗体</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-120-214</td><td>1:50希釈眼</td></tr><tr><td>内注射器シリンジ(6.5&マイクロ;L)、取り外し可能な針ハ</td><td>ミルトン</td><td>6609071-01</td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen&nbsp;リポフェクタミン3000トランスフェクション試薬&nbsp;</td><td>ライフテクノロジー</td>ズ <td>L3000015</td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen&nbsp;ワンショット TOP10 エレクトロコンプ&nbsp;大腸菌</td><td>フィッシャー科学</td><td>C404052</td><td></td></tr><tr><td>アイリス鉗子</td><td>ワールド精密機器</td><td>15914</td><td></td></tr><tr><td>アイリスハサミ</td><td>ワールド精密機器</td><td>500216</td><td></td></tr><tr><td>レンチウイルス関連 p24 ELISAキット</td><td>Cell Biolabs, inc.</td><td>VPK-107-5</td><td></td></tr><tr><td>Lenti-X コンセントレーター</td><td>宝</td><td>PT4421-2</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 還元血清中</td><td>寿命技術</td><td>11058021</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>PELCO easiSlicer&nbsp;振動組織スライサー</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>11000</td><td></td></tr><tr><td>PELCO&nbsp;プロCA44ティッシュ接着剤</td><td>テッド・ペラ社</td><td>10033</td><td></td></tr><tr><td>ペルコ&nbsp;プロ・プリマウント・レトリーバーズ</td><td>テッド・ペラ</td><td>101-33</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td>ウサギモノクローナル抗 Iba1 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab178847</td><td>1:500 希釈</td></tr><tr><td>RN 圧縮フィッティング 1 mm</td><td>ハミルトン</td><td>55750-01</td><td></td></tr><tr><td>セボフルラン</td><td>メリット 獣医 供給</td><td>347075</td><td></td></tr><tr><td>スプレイグ ドーリー 妊娠中のラット</td><td>Inotiv</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SuperFrost Plus スライド</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12-550-154%&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>To-Pro-3</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>T3605</td><td>核染色キット</td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA (0.25%)、フェノールレッド</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Vannas Scissors</td><td>World Precision Instruments</td><td>500086</td><td></td></tr></tbody></table>

ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコhiv感染細胞の同定

Identification of EcoHIV-Infected Cells in Microglia-Manipulated Transgenic Mice

3'末端に「Cla1」、5'末端に「Not1」の酵素部位を含むmScarlet(1858 bp)の断片をpNL4-3-EcoHIVレンチウイルスベクターに挿入しました(図1)。EcoHIV-mScarletの発現を検証するために、ラットE18胚の皮質から単離された初代脳細胞をEcoHIV-mScarlet(60μL、1.26×106TU /mL)で6日間in vitroで処理しました。 図2 のデータは、mScarletの赤色蛍光シグナルが、異なる細胞形態に基づいて主にグリアタイプの細胞に局在していることを示しました。さらに、CD11b/cおよびIba1(ミクログリアの細胞マーカー)標識は、mScarletシグナルがCD11b/c+および/またはIba1+細胞と共局在していることを示した。データは、ミクログリアが in vitroでのEcoHIV-mScarlet分布の主要な細胞タイプであることを示しました。培養細胞には重大な神経感染はありませんでした(補足図1)。 
次に、EcoHIV-mScarletの感染を成体マウス初代混合グリア細胞で試験しました。そのために、まず混合グリア細胞を成体マウスから単離および精製し(2か月)、EcoHIV-mScarlet(8μL、1.26×106 TU/mL)に2日間感染させました。 図3 の画像は、EcoHIV-mScarletが成体マウスグリアに感染することに成功したことを示しました。
マウス脳におけるEcoHIV-mScarletの分布パターンをさらに解明するために、特に感染細胞型を特定するために、EcoHIV-mScarletを Tmem119-EGFP ノックインマウス系統に眼窩後から注入し、ミクログリアはEGFPシグナルで特異的に標識され、他のマクロファージタイプの競合はありませんでした5。 図4 の結果( 補足図2にも記載)は、EGFP陽性細胞でmScarlet red蛍光シグナルが観察されたことを示しており、マウスの脳におけるEcoHIV発現の主要な細胞タイプとしてミクログリアが示唆されています。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig01.jpg"> 
図1:EcoHIV-NL-4-3-mScarletのベクトルマップ。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig02.jpg"> 
図2:初代ラット脳細胞におけるEcoHIV-mScarlet感染 (A,E)初代脳細胞におけるCD11b/c染色の代表的な画像。脳細胞をE18ラット胚から単離し、EcoHIV-mScarletウイルスに6日間感染させました。(B,F) in vitro 脳細胞からのmScarlet蛍光シグナルの代表的な画像。(C,G)初代脳細胞におけるIba1染色の代表的な画像。(D,H)CD11b/c、mScarlet、Iba1のトリプルラベリングの画像を結合しました。スケールバー:50μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig02large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig03.jpg"> 
図3:初代マウス混合グリア細胞におけるEcoHIV-mScarlet感染 (A,B) in vitroでのmScarlet分布の代表的な共焦点画像。初代混合グリア細胞は、成体C57BL6マウス(生後2ヶ月)から単離し、ウイルス感染の2週間前に培養しました。EcoHIV-mScarletを培地に2日間加え、共焦点顕微鏡の60×対物レンズで画像を撮影しました。スケールバー:10μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig03large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67150/67150fig04.jpg"> 
図4: Tmem119-EGFP ノックインマウス系統におけるEcoHIV-mScarletの分布。 (A,B)脳切片のmScarlet/EGFP/ToPro3シグナルの画像を統合しました。黄色枠部分が(B)の対象エリアを示しています。スケールバー:300μm.(C) Tmem119-EGFP ノックインマウス系統の嗅覚領域の外部プレジカル層におけるmScarlet分布の代表的な画像。(D)EGFP分布の代表画像。蛍光シグナルは、 Tmem119-EGFP ノックインマウス系統のミクログリア細胞に局在しました。(E)TO-PRO-3核染色の代表画像。スケールバー:300μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/67150fig04large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図1:EcoHIV-mScarletウイルスに感染した初代ラット脳細胞のMAP2およびMOG染色。 スケールバー:50μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図2: Tmem119-EGFP ノックインマウス系統におけるEcoHIV-mScarlet感染の共焦点画像。 スケールバー:75μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20Figure%202.zip" target="_blank">ファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足ファイル1:EcoHIV-mScarletプラスミドDNA配列。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67150/Supplementary%20data%20-%20EcoHIV-mScarlet%20plasmid%20DNA%20sequence.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコHIV感染細胞の同定

