Name: ニューカッスル病ウイルス血清学の血球凝集阻害アッセイのための抗原調製物の最適化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 学ぶニューカッスル病ウイルス血清学のための4-HAU抗原調製最適化法。血球凝集阻害アッセイの精度向上と偽陽性低減により、家禽の疾病監視と制御に貢献する効率的な手法を確立します。

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このプロトコルの承認は、地元の施設の動物管理および使用委員会によって付与されました。生ウイルス抗原と臨床血清サンプルを含むすべての手順は、確立された安全プロトコルに準拠して、バイオセーフティレベル2の実験室で行われました。
1. 1%チキンRBC懸濁液の調製
<ol>
	<li>3 mLのAlserverの溶液(抗凝固剤)を滅菌済みの15 mLコニカル遠心チューブに加えます。.</li>
	<li>3つの非免疫鶏(NDV抗体なし)のそれぞれの翼静脈から1mLの血液を採取します。すぐに抗凝固剤の入ったチューブに血液を移し、穏やかに混合します。</li>
	<li>滅菌済みの1倍リン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.2-7.4)をチューブに全容量12 mLまで充填し、穏やかに混合します。水平ローターを使用して、500 × g で10分間遠心分離します。</li>
	<li>上清と白血球層を慎重に取り除きます。手順1.3と1.4を2x繰り返して、RBCペレットを取得します。</li>
	<li>1 mLのRBCペレットを99 mLの滅菌PBSに逆ピペットで移し、1% RBC懸濁液を調製します。 注:1%チキンRBC懸濁液の必要容量は、3 mL/プレート(25 μL/ウェル x 96ウェル x 1.25 = 3.0 mL;ここで、1.25は十分な容量を確保するためのピペッティングの無駄分)と見積もられます。</li>
</ol>
2. 凍結乾燥抗原または血清の再構成
<ol>
	<li>凍結乾燥抗原または血清を含むアンプルに2mLの滅菌PBSを加えます。アンプルを静かに振って2〜3分間放置し、気泡を最小限に抑え、完全に溶解させます。 注:この研究ではさまざまな種類の凍結乾燥材料は比較されていないため、特定の製造元の指示に従ってください。</li>
	<li>再構成した溶液を1.5 mLの遠心チューブに分注し、使用するまで-20°Cで凍結します。 注:抗原を解凍して使用するたびに、または新しいRBC懸濁液を調製するたびに、HA力価を再決定します。</li>
</ol>
3. 抗原のHA滴定
<ol>
	<li>40、80、120、160 μLのPBSを、使い捨ての96ウェルV底マイクロタイタープレートの隣接する4つのウェルに分注し、各ウェルに20 μLの抗原を加え、10倍と10倍にピペッティングして混合し、それぞれ1:3、1:5、1:7、1:9の希釈を達成します。希釈操作の概略図を 図1に示します。</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig1.jpg"> 
図1:赤血球凝集アッセイにおける抗原溶液の希釈手順を示す概略図。 抗原溶液をPBSでそれぞれ1:3、1:5、1:7、1:9の比率で希釈します。ウェルまたは遠心チューブ内のPBSは青色で、抗原は緑色で示されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol start="2">
	<li>新しいマイクロタイタープレートにラベルを付けます。25 μLのPBSを各ウェルの列1〜5に添加します。</li>
	<li>希釈した抗原溶液25 μLをマルチチャンネルピペットを使用して列1〜5の最初のウェルに入れ、ピペッティングで少なくとも5回上下させて混合します。</li>
	<li>各列の最初のウェルから2番目のウェルに25μLを移し、完全に混合します。1つのウェルから次のウェルへ、そして11番目のカラムまで移し続けて、2倍段階希釈(1:2から1:2048)を作成します。11列目以降、25μLを廃棄します。</li>
	<li>各ウェルに25 μLのPBSを、抗原濃度が最も低いウェルから追加します。</li>
	<li>1%チキンRBC懸濁液25 μLを各ウェルに加え、抗原濃度が最も低いウェルから再度追加します。</li>
	<li>マイクロプレートシェーカーでプレートを~20秒間振って、完全に混合します。</li>
	<li>ベンチトップの室温(20-25 °C)で、12列目のRBCが完全に落ち着くまで、~30分間放置します。プレートのレイアウトについては、 図2を参照してください。</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig2.jpg"> 
図2:赤血球凝集アッセイに使用したマイクロプレートの概略図。 行1〜5の1列目には、抗原溶液の未希釈液および種々の初期希釈液が含まれており、続いて左から右への2倍の段階希釈が11列目まで続いています。PBS コントロールは最後の列に配置されます。暗い色から明るい色への勾配は、抗原濃度の低下を示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol start="9">
	<li>結果を読み取り、記録します。HAは、プレートを90°~25秒間傾け、RBCの涙状の流れの有無を観察することで決定されます。完全な赤血球凝集(ストリーミングなし)を示す最高希釈は、1 HA単位に相当します。12列目のウェルはRBC(陰性)コントロールとして機能します。</li>
	<li>表1を使用して各行のHA力価を計算し、その最大値が4-HAU抗原溶液の調製に使用されます。例えば、a、b、c、d、eがそれぞれ9、8、7、6、6に等しい場合、3 x 28 = 768が最大値であり、抗原ストックのHA力価です。</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>抗原</td>
			<td>完全HAの最高希釈カラム</td>
			<td>原液のHA力価</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>原液</td>
			<td>ある</td>
			<td>2a</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3倍希釈</td>
			<td>b</td>
			<td>3 x 2b</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5倍希釈</td>
			<td>c</td>
			<td>5 x 2c</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7倍希釈</td>
			<td>d</td>
			<td>7 x 2d</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9倍希釈</td>
			<td>e</td>
			<td>9 x 2e</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1:HAアッセイ結果と原液のHA力価の計算。
4. 4-HAU抗原溶液の調製
<ol>
	<li>4-HAU抗原溶液の調製のための希釈係数を計算します: <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq3.jpg">。必要な4-HAUの総容量を決定します: V = 3mL xマイクロプレートの数。次に、抗原ストック溶液の必要量を計算します:<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/67256/67256eq5.jpg">、PBS:Vp = V - Va。 注意: 容量はミリリットルで測定されます。4-HAUのマイクロタイタープレートあたり3mLを推定します(25μL/ウェル×96ウェル×1.25=3mL)。</li>
	<li>計算された量のPBSを容器にピペットで入れ、対応する量の抗原ストック溶液を加えてよく混合し、4-HAU抗原溶液を得ます。 注:4-HAU抗原溶液はできるだけ早く使用する必要があります。</li>
</ol>
5. 4-HAU抗原溶液の逆滴定
<ol>
	<li>25、50、75、100、125、150 μLのPBSをマイクロタイタープレートの隣接する6つのウェルに分注し、各ウェルに25 μLの4-HAU抗原溶液を加え、10回ピペッティングして混合します。 注:4-HAU抗原溶液をPBSで1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、および1:7の希釈で希釈します。希釈操作の概略図を図3に示します。</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig3.jpg"> 
