Name: マウスにおける咬合力とフォン・フレイ・フィラメント・アッセイによる顎関節痛測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-13T14:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: 学ぶ咬合力とフォン・フレイ・フィラメント・アッセイによるマウスの顎関節痛測定法。CFA誘発炎症モデルで疼痛行動を定量化し、顎関節症の疼痛メカニズム解明と治療法開発に貢献する標準化プロトコルを解説します。

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議論を刺激してくれた陳研究室の同僚に感謝します。マウスの画像作成にご協力いただいたThach-Vu Ho氏のご支援に感謝いたします。この研究は、国立歯科および頭蓋顔面研究所(NIDCR)からの助成金R01DE033511(J.C.)の支援を受けました。

すべての動物の手順は、南カリフォルニア大学の施設内動物管理および使用委員会（IACUC）によって承認されました。この研究では、体重が19〜20 gの8週齢のC57BL / 6雌マウスが使用されました。マウスは、湿度が調整され、明暗サイクルが12時間の環境条件下で、標準的なケージに収容されました。使用した試薬や機器は、材料表に記載されています。
1. 顎関節症を誘発するCFA関節内注射
<ol>
	<li>導入には 3% イソフルランを使用し、維持には 1%-2% を使用して、マウスをイソフルランで麻酔します (施設で承認されたプロトコルに従います)。麻酔を維持するために、手順全体でノーズコーンを使用します。つま先をつまんで、十分な麻酔の深さを確認します。</li>
	<li>マウスの呼吸を注意深く監視して、麻酔への曝露を最小限に抑えながら適切な呼吸状態を確保します。手術中に目を保護するためにアイジェルを塗布します. 
	注:マウスは、口腔顔面痛の発症および疼痛行動の測定に対する先制的な鎮痛効果を避けるために、術後疼痛に対する鎮痛剤を投与することができなかった。</li>
	<li>コンプリートフロイントのアジュバント(CFA)5 mg / mLを顎関節に注入するための滅菌インスリン注射器または31 G針を準備し、滅菌ポリエチレンチューブ製のシースで針を覆い、針先を2 mmだけ突き出させて、深く挿入しすぎないようにします。.</li>
	<li>麻酔後、髪の毛を取り除き、耳介前領域をポビドンヨードと70%アルコールで消毒します。</li>
	<li>頬骨弓を触診して頬骨弓を特定し、顎関節注射部位を特定します. 
	注:頬骨弓の後端には、外耳道の約2mm前にくぼんだ領域があります。顎関節注射部位はこの領域の周りにあり、目の高さから外耳道まで引かれた架空の線を超えて伸びてはなりません(図1A、B)。</li>
	<li>頬骨弓の後端の下にある注射部位に針を挿入します。針の先端は、2 mm の深さで骨に接触する必要があります (図 1A、E)。</li>
	<li>10μLのCFAをTMJカプセルにゆっくりと注入し、少なくとも5秒待ってから徐々に針を引き抜きます。同じ手順に従って、コントロールマウスの顎関節に同量のPBSを注入します。</li>
	<li>手順1.4-1.8を繰り返して、反対側のTMJにCFAを注入します。マウスが完全に回復するまで、ヒートパッドでマウスを観察します。 
	注:CFAは比較的粘性のある油中水型エマルジョンであるため、注射中にCFAが漏れないように、CFA注射と針の引き出しは遅くする必要があります。注入の精度を確保するために、5 μLの高速緑色色素を投与し、続いて咬筋を解剖して注入精度を調べることで注入を練習します(図1D、E)。注入後、速い緑色の染料は急速に拡散するため、使用量を減らす必要があります。この低減により、注入精度が向上するだけでなく、周辺領域への不要な拡散も防止されます。マウスにTMJOAを誘導するために投与されたCFAの量と濃度は、以前の研究で確立されたプロトコルに基づいて決定されました16,17。</li>
</ol>
2. 噛み合わせ力の測定
<ol>
	マウスを拘束<li>するように設計されたチューブをマウスケージに少なくとも1時間置いてから、試験前にマウスを試験環境に順応させます。</li>
	<li>炎症を誘発し始める前に、咬合力のベースライン測定値を記録します。CFAまたはPBS注射の3日前に、テスト環境内で噛むようにマウスを訓練します。平均値をベースライン学習値として記録します。</li>
	<li>互換性のあるソフトウェアの電源を入れ、コンピューター上のプログラムに接続されている咬合力トランスデューサー(図2A、B)を使用して咬合力を測定します。
	<ol>
		<li>NBIT RSD-V2.6.3プログラムを開き、オシログラフを表示します(図2C)。</li>
		<li>適切な通信オプションを次のように選択します: 有人モード: UDP (図 2E)。適切なローカル IP を選択し、[検索] をクリックして [デバイス IP] と [ポート] を検索します。[ターゲット IP] と [ターゲット ポート] が表示されたら、[開く] をクリックします。</li>
