Name: インプラント表面上のM1およびM2ヒト単球由来マクロファージの分極と特性評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-06T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: 学ぶインプラント表面でのヒト単球由来マクロファージのM1/M2分極と特性評価プロトコル。qRT-PCR、ELISA、CLSMを用いてサイトカイン発現と細胞表面マーカーを解析し、組織再生を促進する免疫調節材料の設計に貢献します。

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<meta charset="utf8"></head><body>マクロファージに対するインプラント表面の免疫調節効果の評価

<ol><li>Othman, Z., Pastor, B. C., van Rijt, S., Habibovic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+interactions+between+biomaterials+and+biological+systems+using+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding interactions between biomaterials and biological systems using proteomics.</a> Biomaterials. 167, 191-204 (2018).</li>
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<li>Aamodt, J. M., Grainger, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-based+biomaterial+scaffolds+and+the+host+response%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-based biomaterial scaffolds and the host response.</a> Biomaterials. 86, 68-82 (2016).</li>
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<li>Mantovani, A., Biswas, S. K., Galdiero, M. R., Sica, A., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity+and+polarization+in+tissue+repair+and+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity and polarization in tissue repair and remodelling.</a> J Pathol. 229 (2), 176-185 (2013).</li>
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<li>Murray, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+activation+and+polarization%3A+nomenclature+and+experimental+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophage activation and polarization: nomenclature and experimental guidelines.</a> Immunity. 41 (1), 14-20 (2014).</li>
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<li>Browne, S., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial-mediated+modification+of+the+local+inflammatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Biomaterial-mediated modification of the local inflammatory environment.</a> Front Bioeng Biotechnol. 3, 67(2015).</li>
<li>Piatnitskaia, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+of+macrophage+responses+to+biomaterials+in+vitro%3A+state-of-the-art+and+the+need+for+the+improvement%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Modelling of macrophage responses to biomaterials in vitro: state-of-the-art and the need for the improvement.</a> Front Immunol. 15, 1349461(2024).</li>
<li>Rayahin, J. E., Gemeinhart, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+macrophages+in+response+to+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Results+Probl+Cell+Differ%22%5BJournal%5D)">Activation of macrophages in response to biomaterials.</a> Results Probl Cell Differ. 62, 317-351 (2017).</li>
<li>Murray, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Gordon, S., Pluddemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+macrophages%3A+heterogeneity+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Tissue macrophages: heterogeneity and functions.</a> BMC Biol. 15 (1), 53(2017).</li>
<li>Salma Iqbal, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+in+vitro+generated+human+polarized+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">Characterization of in vitro generated human polarized macrophages.</a> J Clin Cell Immunol. 6, 1-8 (2015).</li>
<li>Hotchkiss, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surface+characteristics%2C+including+topography+and+wettability%2C+alter+macrophage+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Titanium surface characteristics, including topography and wettability, alter macrophage activation.</a> Acta Biomater. 31, 425-434 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Zhang, Y., Sculean, A., Bosshardt, D. D., Miron, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+behavior+and+interplay+with+gingival+fibroblasts+cultured+on+six+commercially+available+titanium%2C+zirconium%2C+and+titanium-zirconium+dental+implants%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Investig%22%5BJournal%5D)">Macrophage behavior and interplay with gingival fibroblasts cultured on six commercially available titanium, zirconium, and titanium-zirconium dental implants.</a> Clin Oral Investig. 23 (8), 3219-3227 (2019).</li>
<li>Abaricia, J. O., Shah, A. H., Ruzga, M. N., Olivares-Navarrete, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+characteristics+on+commercial+dental+implants+differentially+activate+macrophages+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oral+Implants+Res%22%5BJournal%5D)">Surface characteristics on commercial dental implants differentially activate macrophages in vitro and in vivo.</a> Clin Oral Implants Res. 32 (4), 487-497 (2021).</li>
