Name: 角膜上皮掻爬術と角膜縫合糸の併用に基づくラットにおける重篤な角膜炎症モデルの確立 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-22T14:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: 学ぶ：ラットの角膜上皮掻爬術と縫合による重篤な角膜炎症モデルの確立方法。角膜縁幹細胞を損傷せず炎症を誘導し、再生医療研究への応用可能性を示す。

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<ol><li>Ang, L. P., Tan, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ocular+surface+stem+cells+and+disease%3A+Current+concepts+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Acad+Med+Singap%22%5BJournal%5D)">Ocular surface stem cells and disease: Current concepts and clinical applications.</a> Ann Acad Med Singap. 33 (5), 576-580 (2004).</li>
<li>Mao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+p38+MAPK+signaling+pathway+ameliorates+tissue-engineered+corneal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+A%22%5BJournal%5D)">Downregulation of p38 MAPK signaling pathway ameliorates tissue-engineered corneal epithelium.</a> Tissue Eng Part A. 28 (23-24), 977-989 (2022).</li>
<li>Sprogyte, L., Park, M., Di Girolamo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+alkali+injury-induced+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+literature+survey+of+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of alkali injury-induced limbal stem cell deficiency: A literature survey of animal models.</a> Cells. 12 (9), 1294(2023).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lacrimal+gland+microenvironment+changes+after+obstruction+of+lacrimal+gland+ducts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Lacrimal gland microenvironment changes after obstruction of lacrimal gland ducts.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 63 (3), 15(2022).</li>
<li>Le, Q., Chauhan, T., Deng, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+criteria+for+limbal+stem+cell+deficiency+before+surgical+intervention-+A+systematic+literature+review+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Surv+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic criteria for limbal stem cell deficiency before surgical intervention- A systematic literature review and analysis.</a> Surv Ophthalmol. 65 (1), 32-40 (2020).</li>
<li>Li, W., Hayashida, Y., Chen, Y. T., Tseng, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niche+regulation+of+corneal+epithelial+stem+cells+at+the+limbus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Niche regulation of corneal epithelial stem cells at the limbus.</a> Cell Res. 17 (1), 26-36 (2007).</li>
<li>Ou, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+ectodysplasin+a+on+the+ocular+surface+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of ectodysplasin a on the ocular surface homeostasis.</a> Int J Mol Sci. 23 (24), 12(2022).</li>
<li>Lin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limbal+stem+cell+dysfunction+induced+by+severe+dry+eye+via+activation+of+the+p38+MAPK+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Limbal stem cell dysfunction induced by severe dry eye via activation of the p38 MAPK signaling pathway.</a> Am J Pathol. 193 (11), 1863-1878 (2023).</li>
<li>Jiang, G. J., Li, B. B., Fan, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timolol+induces+necroptosis%2C+apoptosis+and+senescence+concentration-dependently+in+rabbit+limbal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Timolol induces necroptosis, apoptosis and senescence concentration-dependently in rabbit limbal stem cells in vitro.</a> Life Sci. 277, 119453(2021).</li>
<li>Castro-Munozledo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Corneal+epithelial+stem+cells%2C+their+niche+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Review: Corneal epithelial stem cells, their niche and wound healing.</a> Mol Vis. 19, 1600-1613 (2013).</li>