		<li>範囲Yの10をクリックしてY軸を設定します。次に、Set (図 2F) をクリックします。「Acquisition」をクリックします。</li>
		<li>青いグラフはチャネル 1 (Ch1) のみを選択し、デバイスに接続されていない他のチャネルはオフにします (図 2D)。</li>
		<li>「再生」をクリックして、咬合力の記録を開始します (図 2F). 
		注意: 「再生」をクリックして録音を開始する前に、マウスはすでにシリンジ内にあり、正確な録音時間を得るために咬合力を記録する準備ができている必要があります。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>マウスを緩く拘束するように改造された50mLのプラスチックチューブにマウスを入れます。片側の広い開口部は、マウスの頭が快適に動くように特別に設計されています。</li>
	<li>バイトプレートを口の方に動かします. 
	注:マウスは、バイトプレートが口に触れると自動的に噛み始めます。ただし、最初の学習では、マウスが噛み始めるまでに約30秒かかることがありました。トレーニング後、マウスは10秒以内に噛み始めるはずです。マウスが3日目のトレーニング日から10秒以内に噛み始めない場合、マウスは実験から除外されます。そのため、マウスが試験環境に慣れるように訓練することが重要です。</li>
	<li>自発的な噛みつきを2分間/セッション記録します。次に、「一時停止」をクリックして録音を停止し、「保存」をクリックします (図 2E)。咬合力記録の結果は、自動的にExcelファイル(補足ファイル1)にエクスポートされます 
	注意: Excelファイル(補足ファイル1)では、左の列のデータは録音時の時間を表しています。左から2列目は、各時点における咬合力の振幅です。</li>
	<li>Excel ファイルの 2 列目のデータを最大値から最小列にランク付けします。さらなる分析のために、咬合力の振幅の上位5つを選択します. 
	注意: 上位5つの振幅は、同じ噛み合わせイベントからデータが選択されるのを防ぐために、たとえば、記録時間の20秒または1000ごとに、異なる時点にある必要があります。</li>
	<li>プログラムからCh1の値(図2D)を記録し、咬合力の振幅の上位5つの値を減算または加算して、このアッセイからの咬合力の相対値を取得します。次に、これらの5つの値を平均して、1匹のマウスの平均相対的な咬合力を求めます。</li>
	<li>手順2.3.5-2.8を繰り返して、次のマウスの咬合力を記録します. 
	注:顎関節痛の進行における咬合力を評価するために、相対的な咬合力の値はベースライントレーニング中に記録され、CFA注射後のさまざまな時点(1日目、3日目、5日目、7日目、12日目など)で測定されます。</li>
</ol>
3. 頭の引き出し閾値の測定
<ol>
	<li>マウスケージに金網ケージを入れ、テスト手順の前に少なくとも1時間マウスを行動室に慣れさせます。</li>
	<li>テスト環境内でマウスを訓練し、CFAまたはPBS注射の3日前のベースラインヘッド離脱閾値を記録します。</li>
	<li>電子フォン・フレイ試験機の電源を入れて、頭部の引き出し閾値を測定します(図3A、B)。
	<ol>
		<li>MAXを押してから、単位を500g(機械が任意の単位で設定)に設定します。</li>
		<li>0 を設定すると、録音が開始されます。画面上の force の値は 0 である必要があります (図 3C,D)。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>マウスをワイヤーメッシュケージ(図3B)に入れます。フォンフレイフィラメントを顎関節部に対して垂直に塗布します. 
	注意: テスト領域は、目と外耳道の間の接続部のレベル、外耳道の約2mm前にあります。頭部の引き抜き閾値は、フォン・フレイ・フィラメントから得られる最小の力として定義され、引き抜き反射を誘発することができます。</li>
	<li>フィラメントから加えられた力の値、または反応を引き起こす刺激強度(g)を最初のテストとして記録します(図3E)。</li>
	<li>画面上の力の値をゼロに設定し、マウスがまだケージ内にある間に10秒待ちます。</li>
	<li>フィラメントの塗布を再度開始し、値を記録します。</li>
	<li>測定を繰り返し(ステップ3.5-3.7)、10秒間隔で各マウスについて少なくとも5つのテストを記録します。</li>
	<li>これらの 5 つの値の平均を取ります。平均値は、1匹のマウスからの頭部引き出し閾値と見なされます。 
	注:フォン・フレイのフィラメント測定は、1つのマウスで5回行われます。大きなばらつきがある場合、目立った怪我をすることなく、最大8回まで測定を繰り返すことができます。噛み合わせ力またはフォン・フレイ試験のいずれかを最初に開始できます。私たちの経験に基づいて、どちらのテストが最初に開始されるかという点で大きな違いはありません。ただし、実験全体を通して一貫している必要があります。咬合力とフォン・フレイの間の間隔は少なくとも30分です。最初のアッセイの後、マウスをケージに戻しました。30分間休ませ、2回目のアッセイを開始します。</li>
</ol>