図3:逆滴定における4つの赤血球凝集ユニット溶液の希釈手順の概略図。 4-HAUワーキング溶液は、PBSで1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、および1:7の比率で希釈されます。PBSは青で、抗原は緑で描かれています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol start="2">
	<li>希釈した各抗原溶液25 μLをマルチチャンネルピペットを使用して別の列のウェルに移します。25 μLのPBSをネガティブコントロールとしてエクストラウェルに加えます。</li>
	<li>各ウェルに25 μLのPBSを加え、次に各ウェルに25 μLの1%チキンRBCを加えます。</li>
	<li>マイクロプレートシェーカーでプレートを~20秒間振って混合します。</li>
	<li>ネガティブコントロールのRBCが完全に落ち着くまで、室温(20-25°C)のベンチトップで~30分間放置します。</li>
	<li>結果を読み取り、記録します。 注:ネガティブコントロールウェルはHAを示していないはずです。理想的には、1:4の希釈が完全なHAでの最高希釈です。4-HAU溶液の力価が4を超える場合、最高希釈率は1:5、1:6、または1:7です。それより少ない場合は、1:2または1:3になります。バック滴定と代表的な結果の概略レイアウトを図4に示します。</li>
</ol>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig4.jpg"> 
図4:バック滴定のためのウェルの概略レイアウトと代表的な結果。 希釈した4-HAUワーキング溶液を新しい列に移し、PBSコントロールを追加します。濃い緑色から薄い緑色への勾配は、抗原濃度が高いものから低いものまでを示しています。代表的な結果は、1:4希釈が完全な赤血球凝集を示す最高希釈であることを示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol start="7">
	<li>必要に応じて、4-HAU抗原溶液を調整または再処方します。 注:逆滴定に使用した4-HAU抗原溶液の容量が全容量の≤1%(4-HAU抗原溶液の容量≥15mL)の場合は、表2で具体的な調整を参照してください。例えば、完全HAでの最高希釈率が1:2の場合、4-HAU抗原溶液の力価は2となり、以前の4-HAU抗原溶液の調製時と同様に同量の抗原を添加する必要があります。逆に、完全なHAの最高希釈率が1:6の場合、力価は6になり、PBSの半分の量を補充する必要があります。 逆滴定に使用した量が全体の1%を超える場合(4-HAU抗原溶液の容量&lt;15mL)は、補正した希釈係数を使用して4-HAU抗原溶液を再定式化します。具体的な修正については、 表 3 を参照してください。例えば、完全なHAの最高希釈率が1:2の場合、4-HAU抗原溶液の力価は2になり、希釈係数を元の1/2に調整する必要があります。逆に、完全HAの最高希釈率が1:6の場合、4-HAU抗原溶液の力価は6になり、希釈係数は元の3/2に調整されます。</li>
</ol>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>背滴定のHA力価</td>
			<td>抗原またはPBSの補充</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>VAの</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>VA/3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>副社長/4名</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>副社長/2名</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>3VP/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表2:逆滴定結果に基づいて4-HAU濃度を調整するための参考表。 VaとVpは、それぞれ4-HAU抗原溶液の製剤に使用される抗原とPBSの量を表します。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>背滴定のHA力価</td>
			<td>希釈係数の補正</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:2</td>
			<td>D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:3</td>
			<td>3D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:5</td>
			<td>5D/4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:6</td>
			<td>3D/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1:7</td>
			<td>7D/4</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表3:4-HAU抗原の再調製のための希釈係数補正の参照表。 Dは、以前に4-HAU抗原調製で使用されていた希釈係数を表します。
6. 血清の調製
<ol>
	<li>抗凝固剤を使用せずに手羽先から~1mLの血液を採取します。</li>
	<li>血液を1.5 mLの遠心チューブに移し、37°Cで~2時間インキュベートします。3,000 x gで10分間遠心分離し、上清を新しいチューブに慎重に吸引します。</li>
</ol>
7. HIアッセイ
<ol>
	<li>アッセイレイアウトに従ってマイクロタイタープレートを標識します。マルチチャンネルピペットを使用して、カラム1〜11の各ウェルに25 μLのPBSを、カラム12のウェルに50 μLを添加します。</li>
	<li>25 μLの血清を、陽性および陰性の血清コントロール列を含む各列の最初のウェルに添加します。ピペッティングを5回以上行って十分に混合します。</li>
	<li>各列の最初のウェルから2番目のウェルに25μLを移し、完全に混合します。2番目のウェルから3番目のウェルへ、そして10番目のカラムまで、移し替えと混合を続けます。混合後、ウェルから25 μLの液体を10列目に捨てます。</li>
	<li>25 μLの4-HAU抗原をカラム1-11の各ウェルに、血清濃度が低い方向から高い方向に添加します。</li>
	<li>マイクロプレートシェーカーでプレートを~20秒間振とうします。ベンチトップに放置して~30分間放置します。</li>
	<li>25 μLの1%チキン赤血球を各ウェルに、血清濃度が低い方向から高い方向に添加します。</li>
	<li>マイクロプレートシェーカーでプレートを~20秒間振って、完全に混合します。PBSコントロールウェルのRBCが完全に落ち着くまで、ベンチトップで~30分間そのままにしておきます。</li>
	<li>結果を読み取り、記録します。 注:HI力価は、4-HAU抗原の赤血球凝集を完全に阻害する最高の血清希釈値です。RBCの涙の形をした流れは、プレートを90°25秒間傾けることにより、各行の最後の列で観察できます。完全なHA(ストリーミングなし)は、各行の最後から2番目のウェルで観察できます。有効なテスト結果を得るには、陽性の血清コントロールのHI力価が既知のHI力価の1希釈以内である必要があります。陰性血清コントロールのHI力価は≤ 2 log2;RBCコントロールの自己HAの欠如。HAアッセイのワークフローの概略図については、図5を参照してください。</li>
</ol>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67256/67256fig5.jpg"> 
図5:赤血球凝集アッセイのワークフローの概略図。 PBSは青、血清は黄色、4-HAU抗原溶液は緑、1%チキンRBC懸濁液は赤で表されています。矢印は液体の分配の順序を示しています。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67256/67256fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<meta charset="utf8"></head><body>正確なNDV抗体検出のための4-HAU抗原の合理化された調製