<li>Atalay, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+critical+narrative+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models for limbal stem cell deficiency: A critical narrative literature review.</a> Ophthalmol Ther. 13 (3), 671-696 (2024).</li>
<li>Delic, N. C., Cai, J. R., Watson, S. L., Downie, L. E., Di Girolamo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+clinical+translational+relevance+of+animal+models+for+limbal+stem+cell+deficiency%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evaluating the clinical translational relevance of animal models for limbal stem cell deficiency: A systematic review.</a> Ocul Surf. 23, 169-183 (2022).</li>
<li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+limbal+stem+cell+deficiency+induced+by+topical+medication+with+the+preservative+benzalkonium+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A mouse model of limbal stem cell deficiency induced by topical medication with the preservative benzalkonium chloride.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (9), 6314-6325 (2013).</li>
<li>Ye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+nanocomplex+based+corneal+neovascularization+theranostics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Biomimetic nanocomplex based corneal neovascularization theranostics.</a> J Control Release. 374, 50-60 (2024).</li>
<li>Zhu, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synergistic+therapy+with+antioxidant+and+anti-VEGF%3A+Toward+its+safe+and+effective+elimination+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">A synergistic therapy with antioxidant and anti-VEGF: Toward its safe and effective elimination for corneal neovascularization.</a> Adv Healthc Mater. 13 (5), 10(2024).</li>
<li>Yu, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+assembly+drug+delivery+strategy+based+on+ultra-small+nanoparticles%3A+Toward+high+drug+permeation+and+accumulation+for+CNV+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Eng+J%22%5BJournal%5D)">In vivo assembly drug delivery strategy based on ultra-small nanoparticles: Toward high drug permeation and accumulation for CNV treatment.</a> Chem Eng J. 450, 137968(2022).</li>
<li>Wu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+SU6668+pure+nanoparticle-based+eyedrops%3A+Toward+its+high+drug+accumulation+and+long-time+treatment+for+corneal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">A SU6668 pure nanoparticle-based eyedrops: Toward its high drug accumulation and long-time treatment for corneal neovascularization.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 290(2024).</li>
<li>Long, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+tissue-engineered+corneal+epithelium+based+on+ultra-thin+amniotic+membrane+and+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A novel tissue-engineered corneal epithelium based on ultra-thin amniotic membrane and mesenchymal stem cells.</a> Sci Rep. 14 (1), 17407(2024).</li>
<li>Giroux, V., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metaplasia%3A+Tissue+injury+adaptation+and+a+precursor+to+the+dysplasia-cancer+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Metaplasia: Tissue injury adaptation and a precursor to the dysplasia-cancer sequence.</a> Nat Rev Cancer. 17 (10), 594-604 (2017).</li>
<li>Herfs, M., Hubert, P., Delvenne, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+metaplasia%3A+Adult+stem+cell+reprogramming+and+%28pre%29neoplastic+transformation+mediated+by+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Epithelial metaplasia: Adult stem cell reprogramming and (pre)neoplastic transformation mediated by inflammation.</a> Trends Mol Med. 15 (6), 245-253 (2009).</li>