Inflammatory TMJ Pain Mouse Model: Bite Force and Von Frey Filament Assessments

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</ol>

著者らは、これらの研究の客観性に影響を与えると認識される可能性のある競合する経済的利益は存在しないと宣言しています。

マウスの炎症誘発性 TMJOA は、関節内 CFA 注射が痛みや炎症を誘発し、滑膜炎、骨量減少、軟骨リモデリングを引き起こす可能性があるため、TMJOA の疼痛メカニズムを調査するための動物モデルとして機能します。これらの状態は、ヒトで観察される病状にある程度似ており、患者の関節痛や炎症などのTMJOAの主な特徴に寄与しています13,18。TMJOA に関連する痛みを伴う症状は、患者が医師の診察を求める主な理由です。動物モデルで痛みの存在と重症度を検出できることは、痛みの病因と潜在的な新しい治療法を調査する機会を提供します。このレポートでは、咬合力と頭部引き抜き閾値の測定を通じて顎関節の痛みの挙動を評価する方法について説明しました。顎関節は、口の開閉、噛みつき、咀嚼など、すべての顎の動きに関与する重要な構造の 1 つです。さらに、顎関節症の主な臨床症状は、咀嚼または咀嚼に伴う痛みです。顎関節痛のある顎関節症患者は、通常、健康な人と比較して咬合力が低下しています 9,19。臨床研究と一致して、マウスモデルにおけるCFAの関節内注射は、ヒトの顎関節の痛みおよび機能不全に関連する症状と同等と考えられる咬合力の有意な減少につながる可能性があります11。
顎関節痛の臨床診断には、顎関節を触診し、患者の報告に基づいて痛みの重症度を記録することが含まれます。この手順は、ヘッドの引き抜き挙動につながる最低閾値力を測定するフォン フレイ フィラメント テストに似ています。頭部の引き抜きは、口腔顔面領域の痛みの反応と痛覚過敏の状態を示します20。頭部引き抜き閾値の低下は、顎関節痛のある患者の関節圧痛と圧痛閾値の低下を示している可能性があります18、19、21。したがって、フォン フレイ フィラメント テストは、顎関節症の圧痛閾値を評価するのに役立ちます。CFA 誘発性 TMJOA マウス モデルでは、咬合力と頭部引き抜き閾値の測定が、痛みの挙動を評価するための信頼できる方法として検証されています22。
ほとんどの行動結果はやや主観的です。他の多くの行動アッセイと同様に、口腔顔面痛を測定する際には常に変動が懸念されます。顎関節痛の信頼性が高く、再現性があり、高感度な測定という目標を達成するには、実験計画、実行、および結果の解釈における限界と潜在的な解決策に注意することが重要です。注意点の 1 つは、関節痛から必要のない顎関節機能障害によって咬合力の低下が引き起こされる可能性があることです。たとえば、筋肉は顎関節の動きや噛み合わせに重要な役割を果たします。咬合力の低下は、関節痛ではなく筋肉機能障害が原因である可能性があります。ただし、X 線写真および組織学的所見を使用して、CFA 誘発性顎関節痛と筋肉痛を区別できます。CFA 注射による顎関節の痛みはその後軟骨と骨量減少につながりますが、CFA 誘発性の筋肉痛は骨量減少を引き起こす可能性が低くなります16。