<ol><li>Ayllon, J., García-Sastre, A., Martínez-Sobrido, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+recombinant+Newcastle+disease+virus+from+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rescue of recombinant Newcastle disease virus from cDNA.</a> J Vis Exp. (80), e50830(2013).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+HN+protein+of+Newcastle+disease+virus+induces+cell+apoptosis+through+the+induction+of+lysosomal+membrane+permeabilization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">The HN protein of Newcastle disease virus induces cell apoptosis through the induction of lysosomal membrane permeabilization.</a> PLoS Pathog. 20 (2), e1011981(2024).</li>
<li>Miller, P. J., Decanini, E. L., Afonso, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newcastle+disease%3A+evolution+of+genotypes+and+the+related+diagnostic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Genet+Evol%22%5BJournal%5D)">Newcastle disease: evolution of genotypes and the related diagnostic challenges.</a> Infect Genet Evol. 10 (1), 26-35 (2010).</li>
<li>Terregino, C., Capua, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+traits+and+pathology+of+Newcastle+disease+infection+and+guidelines+for+farm+visit+and+differential+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Avian+Influenza+and+Newcastle+Disease%3A+A+Field+and+Laboratory%22%5BJournal%5D)">Clinical traits and pathology of Newcastle disease infection and guidelines for farm visit and differential diagnosis.</a> Avian Influenza and Newcastle Disease: A Field and Laboratory. , 113-122 (2009).</li>
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</ol>

