Name: フィブロネクチン接着および回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 9 s
Description: 学ぶ フィブロネクチン接着アッセイと回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離法。ヒト関節軟骨から酵素消化で細胞を分離し、再生医療への応用を探索する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>ヒト関節軟骨からの軟骨原生細胞および軟骨細胞の単離

<ol><li>Muthu, S., Visawanathan, V., Chellamuthu, G., Thabrez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+effectiveness+of+various+treatments+for+cartilage+defects+compared+to+microfracture%3A+A+network+meta-analysis+of+randomized+controlled+trials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cartilage+Joint+Preserv%22%5BJournal%5D)">Clinical effectiveness of various treatments for cartilage defects compared to microfracture: A network meta-analysis of randomized controlled trials.</a> J Cartilage Joint Preserv. 4 (2), 100163(2023).</li>
<li>Sophia Fox, A. J., Bedi, A., Rodeo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+science+of+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Health%22%5BJournal%5D)">The basic science of articular cartilage.</a> Sports Health. 1 (6), 461-468 (2009).</li>
<li>Brittberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+articular+cartilage+repair-An+up-to-date+review%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Joint%22%5BJournal%5D)">Clinical articular cartilage repair-An up-to-date review.</a> Annals of Joint. 3 (0), (2018).</li>
<li>Muthu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Failure+of+cartilage+regeneration%3A+emerging+hypotheses+and+related+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Failure of cartilage regeneration: emerging hypotheses and related therapeutic strategies.</a> Nat Rev Rheumatol. 19 (7), 403-416 (2023).</li>
<li>Lavrentieva, A., Hatlapatka, T., Neumann, A., Weyand, B., Kasper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+osteogenic+and+chondrogenic+differentiation+of+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Biochem+Eng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Potential for osteogenic and chondrogenic differentiation of MSC.</a> Adv Biochem Eng Biotechnol. 129, 73-88 (2013).</li>
<li>Fernandez-Moure, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+osteogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+cortical+bone%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Enhanced osteogenic potential of mesenchymal stem cells from cortical bone: a comparative analysis.</a> Stem Cell Res Ther. 6, 203(2015).</li>
<li>Goldberg, A., Mitchell, K., Soans, J., Kim, L., Zaidi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+mesenchymal+stem+cells+for+cartilage+repair+and+regeneration%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The use of mesenchymal stem cells for cartilage repair and regeneration: a systematic review.</a> J Orthop Surg Res. 12, 39(2017).</li>
<li>Zha, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells+in+cartilage+regeneration%3A+From+characterization+to+application%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of mesenchymal stem cells in cartilage regeneration: From characterization to application.</a> NPJ Regen Med. 6 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Hayes, A. J., Tudor, D., Nowell, M. A., Caterson, B., Hughes, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondroitin+Sulfate+sulfation+motifs+as+putative+biomarkers+for+isolation+of+articular+cartilage+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Chondroitin Sulfate sulfation motifs as putative biomarkers for isolation of articular cartilage progenitor cells.</a> J Histochem Cytochem. 56 (2), 125-138 (2008).</li>
<li>Dowthwaite, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+surface+of+articular+cartilage+contains+a+progenitor+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The surface of articular cartilage contains a progenitor cell population.</a> J Cell Sci. 117 (Pt 6), 889-897 (2004).</li>
<li>Williams, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+clonal+characterization+of+a+progenitor+cell+sub-population+in+normal+human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Identification and clonal characterization of a progenitor cell sub-population in normal human articular cartilage.</a> PloS One. 5 (10), e13246(2010).</li>
<li>Vinod, E., Parameswaran, R., Ramasamy, B., Kachroo, U. Pondering the potential of hyaline cartilage-derived chondroprogenitors for tissue regeneration: A systematic review. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2020).</li>
<li>Khan, I. M., Bishop, J. C., Gilbert, S., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+chondroprogenitors+maintain+telomerase+activity+and+Sox9+expression+during+extended+monolayer+culture+and+retain+chondrogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Clonal chondroprogenitors maintain telomerase activity and Sox9 expression during extended monolayer culture and retain chondrogenic potential.</a> Osteoarthritis Cartilage. 17 (4), 518-528 (2009).</li>