この研究では、電子フォン フレイを使用して頭部引き抜き閾値を連続スケールで測定し、力の適用回数を最小限に抑え、テスト領域23 の顔の皮膚への損傷を防ぐことができることに注意する必要があります。手動フォン・フレイと電子フォン・フレイから得られる離脱閾値には顕著な違いがあることが報告されています。通常、電子フォンフレイで測定された離脱閾値は、手動フォンフレイ8,10で測定されたものよりも高くなる傾向があります。当社の電子フォン・フレイのプラスチックチップは、顔の皮膚損傷を避けるために鋭くなく、手動のフォン・フレイ・フィラメントとは異なる値になる可能性があります。さらに、電子フォン・フレイ試験の「g」単位は実際の力ではなく、機械によって設定された任意の単位です。さらに、皮膚の痛みを最小限に抑えるために、ベースライントレーニングを開始する前に注射部位から毛髪を取り除きました。このアプローチは、皮膚の痛みと過敏症の交絡因子を軽減し、潜在的な感染汚染を防ぐはずです。一方、皮膚痛による交絡効果を最大限に排除し、測定が関節痛によるものであることを保証するために、同じ手順で偽グループにも PBS が注射されました。CFA の関節内注射は顎関節領域に特異的ですが、CFA 誘発性組織の炎症は関節自体に限定されない可能性が高く、咬合力の低下や頭部引き抜き閾値の低下など、何らかの痛みの反応に寄与する可能性があります。全体として、全体的な転帰に寄与する可能性のある顎関節症の炎症由来の皮膚または筋肉痛の二次的影響を完全に排除することはできないことを認識しています。
各器具から得られる咬合力と頭部引き抜き閾値の値は、個々のアッセイ用に特別に設定された単位、パラメーター、およびプロトコルが異なるため、異なる場合があります。この研究では雌マウスが使用されましたが、雄マウスを使用して痛みを伴う TMJOA を研究することもできます。しかし、げっ歯類の基礎侵害受容閾値には性的二形性があります。男性と女性はさまざまな痛みの経験を示し、これは痛みを伴う刺激に対する明確な生理学的および行動的反応によって特徴付けられます 24,25,26。さらに、オスのマウスはメスよりも頭の引き抜き閾値と咬合力が高い傾向があります。年齢と体重も咬合力の値に影響します11、16、27。以前の研究では、観察の最初の 2 週間の間に咬合力と体重の間に正の相関関係があったことが報告されました11。この研究のベースラインでの8週齢の雌のC57BL / 6マウスの咬合力値は、4.5〜5.5 Nの範囲でした(図4A)。CFA 注射後、初期段階での咬合力の 2-3 N への減少は、MIA 炎症物質6 を使用した TMJOA の誘導を含む以前の研究と一致しています。ただし、咬合力の変化率を使用すると、各検査室が異なる機器やプロトコルを持っている可能性があり、その結果、異なる値が得られる可能性があるため、他の以前の研究との調査結果の一貫性を検証する手段として役立ちます27,28。
痛みの行動測定のばらつきを減らすための重要なステップは、ベースラインでのマウスのトレーニングの一貫性を検証し、確保することです。性別、体重、年齢の違いから変動が生じる可能性があり、これらすべてが咬合力と頭部引き抜き閾値の測定値に影響を与える可能性があります。たとえば、生後8週間の雌マウスの体重は通常約19〜20gです。相対咬合力の値は、ベースライントレーニングのデータに基づいて、通常4.5〜5.5 Nの範囲内に収まります。したがって、平均咬合力値がベースラインのトレーニング範囲外であるマウスは、実験から除外する必要があります。同様に、ベースライントレーニング中の頭部引き抜き閾値は22〜35gの範囲です。この範囲外の頭部離脱閾値を持つマウスは、実験から除外する必要があります。全体として、正式な行動テストの前に、動物の訓練中に噛む力と頭の引き抜き閾値のベンチマークを確立することが重要です。