本稿で提案する最適化された方法は、4-HAU抗原溶液を正確に調製するためのアプローチを示しています。OIEおよびEUのガイドラインでは、HA滴定の初期希釈を推奨していますが、使用する希釈比に関する正確な詳細は提供されておらず、特定の方法論も提供されていません11,12。さらに、FAOとOIEは、4-HAUの精度を高める手段としてバック滴定を推奨していますが、明確なプロトコル11,13が欠けています。この記事では、抗原のHA滴定における正確な希釈比(1:3、1:5、1:7、1:9)を使用したプロトコルを描写し、4-HAU調製の最大値を選択することで、これらの欠点に対処します。さらに、このプロトコルには、バック滴定プロセスに1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、および1:7の希釈比が組み込まれています。さらに、アッセイの実現可能性を高めるために、調整または再定式化の包括的な方法が提供されます。
HA滴定における初期希釈...

<table><tbody><tr><td>&nbsp;滅菌遠心チューブ(15 mL)&nbsp;</td><td>Labshark</td><td>130201030</td><td></td></tr><tr><td>空冷式低速卓上遠心分離機&nbsp;</td><td>Titan</td><td>LDC-5</td><td></td></tr><tr><td>Alserveの解決</td><td>Sangon Biotech</td><td>E607058</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離</td>機 <td>DLAB</td><td>9032002121</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てパスツールピペット</td><td>Titan</td><td>SWXG-004</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て滅菌シリンジ(1 mL)</td><td>Beyotime</td><td>FS801-30PCS</td><td></td></tr><tr><td>使い捨て V ボトムマイクロタイタープレート(96 ウェル)</td><td>Labshark</td><td></td><td></td>130207001</tr><tr><td>マイクロプレートシェーカー</td><td>江蘇新康医療機器有限公司</td><td>XK96-3</td><td></td></tr><tr><td>NDV HI ネガティブセラ</td><td>青島リゲン診断開発センター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI ポジティブセラ</td><td>青島リゲン診断開発センター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NDV HI検査抗原</td><td>青島リゲン診断開発センター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBSソリューション (1x)&nbsp;</td><td>Adamas Life</td><td>C8020</td><td></td></tr><tr><td>滅菌遠心チューブ (1.5 mL)</td><td>Labshark</td><td>130201012</td><td></td></tr></tbody></table>

ニューカッスル病ウイルス血清学の血球凝集阻害アッセイのための抗原調製物の最適化

Optimization of Antigen Preparation for Hemagglutination Inhibition Assay of Newcastle Disease Virus Serology

最適化法を用いて製剤化された4-HAU抗原溶液の力価の検証 この研究では、HA力価を正確に決定するために抗原ストック溶液のさまざまな希釈液を使用し、4-HAU抗原溶液を調製するための希釈係数の計算を容易にしました。その結果、最適化された分析法は効率的かつ正確であり、バック滴定と調整の手順を繰り返す回数を減らすことができることが明らかになりました。最初のシナリオでは、初期 HA 力価が ~512 であったため、最終力価は 768 となり、4-HAU 抗原溶液の要件と一致しました(図 6)。同様に、2番目の例では、~256の初期力価は変わらず、調製した4-HAU抗原溶液が実験基準を満たしていることが確認されました(図7)。最後に、初期力価が~128の場合、決定された正確な力価144は実験仕様との互換性を維持しました(図8)。この合理化されたアプローチにより、従来の方法と比較して時間投資が大幅に削減され、わずか1〜2時間で済み...