<li>Fellows, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+divergent+progenitor+cell+sub-populations+in+human+osteoarthritic+cartilage%3A+the+role+of+telomere+erosion+and+replicative+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Characterization of a divergent progenitor cell sub-populations in human osteoarthritic cartilage: the role of telomere erosion and replicative senescence.</a> Sci Rep. 7, 41421(2017).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Amirtham, S. M., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+fresh+chondrocytes%2C+cultured+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of fresh chondrocytes, cultured chondrocytes and chondroprogenitors derived from human articular cartilage.</a> Acta Histochem. 122 (1), 151462(2019).</li>
<li>Korpershoek, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+highly+proliferative+and+multipotent+meniscus+progenitors+through+differential+adhesion+to+Fibronectin%3A+A+novel+approach+in+meniscus+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Selection of highly proliferative and multipotent meniscus progenitors through differential adhesion to Fibronectin: A novel approach in meniscus tissue engineering.</a> Int J Mol Sci. 22 (16), 8614(2021).</li>
<li>Wang, J., Roberts, S., Li, W., Wright, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+regional+human+meniscus+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of regional human meniscus progenitor cells.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 1003966(2022).</li>
<li>Koelling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondrogenic+progenitor+cells+from+repair+tissue+during+the+later+stages+of+human+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Migratory chondrogenic progenitor cells from repair tissue during the later stages of human osteoarthritis.</a> Cell Stem Cell. 4 (4), 324-335 (2009).</li>
<li>Seol, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenic+progenitor+cells+respond+to+cartilage+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Chondrogenic progenitor cells respond to cartilage injury.</a> Arthritis Rheum. 64 (11), 3626-3637 (2012).</li>
<li>Xue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+stem+cells+in+different+subtypes+of+cartilage+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of stem cells in different subtypes of cartilage tissue.</a> Expert Opin Biol Ther. 15 (5), 623-632 (2015).</li>
<li>McCarthy, H. E., Bara, J. J., Brakspear, K., Singhrao, S. K., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+comparison+of+equine+articular+cartilage+progenitor+cells+and+bone+marrow-derived+stromal+cells+as+potential+cell+sources+for+cartilage+repair+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+J%22%5BJournal%5D)">The comparison of equine articular cartilage progenitor cells and bone marrow-derived stromal cells as potential cell sources for cartilage repair in the horse.</a> Vet J. 192 (3), 345-351 (2012).</li>
<li>Elsaesser, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+migrative+subpopulation+of+adult+human+nasoseptal+chondrocytes+with+progenitor+cell+features+and+their+potential+for+in+vivo+cartilage+regeneration+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+%26+Biosci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a migrative subpopulation of adult human nasoseptal chondrocytes with progenitor cell features and their potential for in vivo cartilage regeneration strategies.</a> Cell & Biosci. 6, 11(2016).</li>
<li>Batschkus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+secretome+of+human+chondrogenic+progenitor+cells+with+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">Mapping the secretome of human chondrogenic progenitor cells with mass spectrometry.</a> Ann Anat. 212, 4-10 (2017).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondroprogenitors+retain+superior+intrinsic+chondrogenic+potential+for+regenerative+cartilage+repair+as+compared+to+human+fibronectin-derived+chondroprogenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Migratory chondroprogenitors retain superior intrinsic chondrogenic potential for regenerative cartilage repair as compared to human fibronectin-derived chondroprogenitors.</a> Sci Rep. 11, 23685(2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraarticular+injection+of+allogenic+chondroprogenitors+for+treatment+of+osteoarthritis+in+rabbit+knee+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Orthop+Trauma%22%5BJournal%5D)">Intraarticular injection of allogenic chondroprogenitors for treatment of osteoarthritis in rabbit knee model.</a> J Clin Orthop Trauma. 10 (1), 16-23 (2018).</li>
<li>Xue, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cartilage+progenitor+cells+combined+with+PHBV+in+cartilage+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Cartilage progenitor cells combined with PHBV in cartilage tissue engineering.</a> J Trans Med. 17 (1), 104(2019).</li>
<li>Carluccio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progenitor+cells+activated+by+platelet+lysate+in+human+articular+cartilage+as+a+tool+for+future+cartilage+engineering+and+reparative+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Progenitor cells activated by platelet lysate in human articular cartilage as a tool for future cartilage engineering and reparative strategies.</a> Cells. 9 (4), E1052(2020).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+delivery+of+extracellular+vesicles+secreted+by+chondrogenic+progenitor+cells+from+MRL%2FMpJ+superhealer+mice+enhances+articular+cartilage+repair+in+a+mouse+injury+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-articular delivery of extracellular vesicles secreted by chondrogenic progenitor cells from MRL/MpJ superhealer mice enhances articular cartilage repair in a mouse injury model.</a> Stem Cell Res Ther. 11 (1), 93(2020).</li>