顎関節症(TMD)とは、顎関節(TMJ)、咀嚼筋、および関連する構造に影響を与える筋骨格系および神経筋構造の痛みと機能障害を指します。顎関節は、日常生活で最も頻繁に使用される滑膜関節です。TMD患者の約80%がTMJ疾患の徴候と症状を示しており、生活の質に大きな影響を与える可能性があります1,2,3.さらに、変形性顎関節症 (TMJOA) は TMD の重要なサブタイプであり、進行性の変性関節疾患と定義されています。顎関節症の患者さんは、しばしば関節痛を呈します。痛みを伴う顎関節症は、患者が治療を求める主な理由の1つです4,5.しかし、痛みを伴う顎関節症を軽減するためのより効果的な治療法に対するアンメットメディカルニーズがあります。疼痛性顎関節症を理解することは、疾患修飾性OA医薬品(DMOAD)の開発に不可欠です。
TMJOAの痛みを持つ患者から臨床サンプルを取得することは困難であるため、動物モデルはTMJOAの病状を研究するための不可欠なツールになりました6,7。疼痛行動の評価を統合することで、その根底にあるメカニズムと潜在的な新しい治療介入に関する貴重な洞察を得ることができます。動物モデルにおける痛みの測定は、人間以外の被験者における痛みの知覚と表現の主観的な性質のために困難です6,8.顎関節の疼痛行動アッセイを使用した研究は、非頭蓋顔面関節と比較して比較的少ないです。したがって、TMJOAの動物モデルで痛みの経験を確実に捉えるためには、痛みの行動を評価する方法を定義することが重要です。
この記事では、TMJOAのマウスモデルの痛みを評価するために設計された2つの異なる方法、すなわち咬合力測定とフォン・フレイ・フィラメント・テストについて説明しました。顎と筋肉の協調は咀嚼機能に不可欠であり、顎関節症と筋肉機能に伴う痛みは、顎関節症患者の咬合力を低下させることができます3,9.このように、咀嚼機能に続発する疼痛関連行動を咬合力測定で評価することができ、関節痛に関連する顎関節機能を効果的に反映しています。さらに、フォン・フレイ・フィラメント・テストでは、頭部の引き抜き閾値を測定し、機械的感度を評価します。この方法では、離脱応答が観察されるまで、力を増加させるフォンフレイフィラメントをマウスの皮膚に適用します。頭部の引き出し反応をトリガーする力は、頭部の引き出しのしきい値として記録されます。この手法は、機械的異痛症の評価に広く使用されており、口腔顔面痛に関連する末梢侵害受容器感作を示しています8,10,11.
以前の研究では、これらの方法を使用して痛みの行動を測定してきましたが、直接実装するための詳細なプロトコルを提供したり、これらの方法を組み合わせてCFA12,13,14,15.したがって、これらの方法は、痛みの重症度と進行を測定する際の感度と再現性を実証するために開発および検証されています。これら 2 つの補完的なアプローチは、疼痛行動評価の相互検証を提供します。重要なことに、これらの技術による疼痛行動の結果は、疼痛を伴うTMJOAマウスの組織学的および病理学的特徴と相関することができるということです14,16.さらに、咬合力の測定は顎の機能を評価するための貴重なデータを提供し、フォン・フレイ試験は機械的な侵害受容8を測定します。したがって、これらのプロトコルは、歯原性疼痛、顎関節痛、筋肉痛、神経因性疼痛など、さまざまな口腔顔面疼痛状態における疼痛行動の評価に適用することができます。