<li>Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metaplasia+and+transdifferentiation%3A+From+pure+biology+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Metaplasia and transdifferentiation: From pure biology to the clinic.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 8 (5), 369-378 (2007).</li>
<li>Slack, J. M., Tosh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transdifferentiation+and+metaplasia--switching+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Transdifferentiation and metaplasia--switching cell types.</a> Curr Opin Genet Dev. 11 (5), 581-586 (2001).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+chronic+smoking+on+meibomian+gland+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of chronic smoking on meibomian gland dysfunction.</a> PLoS One. 11 (12), e0168763(2016).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+therapeutic+strategy+based+on+oxidant-antioxidant+balance+for+fuchs+endothelial+corneal+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Evolution of therapeutic strategy based on oxidant-antioxidant balance for fuchs endothelial corneal dystrophy.</a> Ocul Surf. 34, 247-261 (2024).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Meibomian+gland+alteration+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Meibomian gland alteration in patients with systemic lupus erythematosus.</a> Lupus. 31 (4), 407-414 (2022).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histopathology-based+diagnosis+of+Mooren%27s+ulcer+concealed+beneath+the+pterygium+on+eye%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Histopathology-based diagnosis of Mooren's ulcer concealed beneath the pterygium on eye.</a> J Histotechnol. 45 (4), 195-201 (2022).</li>
<li>Tseng, S. C., Hatchell, D., Tierney, N., Huang, A. J., Sun, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+specific+keratin+markers+by+rabbit+corneal%2C+conjunctival%2C+and+esophageal+epithelia+during+vitamin+A+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of specific keratin markers by rabbit corneal, conjunctival, and esophageal epithelia during vitamin A deficiency.</a> J Cell Biol. 99 (6), 2279-2286 (1984).</li>
<li>Espana, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+corneal+pannus+removed+from+patients+with+total+limbal+stem+cell+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of corneal pannus removed from patients with total limbal stem cell deficiency.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (9), 2961-2966 (2004).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air+exposure+induced+squamous+metaplasia+of+human+limbal+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Air exposure induced squamous metaplasia of human limbal epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49 (1), 154-162 (2008).</li>
<li>Marino, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+basement+membrane+injury+and+regeneration+modulates+corneal+fibrosis+after+pseudomonas+corneal+ulcers+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Epithelial basement membrane injury and regeneration modulates corneal fibrosis after pseudomonas corneal ulcers in rabbits.</a> Exp Eye Res. 161, 101-105 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10-0縫合ライン</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>8065698001</td><td></td></tr><tr><td>2 mm 角膜トレフィン</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>20 &mu;L、100 &mu;L、1 mLピペットガンヘッド、細胞培養プレート、培養プレート、遠心チューブ広</td><td>州Jiete Biological Co.、Ltd.、中国</td><td>https://www.jetbiofil.com/index.html-20</td><td></td></tr> <tr><td>/ -80 >C冷蔵庫</td><td>青島ハイアールカンパニー、中国</td><td>https://www.haier.com/cn/</td><td></td></tr> <tr><td>A 10 mLシリンジ</td><td>&nbsp;浙江コンデライ医療機器有限公司、中国</td><td>https://en.kdlchina.com/zhejiang/25.html</td><td></td></tr> アミレンアルコール上海の<tr><td>スライド</td><td>ShiTai Company</td><td>188105</td><td></td>付着</tr>します<tr><td></td><td>。