Accurate assessment of Newcastle disease virus (NDV) antibody titers is crucial for effective poultry disease control and surveillance. This article ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオは、特定の抗原に対する血清抗体を検出するための赤血球凝集阻害アッセイを示しています。テストウェルでの赤血球凝集阻害とコントロールウェルでの赤血球凝集の確認は、明確な視覚パターンによって達成されます。このアッセイは、免疫応答、ワクチンの有効性を評価し、ウイルス学および免疫学におけるウイルス感染の研究において重要な役割を果たします。...

標的抗原に対する血清抗体を検出するためのヘマググルチン化阻害アッセイ

このビデオは、ヒト血清中のα2,6結合シアル酸を過剰発現するMadin-Darby Canine Kidney...

ヒト血清中の中和抗体価を測定するためのマイクロ中和アッセイ

このビデオは、血清サンプル中のインフルエンザノイラミニダーゼ(NA)阻害抗体価を測定するアッセイを示しています。NAに対する抗体を含む血清サンプルをフェチュイン被覆マイクロウェルプレートに加えます。ウイルスを添加すると、抗体はウイルスNAがフェチュインを切断してガラクトース部分を露出するのを防ぎます。次に、ペルオキシダーゼ結合レクチンを添加し、露出したガラクトースに結合します。NA阻害抗体価は、ペルオキシダーゼ基質が固定化されたレクチン結合ペルオキシダーゼによって切断されて発色する比色試験を用いて決定されます。...

インフルエンザノイラミニダーゼ阻害抗体価測定法

ニューカッスル病ウイルス（NDV）は広く、とりわけ、ワクチン接種および治療のための新たなベクターを開発するために、ここ数年で研究されてきた。これらの研究は、そのような私たちがここで説明しているようなcDNAから組換えウイルスを救出するための技術、することが可能となっている。...

cDNAからの組換えニューカッスル病ウイルスのレスキュー

ここでは、実証の原則二価のアデノウイルス5型（Ad5）ベクトルを生成するためのプロトコルを提示するAd5 / H5-HVR1-KWAS-HVR5 -彼の6抗原キャプシド取り込み戦略を利用することによって。このベクターは、定性的フィットネス、Ad5の陽性in vitroでの血清、および抗原性ならびに組み込まれた抗原に対する免疫原性を脱出する能力を示すことが実証されました。...

アデノウイルス血清型5ベクターワクチンアプローチの開発のための抗原キャプシド取り込み戦略を活用

血清中のインフルエンザノイラミニダーゼ(NA)阻害抗体価を測定するための酵素結合レクチンアッセイ(ELLA)について説明します。このアッセイでは、ピーナッツ凝集素を使用して、フェチュインコーティングされた96ウェルプレートからNAがシアル酸を除去したときにアクセス可能になるガラクトース残基を定量します。...

酵素結合レクチンアッセイによってインフルエンザノイラミニダーゼ阻害抗体価を測定します

この研究は説明します ウイルス間の抗原性の関係を分析するための画像化ベースのマイクロ中和アッセイ。プロトコルは、フラットベッドスキャナを使用し、滴定、滴定の定量、中和、及び中和定量を含む4つのステップがあります。アッセイは、現在の循環インフルエンザA（H1N1）pdm09、A（H3N2）、およびB型ウイルスでうまく動作します。...

定量的マイクロ中和アッセイの最適化

示されたプロトコルでは、インフルエンザ ワクチン接種者の血清サンプルからインフルエンザ特異抗体価を定量化する赤血球凝集抑制法を実行する方法について説明します。最初のアッセイは、凝集によって最適なウイルス抗原濃度を決定します。2 番目の分析は,...

インフルエンザ特異抗体価を定量化する最適化された赤血球凝集抑制 (HI) 試験

ここでは、高力価組換えニューカッスル病ウイルスの生産、精製、および定量のための詳細な手順を提供します。このプロトコールは一貫して&gt;6×109 プラーク形成単位/ mLを産生し、 in vivo 動物実験に適したウイルス量を提供する。 インビボでの...

アラントイック液からの高力価組換えニューカッスル病ウイルスの生産

我々はプロセスに方法を記述し、画面のヴェロ細胞培養アッセイによりウイルスの多様性のための蚊をフィールド集めた。この手法を採用することにより、我々はコネチカットで収集された蚊の4分類の家族から9種類のウイルスを検出した。...

Vero細胞培養アッセイによるフィールドコレクト蚊から感染性ウイルスの検出

学ぶニューカッスル病ウイルス血清学のための4-HAU抗原調製最適化法。血球凝集阻害アッセイの精度向上と偽陽性低減により、家禽の疾病監視と制御に貢献する効率的な手法を確立します。

ニューカッスル病ウイルス血清学の血球凝集阻害アッセイのための抗原調製物の最適化

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