<table><tbody><tr><td>咬合力トランスデューサ&nbsp;</td><td>南京Shen-yuan-shengインテリジェントテクノロジー株式会社</td><td>NBIT-YFM-1-100</td><td>0&ndash;100 N、南京のNB IT RSD-V2.6.3プログラム(NST2000データコレクタ)に接続された咬合力トランスデューサー、南京Shen-yuan-sheng Intelligent Technology Co.、PR。</td></tr><tr><td>完全なフロイントのアジュバント(CFA)</td><td>Chondrex Inc</td><td>7023</td><td>CFA 5mg / mL</td></tr>イ<tr><td>ソフルオロ</td><td>ソ</td><td>MWI501017</td><td></td></tr><tr><td>NBIT RSD-V2.6.3プログラム</td><td>南京Shen-yuan-shengインテリジェントテクノロジーCo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリエチレンチューブ</td><td>サイエンティフィックコモディティーズ株式会社</td><td>NC0923369</td><td>PEチューブ0.38 x 1.09 mm 100フィート</td></tr><tr><td>フォンフレイ鎮痛計</td><td>Bioseb</td><td>BIO-EVF4</td><td>エレクトリック フォン・フレイ</td></tr></tbody></table>

マウスにおける咬合力とフォン・フレイ・フィラメント・アッセイによる顎関節痛測定

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

顎関節症(TMJ)の痛みと変形性関節症(OA)は、患者の生活の質を損なう一般的な衰弱性疾患です。疾患に関連する疼痛を引き起こすメカニズムは十分に理解されておらず、現在の治療法では効果的で長期的な治療効果が得られていません。さらに、研究における疼痛評価、特に口腔顔面疼痛は、臨床科学と基礎科学の両方の環境での研究を複雑にするいくつかの課題を提起します。そこで、CFA(Complete Freund's Adjuvant)の関節内注入による炎症性顎関節痛マウスモデルを確立し、咬合力測定とフォン・フレイ・フィラメント試験により疼痛行動を評価しました。CFA注射を受けたマウスは、PBS注射と比較して口腔顔面疼痛行動を示し、フォンフレイフィラメント試験で咬合力と頭部引き抜き閾値が低下しました。これらの方法は、再現性のある結果を得るために比較的簡単に実行でき、顎関節症に関連する他の疾患モデルの疼痛研究に拡張できる可能性があります。咬合力とフォン・フレイ・フィラメント試験を組み合わせることで、CFA注射による痛みを伴うTMJOAマウスモデルで実証されているように、口腔顔面痛の測定に信頼性があります。