Combined antiretroviral therapy (cART) has dramatically improved the quality of life for people living with HIV (PLWH). However, over 4 million PLWH are ...

identification-ecohiv-infected-cells-microglia-manipulated-transgenic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ミクログリアは中枢神経系の防衛と免疫監視の最初の行を提供するマクロファージを常駐しています。...

ノーマルCNSのリアルタイムPCRによると神経炎症時のミクログリアにおけるマイクロRNAの検出

私たちは、新生児の大脳皮質および成体脊髄から実行可能なミクログリアの効率的かつ迅速に分離/培養のための方法を概説します。皮質ミクログリアの解剖とメッキが行われて、その後のミクログリアの収穫で、90分以内に達成することができます〜初期切開後10日。...

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ミクログリア生物学の成功の調査の一つの鍵は、CNS組織からの単離の間にex vivoでミクログリア免疫機能の維持である。蛍光イメージング、免疫細胞、および炎症誘発性刺激リポ多糖（LPS）とパム3 CSK 4（PAM）を用いたELISA次のミクログリアの活性化によって評価されるように、高純度と免疫機能細胞培養で回転振盪結果を経由してミクログリアを分離する。...

マウス新生児から保護免疫表現と機能皮質ミクログリアの分離

ミクログリアの活性化および小膠は、慢性神経変性に重要な応答です。ここでは、in vivoで 、共焦点検眼鏡による網膜CX3CR1-GFP +ミクログリア細胞の長期的な可視化のための方法を提示し、閾値と形態計測のために識別し、それらの活性化を定量化するために分析します。我々は、年齢関連の緑内障の早期の段階でミクログリアの変化を監視します。...

共焦点検眼鏡イメージングとマウス緑内障における細胞の形態計測：神経変性中に網膜ミクログリアの活性化のインビボダイナミクス

特性と密度勾配遠心によるマウスのプライマリ ミクログリアの分離

ここに提示されたプロトコールは、免疫適格マウスにおける鼻腔内経路を介して誘導多能性幹細胞由来ヒトミクログリア(iPSMG)の脳への移植を可能にする。iPSMGの維持のための細胞の調製および経鼻移植ならびにサイトカイン混合物の投与のための方法が示されている。...

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この研究は、単離された脳ミクログリアにおける核内フローサイトメトリーを用いた全体的なヒストン修飾の定量化のためのプロトコルについて説明しています。この研究には、データ収集に使用されたミクログリア分離プロトコルも含まれています。...

単離マウス脳ミクログリアにおける核内フローサイトメトリーを用いたグローバルヒストン翻訳後修飾の定量化

私たちは、磁気活性化セルソーティング(MACS)を使用して、マウスの視床下部(または同等の小さな脳構造)からミクログリア細胞を比較的短時間で単離するためのプロトコルについて説明します。MACSで選別された視床下部ミクログリアは、 ex vivo 分析に使用でき、 in vitro...

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離  

本論文は、スピニングディスク共焦点顕微鏡を用いて網膜におけるミクリアの運動性とシナプス後点との接触を可視化・定量化する方法を示します。...

病変マウス網膜におけるミクログリアの動態およびシナプスとの相互作用のライブイメージングおよび特徴付け

このプロトコルは、フローサイトメトリーとシングルセルRNAシーケンシングを組み合わせて、出生後早期マウス脳の小脳におけるミクログリア細胞の状態を単離し、特徴付けます。酵素解離、パーコール遠心分離、免疫染色を使用してミクログリアの不均一性を明らかにし、小脳の発達と疾患におけるミクログリアの役割の理解を深めます。...

出生後早期マウス脳発生におけるミクログリア活性化を特徴付けるためのフローサイトメトリーと単一細胞解析

学ぶEcoHIV感染トランスジェニックマウスを用いたミクログリア操作とウイルス貯蔵庫の同定法。HIV関連神経認知障害におけるミクログリアの役割と脳内ウイルス分布を可視化する手法です。

ミクログリア操作トランスジェニックマウスにおけるエコHIV感染細胞の同定

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