<li>Lu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+osseointegration+of+strontium-modified+titanium+implants+by+regulating+angiogenesis+and+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Improved osseointegration of strontium-modified titanium implants by regulating angiogenesis and macrophage polarization.</a> Biomater Sci. 10 (9), 2198-2214 (2022).</li>
<li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obstacles+and+opportunities+for+understanding+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Obstacles and opportunities for understanding macrophage polarization.</a> J Leukoc Biol. 89 (4), 557-563 (2011).</li>
<li>Nascimento, C. R., Fernandes, N. A. R., Maldonado, L. A. G., Junior, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+monocytic+cell+lines+U937+and+THP-1+as+macrophage+models+for+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Rep%22%5BJournal%5D)">Comparison of monocytic cell lines U937 and THP-1 as macrophage models for in vitro studies.</a> Biochem Biophys Rep. 32, 101383(2022).</li>
<li>Freytes, D. O., Kang, J. W., Marcos-Campos, I., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+modulate+the+viability+and+growth+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Macrophages modulate the viability and growth of human mesenchymal stem cells.</a> J Cell Biochem. 114 (1), 220-229 (2013).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+type+modulates+osteogenic+differentiation+of+adipose+tissue+MSCs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Macrophage type modulates osteogenic differentiation of adipose tissue MSCs.</a> Cell Tissue Res. 369 (2), 273-286 (2017).</li>
<li>Cerqueira, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+inflammatory+responses+to+sol-gel+coatings+with+distinct+biocompatibility+levels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Mater+Res+A%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the inflammatory responses to sol-gel coatings with distinct biocompatibility levels.</a> J Biomed Mater Res A. 109 (9), 1539-1548 (2021).</li>
<li>Zhang, Y., Cheng, X., Jansen, J. A., Yang, F., van den Beucken, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Titanium+surfaces+characteristics+modulate+macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Sci+Eng+C+Mater+Biol+Appl%22%5BJournal%5D)">Titanium surfaces characteristics modulate macrophage polarization.</a> Mater Sci Eng C Mater Biol Appl. 95, 143-151 (2019).</li>
<li>Nobs, S. P., Kopf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+macrophages%3A+guardians+of+organ+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident macrophages: guardians of organ homeostasis.</a> Trends Immunol. 42 (6), 495-507 (2021).</li>
<li>Sreejit, G., Fleetwood, A., Murphy, A., Nagareddy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origins+and+diversity+of+macrophages+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Immunology%22%5BJournal%5D)">Origins and diversity of macrophages in health and disease.</a> Clin Transl Immunology. 9 (12), e1222(2020).</li>
<li>Parisi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+human+primary+macrophages+to+study+the+polarization+from+monocyte-derived+macrophages+to+pro-or+anti-inflammatory+macrophages+at+biomaterial+interface+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Sci%22%5BJournal%5D)">Preparation of human primary macrophages to study the polarization from monocyte-derived macrophages to pro-or anti-inflammatory macrophages at biomaterial interface in vitro.</a> J Dent Sci. 18 (4), 1630-1637 (2023).</li>
<li>Feuerer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+retrieval+from+3D+biomaterials%3A+A+detailed+comparison+of+common+dissociation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Macrophage retrieval from 3D biomaterials: A detailed comparison of common dissociation methods.</a> J Immunol Regen Med. 11, 100035(2021).</li>
<li>Shapouri-Moghaddam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+plasticity%2C+polarization%2C+and+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage plasticity, polarization, and function in health and disease.</a> J Cell Physiol. 233 (9), 6425-6440 (2018).</li>