<li>Wang, H. C., Lin, T. H., Hsu, C. C., Yeh, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoring+osteochondral+defects+through+the+differentiation+potential+of+cartilage+stem%2Fprogenitor+cells+cultivated+on+porous+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Restoring osteochondral defects through the differentiation potential of cartilage stem/progenitor cells cultivated on porous scaffolds.</a> Cells. 10 (12), 3536(2021).</li>
<li>Kellgren, J. H., Lawrence, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiological+assessment+of+osteo-arthrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Radiological assessment of osteo-arthrosis.</a> Ann Rheum Dis. 16 (4), 494-502 (1957).</li>
<li>Vinod, E., Kachroo, U., Rebekah, G., Yadav, B. K., Ramasamy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+articular+chondrocytes+and+chondroprogenitors+derived+from+non-diseased+and+osteoarthritic+knee+joints+to+assess+superiority+for+cell-based+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Characterization of human articular chondrocytes and chondroprogenitors derived from non-diseased and osteoarthritic knee joints to assess superiority for cell-based therapy.</a> Acta Histochem. 122 (6), 151588(2020).</li>
<li>Nelson, L., McCarthy, H. E., Fairclough, J., Williams, R., Archer, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+viable+pool+of+stem+cells+within+human+osteoarthritic+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Cartilage%22%5BJournal%5D)">Evidence of a viable pool of stem cells within human osteoarthritic cartilage.</a> Cartilage. 5 (4), 203-214 (2014).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+methods+for+the+isolation+and+culture+of+Migratory+chondroprogenitors+from+Human+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of methods for the isolation and culture of Migratory chondroprogenitors from Human articular cartilage.</a> Connect Tissue Res. 64 (4), 389-399 (2023).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).</li>
<li>Vinod, E., Boopalan, P. R. J. V. C., Sathishkumar, S. Reserve or resident progenitors in cartilage? Comparative analysis of chondrocytes versus chondroprogenitors and their role in cartilage repair. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2017).</li>
<li>Dicks, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+isolation+of+chondroprogenitors+from+human+iPSCs+based+on+cell+surface+markers+identified+using+a+CRISPR-Cas9-generated+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Prospective isolation of chondroprogenitors from human iPSCs based on cell surface markers identified using a CRISPR-Cas9-generated reporter.</a> Stem Cell Res Ther. 11 (1), 66(2020).</li>
<li>Vinod, E., et al. Prospective isolation and characterization of chondroprogenitors from human chondrocytes based on CD166/CD34/CD146 surface markers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVinod%2C+E+%22Cartilage%22">Cartilage</a>. , (2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migratory+chondroprogenitors+retain+superior+intrinsic+chondrogenic+potential+for+regenerative+cartilage+repair+as+compared+to+human+Fibronectin-derived+chondroprogenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Migratory chondroprogenitors retain superior intrinsic chondrogenic potential for regenerative cartilage repair as compared to human Fibronectin-derived chondroprogenitors.</a> Sci Rep. 11 (1), 23685(2021).</li>
<li>Vinod, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+fetal+cartilage-derived+chondrocytes+and+chondroprogenitors+display+a+greater+commitment+to+chondrogenesis+than+adult+cartilage+resident+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Human fetal cartilage-derived chondrocytes and chondroprogenitors display a greater commitment to chondrogenesis than adult cartilage resident cells.</a> PloS One. 18 (4), e0285106(2023).</li>
<li>Joos, H., Wildner, A., Hogrefe, C., Reichel, H., Brenner, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1+beta+and+tumor+necrosis+factor-alpha+inhibit+migration+activity+of+chondrogenic+progenitor+cells+from+non-fibrillated+osteoarthritic+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1 beta and tumor necrosis factor-alpha inhibit migration activity of chondrogenic progenitor cells from non-fibrillated osteoarthritic cartilage.</a> Arthritis Res Ther. 15 (5), R119(2013).</li>
<li>Vinod, E., Parameswaran, R., Amirtham, S. M., Rebekah, G., Kachroo, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+human+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells%2C+articular+cartilage+derived+chondroprogenitors+and+chondrocytes+to+determine+cell+superiority+for+cartilage+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of human bone marrow mesenchymal stem cells, articular cartilage derived chondroprogenitors and chondrocytes to determine cell superiority for cartilage regeneration.</a> Acta Histochem. 123 (4), 151713(2021).</li>