炎症誘発性のTMJOA疼痛は、TMJにCFAを注入することで誘発されます。顎の運動において左右のTMJが協調して動作する必要があるため、TMJの疼痛を評価するために左右両方の関節にCFAを注入します。シャム群には、対照としてPBSを注入します。CFA群とシャム群の間の疼痛行動の差を統計的に分析するために、平均値 ± SEMおよびStudent's t-testを用います。
マウスがTMJ痛を感じているかを確認するために、咬合力および頭部逃避閾値の測定が行われました。CFA投与後のマウスでは、CFA注射から1日後に、ベースラインレベルと比較して咬合力と頭部逃避閾値の両方で有意な低下が認められ、その後、時間経過とともに緩やかに増加しました。対照的に、PBSを注射したコントロール群では、ベースラインのトレーニングと比較して、咬合力およびvon Freyフィラメント試験への反応に有意な変化は見られませんでした（図 4A-D）。これらの結果は、CFA注射を受けたマウスが、機械的アロディニアを伴うTMJ痛および咀嚼機能の障害を経験したことを示唆しています。
<img alt="ラット頭蓋骨解剖図；頬骨弓、咬筋、外耳道；解剖学的研究。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67203/67203fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="図1"> 
図1: マウスモデルにおけるTMJ関節内注射。 (A) マウスをノーズコーンを用いてイソフルランで麻酔した。黄色線は、眼窩レベルから外耳道までの仮想線を示す。 (B) 注射のための解剖学的指標。黒い破線は、皮膚の上から触知可能な頬骨弓を示す。注射部位となる陥凹部は赤印で示されている。 (C) 咬筋を除去すると、TMJの顆頭が確認できる。 (D,E) TMJの顆頭を示すためにファストグリーン染料を注入した。スケールバー：1 mm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67203/67203fig01large.jpg" target="_blank">こちらのリンクをクリックして、この図の拡大版を表示してください。</a>
<img alt="コンピュータインターフェース、信号データグラフ、および発光研究用の解析オプションを備えた分光法セットアップ。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67203/67203fig02.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="図2"> 
図2咬合力測定の記録。 (A, B咬合力測定機および咬合力を記録するためのコンピュータ。C咬合力測定時の咬合力記録の振幅。D-F) 咬合力を記録するためのプログラムのパラメータ (D'-F') 各パラメータセクションの拡大図。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67203/67203fig02large.jpg" target="_blank">こちらの図を拡大して表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="疼痛測定のセットアップ；Von Freyフィラメント、デジタルフォースゲージディスプレイ；静的平衡分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67203/67203fig03.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="図3"> 
図3電子式フォンフレイ侵害計 (A, BVon Freyフィラメント器具。C）装置の電源を入れた際に表示される画面。（D) 記録を開始するために、装置のゼロ点を設定します。 (E頭部回避反応を誘発するためにフォン・フレイ（von Frey）によって加えられた力の量。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67203/67203fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="CFAおよびPBS投与後の咬合力および逃避閾値の解析グラフ。各タイムポイントの比較結果。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67203/67203fig04.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="図4"> 
図4: PBS対照群と比較したCFA誘発炎症性TMJOAにおける疼痛行動評価。 (A,B) 咬合力の測定およびベースラインからの咬合力値の変化率。 (C,D) von Freyフィラメント試験による頭部逃避閾値の測定およびベースラインからの頭部逃避閾値の変化率。数値は平均値 ± SEMを示し、Student's t-testにて解析。*p &lt; 0.05, **p &lt; 0.01, ***p &lt; 0.001, ****p &lt; 0.0001. n = 6（PBS群）、n = 8（CFA群）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67203/67203fig04large.jpg" target="_blank">こちらのリンクをクリックして、この図の拡大版を表示してください。</a>
補足ファイル 1：咬合力測定および解析列Aは各咬合イベントの時点を示し、列Bは咬合力の振幅または値を記録しています。この表は、咬合力の最大絶対値によって整理されたデータを提示しています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67203/Bite%20force%20measurement%20and%20analysisv2.zip" target="_blank">こちらのリンクからファイルをダウンロードしてください。</a>

このプロトコルは、咬合力と頭部離脱閾値を測定することで、コンプリートフロイントのアジュバント(CFA)誘発性炎症性顎関節(TMJ)の痛みの行動をどのように捉えることができるかを説明しています。

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms ...

temporomandibular-joint-pain-measurement-bite-force-von-frey-filament

Research

JoVE Journal

Behavior

行動

我々は目を覚まし、意識げっ歯の痛み行動の評価のためのユーザーフレンドリーな、高スループットオペラントシステムを提示する。口腔顔面疼痛評価デバイス（OPAD）はテストのより人道的な方法を提供するため、報酬/紛争パラダイムを通して痛みを評価することができます。このプロトコルは、げっ歯類から、より臨床的に関連すると翻訳データが得られます。...