<li>Sridharan, R., Cameron, A. R., Kelly, D. J., Kearney, C. J., O'Brien, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomaterial+based+modulation+of+macrophage+polarization%3A+a+review+and+suggested+design+principles%5BTitle%5D)+AND+%22Mater+Today%22%5BJournal%5D)">Biomaterial based modulation of macrophage polarization: a review and suggested design principles.</a> Mater Today. 18 (6), 313-325 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24ウェルプレート、未処理</td>の<td>Corning Incorporated(米国、ケネバンク)&nbsp;</td><td>144530</td><td></td></tr><tr><td>吸光度リーダー Infinite F50&nbsp;</td><td>TECAN Austria GmbH (Gr&ouml;dig, Austria)</td><td>TCAT91000001</td><td></td></tr><tr><td>Accutase in DPBS, 0.5 mM EDTA</td><td>EMD Millipore Corp. (Burlington, USA)</td><td>SCR005</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Fade Fluorescence Mounting Medium -Aqueous, Fluoroshield</td><td>abcam (Cambridge, UK)</td><td>ab104135</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad MJ Research PTC-200 Peltier Thermal Cycler</td><td>Bio-Rad / MJ Research</td><td>7212</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>VWR International bvba (Leuven, Belgium)</td><td>422361V</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5804 R</td><td>Eppendorf SE (Hamburg, Germany)</td><td>5804 R DC-SIGN</td><td></td></tr><tr><td>(D7F5C) XP Rabbit mAb</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>13193</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Sigma Aldrich Co. (St.Louis, MO, USA)</td><td>D2438-5X10ML</td><td></td></tr><tr><td>DRAQ5 Staining Solution</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Germany)</td><td>130-117-344</td><td></td></tr>エ<tr><td>タノール&ge;分子生物学Carl</td><td>Roth GmbH + CO. KG(カールスルーエ、ドイツ)</td><td>1HPH.1</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗マウスIgG(H&L) 高交差吸着性 二次抗体、Alexa Fluor Plus 488</td><td>Invitrogen</td><td>A32723TR</td><td></td></tr><tr><td>ヤギ抗ウサギIgG(H+L)交差吸着二次抗体、Cyanine3</td><td>Invitrogen</td><td>A10520</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Version&nbsp; 9.4.1</td><td></td></tr><tr><td>Human CCR7 Antibody</td><td>R&D Systems</td><td>MAB197</td><td></td></tr><tr><td>Human IFN-gamma Recombinant</td><td>Invitrogen (Rockford, USA)</td><td>RIFNG100</td><td></td></tr><tr><td>Human IL-13</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Germany)</td><td>5230901032</td><td></td></tr><tr><td>Human IL-4</td><td>Milteny Biotec (Bergisch Gladbach, Germany)</td><td>130-095-373</td><td></td></tr><tr><td>Human M-CSF</td><td>Peprotech (Cranbury, USA)</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>LeicaTCS SP5</td><td>Leica Microsystems CMS GmbH (Mannheim, Germany)</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/confocal-microscopes/p/leica-tcs-sp5/</td><td></td></tr> <tr><td>Escherichia</td><td>Sigma Aldrich Co. (Missouri, USA)</td><td>L4391-1MG</td><td></td></tr><tr><td>Luna Universal qPCR Master Mixの</td>リポ多糖類&nbsp;<td>New England Biolabs</td><td>NEB #M3003</td><td></td></tr><tr><td>LunaScript RT SuperMix Kit</td><td>New England Biolabs</td><td>E3010L</td><td></td></tr><tr><td>Lymphocyte Separation Medium 1077</td><td>PromoCell (ハイデルベルク、ドイツ)</td><td>C-44010</td><td></td></tr><tr><td>MCP-4/CCL13 Human ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>EHCCL13</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Fast 96-Well Reaction Plate (0.1 mL)</td><td>Applied Biosystems (Waltham, USA)</td><td>4346907</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Optical Adhesive Film</td><td>Life Technologies Corporation (カールスバッド、米国)</td><td>4311971</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp Splash Free 96-Well Base</td><td>Applied Biosystems (Waltham, USA)</td><td>4312063</td><td></td></tr><tr><td>Microlitercentrifuge CD-3124R</td><td>Phoenix Instrument (Germany)</td><td>9013111121</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Cover Glasses, 10 mm</td><td>Carl Roth GmbH, Karlsruhe, Germany</td><td>4HX4.1</td><td></td></tr><tr><td>単球付着培地</td><td>PromoCell (ドイツ、ハイデルベルク)</td><td>C-28051</td><td></td></tr><tr><td>Multiply-Pro Gef&auml;&szlig;0.5 mL、PP</td><td>ザルスタットAG &CO (N&uuml;mbrecht, Germany)</td><td>7,27,35,100</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop One</td><td>Thermo Scientific (USA)</td><td>ND-ONE-W</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio&nbsp;3 System</td><td>Life Technologies GmbH (St. Leon-Rot, Germany)</td><td>A28567</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Micro Kit</td><td>Qiagen</td><td>74007</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640, 1x, with L-glutamine</td><td>Mediatech, Inc. (マナッサス, USA)</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>Sterile bench, LaminarAir HB 2472&nbsp;</td><td>ヘレウス・インスツルメンツ(ドイツ、ハーナウ)</td><td>51012197</td><td></td></tr><tr><td>組織培養カバースリップ 13 mm (プラスチック)</td><td>Sarstedt Inc. (Newton, USA)</td><td>83,18,40,002</td><td></td></tr><tr><td>チタン加工ディスク 12 cm&nbsp;</td><td>Medentis Medical (Bad-Neuenahr-Ahrweiler, Germany)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>TNF α Human ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>KHC3011</td><td></td></tr><tr><td>Trypan blue solution 0.4%</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG (カールスルーエ, ドイツ)</td><td>1680.1</td><td></td></tr></tbody></table>