マックリン生化学、中国</td><td>http://www.macklin.cn/products/</td><td></td></tr> <tr><td>抗サイトケルチン</td><td>アブカム、英国</td><td>ab76318</td><td></td></tr><tr><td>抗ケラチン12抗体 EPR17882</td><td>アブカム、英国</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>抗PAX6抗体</td><td>アブカム、英国</td><td>ab195045</td><td></td></tr><tr><td>アンチストリッピングスライド、カバースリップ</td><td>江蘇泰実験装置有限公司、中国</td><td>https://cn.citotest.com/</td><td></td></tr> <tr><td>オートクレーブ</td><td>平山、日本</td><td>https://hirayama.com.cn/about/</td><td></td></tr> <tr><td>アバーティン</td><td>上海アラジン生化学技術、中国</td><td>https://www.aladdin-e.com/zh_cn/A111225.html</td><td></td></tr><tr><td>クロロホルム</td><td>上海生物工学有限公司、中国</td><td>https://www.siobp.com/web</td><td></td></tr><tr><td>CO2オーブンインキュベーター、超音波破砕機、遠心分離機</td><td>Thermo Fisher Technologies Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.,</td><td>https://www.clinx.cn/about</td><td></td></tr><tr><td>角膜上皮鉗子</td><td>蘇州XVI Vision Company, 中国</td><td>53418D</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Vector. Inc., USA</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>DEPC水</td><td>&nbsp;Shanghai Biological Engineering Co., Ltd., China</td><td>https://www.siobp.com/web</td><td></td></tr><tr><td>Dicuro eye cream(オフロキサシンアイクリーム)</td><td>Santian Pharmaceutical Corporation, Japan</td><td>https://www.santen.com/asia</td><td></td></tr><tr><td>D-KSFM, culture medium, double antibody, and PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>ED1</td><td>AbD Serote c, United</td> Kingdom<td>&nbsp;</td><td></td>MCA341GA</tr><tr><td>電子天秤</td><td>上海 Ohaus バイオテクノロジー カンパニー、中国</td><td>http://shbio.com/company</td><td></td></tr><tr>膜 <td>Parafilm, Inc., 米国の</td><td>筐体</td><td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>フルオレセインナトリウム テスト ストリップは</td><td>、眼科 天津 Jingming New Technology Development Co., Ltd., Ltd., 中国</td><td>https://www.eworldtrade.com/c/jingmingtechnological/</td><td></td></tr><tr><td>蛍光逆位相差顕微鏡法システム</td><td>TE-2000U, ニコン, 日本</td><td>https://www.microscopyu.com/museum/eclipse-te2000-inverted-microscope</td><td></td></tr><tr><td>冷凍卓上遠心分離機</td><td>ドイツ, エッペンドルフ,</td><td>https://www.eppendorf.sh.cn&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ガラスシートフレーム</td><td>厦門天京バイオテクノロジー株式会社、中国</td><td>http://www.tagene.net/</td><td></td></tr> <tr><td>H-1200、DAPIシール剤付き</td><td>厦門ジュインバイオテクノロジー株式会社、中国</td><td>https://www.bosonbio.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>HE染色キット</td><td>Auragene、中国</td><td>http://jushengwu.com/a048/</td><td></td></tr> <tr><td>ヘマトキシリン-エオシン染料溶液キット</td><td>AURAGEN、米国</td><td>P032IH</td><td></td></tr><tr><td>高および低精密電子天秤</td><td>Sdolis、ドイツ</td><td>https://www.solisinverters.com/global</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Shanghai Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd., China</td><td>https://en.reagent.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Ki-67抗体</td><td>アブカム、英国</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>液体窒素</td><td>厦門Yidongガス株式会社、中国</td><td>https://www.china.tdk.com.cn/tdk_chn_en/tdk_xiamen/</td><td></td></tr> <tr><td>マイクロハンドホルダー</td><td>蘇州XVIビジョンカンパニー、中国</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>マルチホルムアルデヒド粉末</td><td>Sigm、アメリカ</td><td>https://www.sigmaaldrich.cn</td><td></td></tr><tr><td>常温遠心分離機 46</td><td>エッペンドルフ、ドイツ</td><td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td></tr><tr><td></td><td>OCT 上海茂康Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Ordinary biological Micrographic System</td><td>Eclipse 50i, Nikon, Japan</td><td>https://www.microscope.healthcare.nikon.com/zh_CN/products/upright-microscopes/eclipse-ni-series</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Shanghai Anjin Biotechnology