侵害受容性行動の変化を測定するためにオペラント口腔顔面疼痛評価デバイス（OPAD）の使用

食事の持続時間の延長は、顔面痛を有するヒトの保護行動と同様のげっ歯類における顔面のノシシブ行動を表す。食べることは、訓練や動物操作を必要とせず、皮質の参加を必要とし、他の実験的に誘発された行動と競合せず、このアッセイを代替反射またはオペラの測定と区別する行動である。...

げっ歯類におけるオロ顔面ノシチブ応答の尺度としての食事期間

本研究では、繊維性関節生体力学するマイクロX線コンピュータ断層撮影法と結合され、その場ローディング装置においての使用が議論される。実験の関節バイオメカニクスでの全体的な変化との識別可能な読み出しが含まれます：変位対1）反力を、 すなわち歯の歯槽ソケット内の変位と荷重への反動応答、2）3次元（3D）空間配置および形態計測、 すなわち幾何学歯槽ソケット歯の関係、および3）により装填軸の変化に読み出し1,2の変化、 すなわち、同心または偏心荷重。...

その場圧縮負荷と骨歯根膜歯繊維状合同の相関的非侵襲的イメージングで

電子フォンフレイ装置を用いたマウス後肢の触覚感度の変化の測定

変形性関節症（OA）、または変性関節疾患、部分的にしか利用でき鎮痛剤によって制御されたまま痛みを伴う衰弱状態です。動物モデルは、OAに関連する疼痛の機序の我々の理解を改善するために開発されています。ここでは、マウスでのOA痛みのmonoiodoacetateモデルのための方法論について説明します。...

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この原稿は、形態および齧歯動物の下顎内携帯電話の変更を分析するための方法を示します。...

形態とマウスの下顎頭軟骨細胞解析法

片頭痛の最も顕著な症状は重度の頭部痛であり、これは髄膜を神経支配する感覚ニューロンによって媒介されるという仮説が立てられている。ここでは、顔面過敏症をアウトプットとして、低侵襲で硬膜に物質を局所的に塗布する方法を提示する。...

頭痛の前臨床モデルとしてのマウスにおける硬膜刺激および眼窩周囲フォンフレイ試験

このプロトコルは、オペラントベースの口腔顔面疼痛評価装置を使用した神経因性口腔顔面痛のラットモデルにおける機械的過敏症の評価を記載する。...

口腔顔面オペラント疼痛アッセイを用いたラットにおける神経損傷誘発性機械的過敏症の評価

微小硬度は機械的特性であり、硬組織の病態生理を評価するための有益なパラメータです。ここでは、げっ歯類口腔疾患モデル、すなわち歯のフッ素症、および結紮誘発性歯周骨吸収における歯および歯槽骨の微小硬さ分析のための標準化されたプロトコル(サンプル調製、研磨、平坦面、およびくぼみ部位)を示します。...

げっ歯類口腔疾患モデルにおける歯と歯槽骨の微小硬度測定

ここでは、歯列矯正用歯の動き(OTM)を研究するためのプロトコルを提示し、骨の適応、根の吸収、および機械的刺激に対する骨細胞の応答のメカニズムを調査するための適切なモデルとして機能します。この包括的なガイドでは、OTMモデル、マイクロコンピューター断層撮影の取得、およびその後の分析について詳しく説明します。...

マウスにおける歯列矯正の歯の動きの研究

このプロトコルでは、マウスの膝の痛覚過敏を測定する方法が説明されています。急性膝痛のマウスモデルと変形性関節症(OA)のモデルで例を示しています。...

Pressure Application Measurementを用いたマウスの膝痛覚過敏の評価

学ぶ咬合力とフォン・フレイ・フィラメント・アッセイによるマウスの顎関節痛測定法。CFA誘発炎症モデルで疼痛行動を定量化し、顎関節症の疼痛メカニズム解明と治療法開発に貢献する標準化プロトコルを解説します。

マウスにおける咬合力とフォン・フレイ・フィラメント・アッセイによる顎関節痛測定

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