インプラント表面上のm1およびm2ヒト単球由来マクロファージの分極と特性評価 

Polarization and Characterization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Macrophages on Implant Surfaces

この研究の結果は、チタン表面上のMDMの分化と分極に成功し、続いてM1またはM2分極マクロファージの特性評価が行われたことを示しています。最初のステップでは、CLSMを使用して分極MDMを特徴付けました。私たちの予備研究に基づいて、CD209とCCR7は、M1とM2分極MDMを区別するための特異的マーカーとして使用されました。 図2A、Bに示すように、MDMはM1マクロファージとM2マクロファージに正常に分極しました。チタン表面では、CCR7はCD209よりもM1分極マクロファージでより強く発現し、M2分極マクロファージで特異的に発現していました。さらに、相対蛍光強度を定量化することで、マーカーをM1またはM2サブタイプに割り当てることが容易になりました(図2C)。
図3 は、チタンおよびカバーガラス表面上のMDMの代表的なqRT-PCR分析を示しています。その結果、M1(CCR7およびTNF-ɑ)およびM2(CD209およびCCL13)の分極マーカーが高発現していることからもわかるように、両表面のMDMは成功裏に分極されていることが示されました。これは、M1分極細胞とM2分極細胞でそれぞれ高レベルの炎症性TNF-αサイトカイン(図4A)とIL-13ケモカイン(図4B)を観察することにより、タンパク質レベルでさらに確認されました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig01.jpg"> 図 1: プロトコルの概略図。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig02v2.jpg"> 図2:CLSMを使用した偏光MDMの特性評価。 M1およびM2分極マクロファージの濃縮は、播種後2日目のCCR7およびCD209抗体を用いた特異的抗体染色およびCLSM解析によって確認されました。蛍光染色およびCLSM分析(A)25倍倍、(B)63倍倍率)によると、M1細胞はM0またはM2よりも高いCCR7(緑色)を発現しました。M2細胞は、有意なCD209発現パターンを示します(緑色)。(C)CCR7とCD209の相対蛍光強度の定量分析。核をDRAQ5(紫色)で染色しました。結果は、独立して行われた5つの同様の実験を代表するものです。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig03.jpg"> 図3:遺伝子発現プロファイルを用いた偏光MDMの特性評価。 定量的逆転写ポリメラーゼを使用して、M1(CCR7およびTNF-ɑ)およびM2(CD209およびCCL13)分極に関連するさまざまな遺伝子のmRNAレベルを研究しました。GAPDHをハウスキーピング遺伝子として使用した。データは平均±SEM(n = 5)として表示されます。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67180/67180fig04.jpg"> 図4:チタンおよびプラスチックカバースリップ上で培養したM0、M1、およびM2マクロファージによるサイトカインの産生 (A)TNF-ɑサイトカインレベルおよび(B)細胞培養上清中のCCL13レベルをELISAを用いて測定した。サイトカイン分泌は、BCAアッセイで測定した総タンパク質分泌量に正規化されました。棒グラフはSEM±平均を表します(n = 5)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67180/67180fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>バッファー/ソリューション</td>
			<td>コンテンツ</td>
		</tr><tr><td>染色/ブロッキングバッファー</td>
			<td>PBS + 1%BSA + 0.1%トゥイーン20</td>
		</tr><tr><td>ウォッシュバッファー</td>
			<td>PBS + 0.1% トゥイーン 20</td>
		</tr><tr><td>固定バッファ</td>
			<td>PBS中のパラホルムアルデヒド(PFA)の3%</td>
		</tr><tr><td>ストレージバッファ</td>
			<td>PBS中のペニシリンとストレプトマイシンの1%</td>
		</tr></tbody></table>表 1: バッファーの一覧。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>プライマー名</td>
			<td>フォワードプライマー配列</td>
			<td>リバースプライマー配列</td>
		</tr><tr><td>ガプド</td>
			<td>5'-GAGTCAACGGATTTGGGTGT-3'</td>
			<td>5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'</td>
		</tr><tr><td>CCR7</td>
			<td>5' - TGGTGATCGGCTTTCTGGTC-3'</td>
			<td>5フィート - CACCTTGATGGCCTTGTTGC-3'</td>
		</tr><tr><td>CD209の</td>
			<td>5'- GGAGCAGAACTTCCTACAGC-3'</td>
			<td>5' - CAACGTTGTTGGGCTCTCCT-3'</td>
		</tr><tr><td>CCL13</td>
			<td>5'-ATCTCCTTGCAGAGGCTGAA-3'</td>
			<td>5'-ACTTCTCCTTTGGGTCAGCA-3'</td>
		</tr><tr><td>TNF-ɑ</td>
			<td>5'- GCTGCACTTTGGAGTGATCG-3'</td>
			<td>5' - TCACTCGGGGTTCGAGAAGA-3'</td>
		</tr></tbody></table>テーブル2.qRT-PCRで使用されるプライマーの配列。