Co., Ltd, China</td><td>SH30256.01</td><td></td></tr><tr><td>PCR, and the reactor</td> apparatus <td>Biometra Thermocycler, Germany</td><td>.https://www.analytik-jena.com/products/life-science/pcr-qpcr-thermal-cycler/thermal-cycler-pcr/biometra-tone-series/</td><td></td></tr> <tr><td>さまざまな仕様のピペット</td><td>Eppendorf Company, Germany</td><td>https://www.eppendorf.com/cn-zh/</td><td></td></tr> <tr><td>Primers for Rt-PCR</td><td>Shanghai Bio-Tech Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Promeaine hydrochloride 0.5% 点眼薬</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>Rat PMN antibody</td><td>Fitzgerald, United</td><td>States 20R-PR020</td><td></td></tr><tr><td>リアルタイム蛍光定量 PCR</td><td>応用バイオシステムズ,&nbsp;United States</td><td>https://www.thermofisher.cn</td><td></td></tr><tr><td>Reverse transcription kit</td><td>TAKARA, Japan</td><td>https://www.takarabiomed.com.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>スリットランプ</td><td>TOPCON, Japan</td><td>https://topconchina.cn/</td><td></td></tr> <tr><td>Smooth forceps</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Specimen-box</td><td>Lambolid (Fuzhou) Biotechnology Co., Ltd., China</td><td>http://chuangdianbio.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Superclean bench</td><td>New Plus Pi Art High Technology Company Limited, Singapore</td><td>https://www.hi-p.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Toothed Forceps</td><td>Suzhou XVI Vision Company, China</td><td>http://www.66vision.com/</td><td></td></tr> <tr><td>Toppicamide eye drops (Medol)</td><td>Alcon, Inc., USA</td><td>https://www.alcon.com/about-us</td><td></td></tr><tr><td>Trace nucleic acid protein濃度試験</td>器 <td>Thermo Fisher Technologies Inc., USA</td><td>https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home.html</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen The United States</td><td>https://www.fishersci.com/us/en/brands/IIAM0WMR/invitrogen.html</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss, with a surgical microscope</td><td>Carl ZEIS, Germany</td><td>https://www.zeiss.com/corporate/en/about-zeiss.html</td><td></td></tr></tbody></table>

角膜上皮掻爬術と角膜縫合糸の併用に基づくラットにおける重篤な角膜炎症モデルの確立

Establishing a Severe Corneal Inflammation Model in Rats Based on Corneal Epithelium Curettage Combined with Corneal Sutures

図1Aに示すように、細隙灯による観察により、角膜上皮の治癒が阻害されていることがわかりました。通常の状況では、角膜中央上皮は除去後24〜48時間以内に完全に治癒しますが、縫合モデルと組み合わせた角膜中央上皮切除では、新しい血管が存在し続けました。モデル確立後3日目には、顕著な角膜辺縁浮腫と血管新生が観察され、角膜辺縁系幹細胞欠損症の典型的な徴候が局所的に現れた。時間が経つにつれて、7日目になっても、治癒はまだ完全ではありませんでした。角膜炎症指数は、毛様体うっ血、角膜傍傍浮腫、および角膜中央浮腫を使用して評価されました。角膜浮腫は徐々に悪化し、角膜の炎症(図1A)は悪化し続けました。さらに、角膜新生血管は炎症の指標です。炎症の進行に伴い、角膜血管新生術(図1B)と炎症指数(図1C)は継続的な増加を示しました。
モデル作成から7日後に眼組織への凍結埋埋込みを行いました。ヘマトキシリンとエオシンの染色(図2A)では、辺縁部と角膜中央部で上皮が肥厚し、上皮配列が正常な形態を失い、非定型的な過形成が示されました。角膜間質は浮腫性に見え、炎症細胞の顕著な浸潤を伴いました。PMNおよびED1免疫蛍光染色(図2B)を使用すると、好中球およびマクロファージの浸潤の顕著な増加が観察されました。この研究では、IL-1β(図2C)とMIP-1α(図2D)を使用して炎症因子を評価し、IL-1βは3日目にピークに達し、その後徐々に減少する一方で、MIP-1αは時間の経過とともに継続的に増加することを発見しました。
慢性炎症は通常、Pax6のダウンレギュレーション、Krt12発現の低下、角膜上皮の扁平上皮化生など、一連の辺縁系幹細胞の欠損を引き起こします。本研究で開発したモデルが角膜上皮表現型にこれらの変化を誘発できるかどうかを検証するために、角膜上皮のKrt12(図3A)およびPax6(図3B)の免疫蛍光染色を行いました。Krt12の発現は炎症が長引くと減少し、7日目にはKrt12陽性細胞が1つだけ観察され、角膜上皮ではPax6の発現が有意に減少しました。mRNAレベルでは、正常な角膜上皮マーカーであるKrt12(図3C)およびPax6(図3D)の発現レベルは7日目に有意に減少しました。しかし、扁平上皮化生マーカーであるKrt10(図3E)とSprr1b(図3F)の発現レベルは、7日目に有意に増加しました。
増殖マーカーKi67を用いて角膜上皮を染色したところ、7日目までにKi67陽性角膜上皮細胞の数が有意に減少したことが示されました(図4A)。角膜上皮幹細胞の状態は、角膜辺縁系幹細胞特異的マーカーABCG2(図4B)および上皮前駆細胞マーカーP63(図4C)を用いて評価した。ABCG2およびP63のレベルは、正常グループのレベルよりも有意に低かった。さらに、幹細胞のゴールドスタンダードであるクローン培養法を用いて、この過程での角膜辺縁系幹細胞の変化を評価しました。角膜辺縁系幹細胞(図4D)のクローン形成速度は、3日目までに減少し、7日目までに大幅に減少し、クローンの平均面積は小さくなり、7日目には数個のホロクローンしか見えないことが観察されました。コロニー形成効率(CFE)は、培養皿の顕微鏡フィールドで見える細胞クローンをカウントすることによって得られました。CFE(図4E)は、炎症条件下で角膜辺縁系幹細胞の数が徐々に減少することを示しました。このことから、このモデルでは重度の炎症が角膜辺縁系上皮幹細胞の枯渇につながることが示唆されており、この過程は角膜辺系幹細胞の表現型転換を誘導するのではなく、分化や自己複製に問題をもたらすことが示唆されています。