<li>Vinod, E., Padmaja, K., Ramasamy, B., Sathishkumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+articular+cartilage+derived+chondroprogenitors+for+cartilage+repair+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthopaed%22%5BJournal%5D)">Systematic review of articular cartilage derived chondroprogenitors for cartilage repair in animal models.</a> J Orthopaed. 35, 43-53 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>22メス刃&nbsp;</td><td>GLASS VAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6ウェルプレート&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>アルシアンブルー</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>J6012</td><td></td></tr><tr><td>アリザリンレッド&nbsp;</td><td>SIGMA</td><td>130223</td><td></td></tr><tr><td>アムホテリシン-B (2 &mu;g/mL)です。</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>アスコルビン酸 (62 &mu;g/mL)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>A4544-25G</td><td></td></tr><tr><td>BC CytoFLEX LX フローサイトメーター&nbsp;</td><td>BECKMAN COULTER</td><td>CYTExpert Software Version 2.5</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SIGMA ALDRICH&</td><td>nbsp;C34006</td><td></td></tr><tr><td>CD105-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 561443 <tr><td>CD106-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 551147 <tr><td>CD14-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 555397 <tr><td>CD29-APC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 559883 <tr><td>CD34-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 348057 <tr><td>CD45-FITC</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td> 347463</tr><tr><td>CD49b-FITC</td><td>ミルテニルバイオテック</td><td>&nbsp;MACS 130/100337</td><td></td></tr><tr><td>CD49e-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 555617 <tr><td>CD73-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td></td><td></td></tr> 550257 <tr><td>CD90-PE</td><td>BD BIOSCIENCE</td><td>561970</td><td></td></tr><tr><td>セルカウンター</td><td>DE NOVIX</td><td>セルドロップ BF</td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー</td><td>HIMEDIA</td><td>TCP024</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>ベックマン・コールター</td><td>アレグラ X-30R</td><td></td></tr><tr><td>CO2インキュベーター&nbsp;</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>MODEL-371</td><td></td></tr><tr><td>コラーゲンX型(COL10A1)、ラント関連転写因子(RUNX2)、SRY-Box転写因子9(SOX-9)、アグリカン(ACAN)、およびコラーゲンII型(COL2A1)&nbsp;</td><td>EUROGENTEC, BELGIUM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼII型</td><td>WORTHINGTON</td><td>LS004176</td><td></td></tr><tr><td>DMEM F-12 (Dulbecco's Modified Eagle's Medium F-12)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>D8900-1L</td><td></td></tr><tr><td>ELISAプレートリーダー</td><td>MOLECULAR DEVICES</td><td>SpectraMax i3x Reader</td><td></td></tr><tr><td>Fast Green</td><td>FISHER SIENTIFIC</td><td>2353459</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>GIBCO</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>FGF2</td><td>CLOUD CLONE CORP</td><td>APA551Hu01</td><td></td></tr><tr><td>フィブロネクチン (10 &micro;L/mL)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>F1141</td><td></td></tr><tr><td>First-Strand synthesis system</td><td>TAKARA BIO</td><td>6110A</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>GIBCO</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39411</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&nbsp;</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>M8787</td><td></td></tr><tr><td>オイルレッド O</td><td>SIGMA</td><td>1320065</td><td></td></tr><tr><td>PBS (リン酸緩衝生理食塩水)</td><td>GIBCO</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>PCR サーモサイクラー&nbsp;</td><td>APPLIED BIOSYSTEMS</td><td>Quantstudio 12K Flex サーモサイクラー&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (100 IU/mL)</td><td>GIBCO</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Picrosirius Red</td><td>ALFA AESAR</td><td>2610108</td><td></td></tr><tr><td>一次抗体 (マウス コラーゲン II 型)</td><td>DSHB</td><td>DSHB II II6B3</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>ROCHE</td><td>10165913103</td><td></td></tr><tr><td>Quant-iT Picogreen dsDNA 試薬</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>P7589</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵庫</td><td>ELANPRO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNeasy MiniKit</td><td>QIAGEN</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Safranin O</td><td>QUALIGENS</td><td>Q39962</td><td></td></tr><tr><td>二次抗体 (ヤギ抗マウスIgG抗体、HRPコンジュゲート)</td><td>THERMO SCIENTIFIC</td><td>31430</td><td></td></tr><tr><td>振とう水浴&nbsp;</td><td>REMI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StemProの差別化キット&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>1007201、A1007001、A1007101</td><td></td></tr><tr><td>T-25フラスコ&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>タキョンTMローロックスSYBRマスターミックスdTTPブルー&nbsp;</td><td>ユーロジェンテック</td><td>UF-LSMT-B0701</td><td></td></tr><tr><td>TGF&BETA;</td><td>ABCAM</td><td>ab277760</td><td></td></tr>組織<tr><td>培養ペトリディッシュ</td><td>ターソンズ</td><td>960010</td><td></td></tr><tr><td>トルイジン</td><td>ブルーQUALIGENS</td><td>2040</td><td></td></tr><tr><td>トリファンブルー&nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>トリプシンEDTA</td><td>GIBCO</td><td>25200072</td><td></td></tr></tbody></table>