インプラント表面上のM1およびM2ヒト単球由来マクロファージの分極と特性評価 

Foreign body reaction (FBR), an immune-mediated complex healing process, plays a crucial role in integrating implants into the body. Macrophages, as the ...

polarization-characterization-m1-m2-human-monocyte-derived

Research

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Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、末梢血由来の単球をM1またはM2マクロファージに分化および分極させる手順を示します。顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子、リポ多糖、およびインターフェロン-γとのインキュベーションは炎症誘発性M1マクロファージを産生し、マクロファージコロニー刺激因子およびインターロイキン-4とのインキュベーションは抗炎症性M2マクロファージ産生を誘導します。...

単球由来細胞のマクロファージ様細胞への分化と分極

記事は容易に簡単に適応を説明...

骨髄由来マクロファージを用いたマクロファージ分極の調査

単球由来のマクロファージは自然免疫系の重要な細胞である。ここでは、使用して簡単に説明する...

不定冠詞<em&gt;インビトロ</emヒトマクロファージの分化と偏光の不均一性を研究するために&gt;モデル

私たちは、ヒトマクロファージの生成のための簡単​​かつ効率的なプロトコルを提示する。バフィーコートは、二重密度勾配遠心分離によって処理され、単離された単球は、次いで、テフロンコーティングした細胞培養バッグ中でマクロファージに分化される。これは、マクロファージ収量を最大化し、その後の実験のために細胞の回収を容易にします。...

ダブル勾配遠心、テフロンコーティングされた細胞培養バッグ中のマクロファージへの分化によるヒト単球の単離

代謝リプログラミングは、M1およびM2マクロファージの分極のための特性的かつ前提条件です。この原稿では、マウス骨髄由来マクロファージにおける解糖系とミトコンドリア機能の基本パラメータを測定するためのアッセイについて説明します。このツールは、特定の要因がマクロファージの代謝と表現型にどのように影響するかを調査するために適用できます。...

リアルタイム細胞外フラックス分析を用いた偏光M1、M2の骨髄由来マクロファージの代謝特性評価

このプロトコルは、ヒトM1-またはM2偏光マクロファージにおける 結核...

ヒト単球由来M1とM2の分極化と 結核 菌感染時のフローサイトメトリーによる解析

M2様腫瘍関連マクロファージ(TAM)は、がんにおける腫瘍の進行および予後不良に関連している。このプロトコルは、14日以内にTHP-1単球様細胞をM2様マクロファージに再現的に分化し、偏光するための詳細なガイドとして機能します。このモデルは、腫瘍微小環境内におけるTAMの抗炎症効果を調べる基礎となる。...

ヒト単球様THP-1白血病細胞株を用いたM2様表現型へのマクロファージ分化と分極化

単球とマクロファージは、健康と病気に不可欠な非常に可塑的で再プログラム可能な免疫細胞です。彼らは、特定の分化プログラムと表現型を採用することにより、幅広い刺激を感知し、反応します。私たちは、マクロファージの分極とリプログラミングを研究するためのin-vitroモデルを標準化し、研究に貴重なツールを提供しています。...

In-vitroアッセイのためのヒト単球由来マクロファージのリプログラミングモデル

私たちは、輸血医学および免疫学における赤血球同種抗体の臨床的関連性をより正確に予測するためにマクロファージを使用する既存の単球単層アッセイ(MMA)の機能強化と更新された方法を開発しました。このアッセイは、単球マクロファージアッセイ(M-MA)と呼ばれています。...

単球マクロファージアッセイを用いた赤血球抗体の意義の予測

樹状細胞（DC）は、ニゲリシンとNLRP3ソーム活性化に続いて、合成プリン、R848のTLR8認識に応答してIL-1βを分泌し、したがって、IL-1βはNLRP3ソーム活性を測定するために使用することができる。細胞内サイトカイン染色、イムノブロッティング、およびELISAを正確にIL-1βの発現を介してNLRP3ソームプライミングおよび活性化を測定するために使用される。...

ヒト単球由来樹状細胞におけるIL-1βを用いて活性化し、NLRP3ソーム活性の測定

学ぶインプラント表面でのヒト単球由来マクロファージのM1/M2分極と特性評価プロトコル。qRT-PCR、ELISA、CLSMを用いてサイトカイン発現と細胞表面マーカーを解析し、組織再生を促進する免疫調節材料の設計に貢献します。

インプラント表面上のM1およびM2ヒト単球由来マクロファージの分極と特性評価

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