この研究で使用された炎症モデルは、角膜への炎症細胞の広範な浸潤、角膜上皮の形成異常、正常な角膜上皮表現型におけるPax6およびKrt12の発現の中断または減少など、LSCDに特徴的な角膜変化をもたらしました。さらに、Krt10 mRNAの発現が有意に増加しました。要約すると、この実験モデルは、炎症によって誘発される角膜上皮幹細胞の異常な分化の研究に適しています。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2.jpg"> 
図1:炎症モデルの確立。 重度の炎症が角膜上皮幹細胞に及ぼす影響を研究するために、重度の炎症モデルが確立されました。(A)モデルを誘導した後、スリットランプ撮影により角膜を観察した。モデリングの3日後、ラットの角膜辺縁部は重度の浮腫性であり、角膜辺縁系幹細胞欠損症の典型的な徴候である明らかな血管新生と限局性過形成を伴いました。7日目までに角膜浮腫は徐々に悪化し、血管新生は成長し続けました。炎症の進行に伴い、(B)角膜新生血管術と(C)炎症指数が継続的に増加しました。*P &lt; 0.05、****P &lt; 0.0001。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig1v2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig02.jpg"> 
図2:モデリング後の炎症反応。 モデルが角膜に誘導する炎症反応を評価しました。(A)眼球のヘマトキシリンとエオシンの染色は、炎症過程で、辺縁部と中央の角膜上皮の両方が肥厚し、角膜上皮の配置が正常な形態を失い、非定型過形成の兆候を示すことを示しました。(B)マクロファージマーカーED1(緑)と好中球マーカーPMN(赤)が有意に増加した。RT-qPCRでは、角膜上皮炎症因子(C)IL-1βおよび(D)MIP-1αの有意な上昇が示されました。青はDAPIによる核染色を表し、スケールバー= 50 μm。p &lt; 0.001 です。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig03v2.jpg"> 
図3:炎症条件下での細胞の表現型の変化。 辺縁上皮における(A、赤)KRT12および(B)PAX6の免疫染色。(C)KRT12 mRNAの発現レベルは、炎症が進行するにつれて有意に減少します。(D)PAX6 mRNAの発現は、炎症条件下での辺縁上皮の異常な分布と顕著な減少を明らかにしています。逆に、炎症時には、(E)Krt10や異常に分化した角膜上皮マーカー(F)Sprr1bのmRNA発現が有意に増加します。青はDAPIによる核染色を表し、スケールバー= 50 μm。**p &lt; 0.01, ***p &lt; 0.001, ****p &lt; 0.0001. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67305/67305fig04.jpg"> 
図4:炎症状態下での辺縁系幹細胞の変化。 (A, 赤) Ki67の免疫蛍光画像は、炎症誘発後の増殖細胞の変化を示しています。幹細胞マーカー(B)ABCG2のmRNA発現は大幅に減少します。前駆細胞マーカー(C)p63も発現しています。(D)クリスタルバイオレット染色画像および(E)CFEは、炎症条件下での辺縁系幹細胞の数の減少を示しています。青色はDAPIで染色された核を示します。スケールバーは50μmです。*P &lt; 0.05、**P &lt; 0.01、***P &lt; 0.001、****P &lt; 0.0001。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67305/67305fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="2">プライマー名</td>
			<td colspan="3">プライマー配列</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">TNF-a</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-TCAGTTCCATGGCCCAGAC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-GTTGTCTTTGAGATCCATGCCATT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">IL-1β</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-CCTCGTCCTAAGTCACTCGC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-GGCTGGTTCCACTAGGCTTTTT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">パックス6</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-GTGTTCAGTGCAGAGCCTTCTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-TTCACCGTTGCTGTTCACTG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">KRT12</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-AGCTAACGCGGAACTGGAAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-CTCTCCTCTCTTGGTGAGGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">krt10の</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-TCCGGGATCTGGAAGAGTCAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-TTGGGTAAGCTTTTTGCTAAGTGGAA-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">Sprr1bの</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-CCATCCCAAGGCACCTGAG-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-TGCTGGTATGGTGATGGAGT-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="2">アクチン</td>
			<td>フォワード</td>
			<td colspan="3">5'-CACCCGCGAGTACAACCTTC-3'</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>逆</td>
			<td colspan="3">5'-CCCATACCACACCCATCACC-3'</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1:定量的RT-PCRに使用したプライマーの配列。

Corneal inflammation, especially severe corneal inflammation, plays a significant role in the development of corneal limbal stem cell dysfunction. ...

establishing-severe-corneal-inflammation-model-rats-based-on-corneal

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Medicine

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