フィブロネクチン接着および回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離

Isolation of Chondrocytes and Chondroprogenitors Using Fibronectin Adhesion and Migratory Assay

86.9mgの軟骨スライスから、1.72×105 細胞の軟骨細胞収量が認められた。ロードすると、軟骨細胞はすぐに付着し、最初は丸みを帯びた丸石の外観を示し、さらに拡大すると線維芽細胞状態に変化します(図1 A、B)。これらの軟骨細胞をフィブロネクチンプレートに播種すると、通常、2%の接着が得られ、各細胞はクローン増殖を起こし(図2 C、D)、10〜12日目までに集団が5倍になります(32細胞/クローン)。10 cm²の領域内のクローンは、FAA-CPを生成するために必要な通路に結合され、拡張されます。コラゲナーゼインキュベーション後の培養物で維持される軟骨外植片は、細胞外マトリックスのゆるみを示し、移動は通常、7日目 という早い時期に観察されます(図2E)。FAA-CPとMCPはどちらも、BM-MSCに一般的に関連する特性である紡錘形の構造を示し、合流する前にハニカム状の構造を獲得します(図1E、F)。
単離された細胞、すなわち軟骨細胞、FAA-CP、およびMCPの3種類は、位相差イメージングを使用して綿密に監視されます。FAA-CPは、5回の人口倍増が確認された後にのみ転送されます。
単離および増殖した細胞の表現型特性評価には、通常、軟骨形成の推定マーカー、すなわちCD146およびCD166のフローサイトメトリー解析、ならびに軟骨形成のマーカー(SOX-9、ACAN、COL2A1)、線維軟骨マーカーCOL1A1、および肥大のマーカー(RUNX2およびCOL10A1)の遺伝子発現解析が含まれます。3つの細胞グループはすべて、CD105、CD73、およびCD90の高発現(&gt;95%)を示します。CD34およびCD45の低発現から陰性発現;CD166の高発現(&gt;98%)、CD146の中程度のドナー依存性発現(40%-75%)(図2A)。
qRT-PCRの結果は、評価前に細胞を培養するため、SOX-9、ACAN、および線維軟骨マーカーであるCOL1A1の発現が同等かつ高いことを示しています(図2B)。軟骨形成の確認のために、サフラニンOに続くGAG含有領域における橙赤色複合体の陽性取り込み、およびアルシアンブルーおよびトルイジンブルーに続く青みがかった紫色を有する複合体の陽性取り込みがすべての細胞群で観察され、FAA-CPおよびMCPグループでより高い割合が観察される。Collagen type IIの軟骨原性分化ペレットの免疫組織化学解析では、3つのグループすべてで茶色がかった線維性の取り込みが示されました(図3)。さらに、GAG/DNA解析では、FAA-CPグループの方が高発現を示す軟骨原性分化が確認されました(図2C)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig01.jpg"> 
図1:軟骨細胞と軟骨形成細胞の単離と特性評価。 この研究アルゴリズムは、3つの細胞群の単離とその形態学的特徴を、単離直後と数日間の増殖後の位相差顕微鏡下で示しています。(A)新たに単離された軟骨細胞は、培養の初期に接着培養物に付着し、さらに拡大すると線維芽細胞様の外観を獲得する(B)。(C)フィブロネクチン接着アッセイを受けた軟骨細胞はクローン性の成長を示し、10日目までに5の倍増に達する(D)。(E)軟骨形成体は、培養の10日目までに外植片の端から移動し、さらに拡大する紡錘形の成長パターンを示します(F)。位相差画像倍率:10倍。スケールバー:100μmこの <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig01large.jpg" target="_blank">図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig02.jpg"> 
図2:分子特性評価データ(A)陽性および陰性のMSCマーカーおよび潜在的な軟骨形成マーカーのフローサイトメトリー解析。(B)軟骨形成マーカーおよび肥大マーカーの遺伝子発現解析のための3つの細胞群のRT-PCR発現データ。(C)軟骨原性分化ペレットの全GAG/DNA解析。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67160/67160fig03.jpg"> 
図3:軟骨分化後の確認染色。 3つの細胞群間のII型コラーゲンのサフラニンOおよび免疫組織化学的分析。スケールバー:10倍倍、50μm。40倍倍、200μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67160/67160fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

Chondroprogenitor cells (CPCs), recently identified as a distinct subpopulation, exhibit promise due to their mesenchymal properties, heightened ...

isolation-chondrocytes-chondroprogenitors-using-fibronectin-adhesion

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

滑液の高濃度の培養ヒト関節軟骨細胞の3次元システムについて説明する。滑液は関節軟骨のための最も自然な微小環境を反映し、容易に入手し、保存することができます。このシステムは、このように軟骨再生の研究や、関節炎を治療するための治療薬をスクリーニングするために使用することができます。...

滑液における培養ヒト関節軟骨細胞用の3Dシステム

軟骨細胞による軟骨細胞外基質の生合成は、機械的刺激を印加することによって影響を受けることができます。このメソッドは、3Dコンストラクトおよび軟骨代謝の誘導された変化の評価にカプセル化された軟骨細胞への動的圧縮歪みを適用する方法について説明します。...

軟骨アガロースゲルの機械的刺激

軟骨修復は満たされていない医学的課題であり、ヒトの関節軟骨を操作するための細胞ベースのアプローチは有望な解決策です。ここでは、ヒト関節軟骨細胞の拡大と成熟のための理想的なツールとして、3次元(3D)生体模倣ハイドロゲルについて説明します。...

関節軟骨細胞培養軟骨の生成のための3Dハイドロゲルの足場

我々は、胚様体（EB）形成、線維芽細胞増殖および軟骨形成誘導を含む無組み込み法を用いて、誘導末梢血（PB）から誘導された多能性幹細胞（iPSC）を介して軟骨系統を生成するためのプロトコールを提示する。...

末梢血由来ヒト誘導多能性幹細胞からの軟骨細胞の分化

アルギニン-グリシン-アスパラギン酸 (RGD) 表面の局所密度のナノスケール制御を許可、デンドリマーを用いた不均一な nanopatterns...

ローカル制御表面密着性にデンドリマーを用いた不均一な Nanopatterns: 軟骨細胞分化を指示する方法

線維芽細胞の純粋な集団を得ることは、創傷修復および線維化におけるその役割を研究するために重要である。ここでは、線維芽細胞と筋線維芽細胞を、傷つけていないマウスの心臓から分離し、その後、免疫蛍光、RTPCR、蛍光支援細胞選別による純度と機能性の特徴付け、およびコラーゲンゲル収縮。...

成人心臓線維芽細胞と筋線維芽細胞の分離と特徴付け

膝下脂肪パッド間葉系幹細胞(IFP-MSC)は、膝関節の膝蓋下脂肪パッドから容易に単離することができる。それらは in...

ヤギ窒息関節の膝蓋下脂肪パッドからの間葉系幹細胞の単離、増殖、および分化

本研究では、重力を利用して低接着条件下で細胞をスフェロイドに凝集させ、得られたスフェロイドをミニバイオリアクターで培養することにより、軟骨球性スフェロイドを作製する方法について述べています。...

重力下での低接着条件と自家製ミニバイオリアクターを用いた種々の軟骨細胞からのスフェロイド作製

我々は、侵襲と偽菌糸分化の尺度としての酵母の付着と寒天の侵略のための定性分析について説明します。この簡単なアッセイは、様々な変異体と同様に酵母の分化への影響、環境手がかりとシグナル伝達経路の侵襲的な表現型を評価するために使用することができます。...

S. cerevisiaeの接着と寒天の侵略のためのアッセイ

自分の眉製の特殊な解剖ツール -...

アフリカツメガエルの胚および細胞接着アッセイのアセンブリから主催し、動物極の外植片の解剖

学ぶ フィブロネクチン接着アッセイと回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離法。ヒト関節軟骨から酵素消化で細胞を分離し、再生医療への応用を探索する。

フィブロネクチン接着および回遊アッセイを用いた軟骨細胞および軟骨形成細胞の単離

さらに動画を探す