Name: 水性欠乏性ドライアイのマウスモデルの構築 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-01T14:40:00.000+00:00
Duration: 5 min 21 s
Description: 学ぶ水性欠乏性ドライアイのマウスモデル構築法。眼窩外涙腺と眼窩下涙腺を摘出し、シェーグレン症候群などの重症ドライアイに類似した病理状態を再現します。手術の簡略化と動物への負担低減を実現し、新たな治療法開発の基盤となります。

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この研究は、貴州省科学技術プロジェクト(QKHJC-ZK[2024]ZD043)、福建省著名な若手学者のための科学基金(2023J06053 [S.O.へ])、中国自然科学基金会(No.82101084 [S.O.へ]、中国奨学金評議会（CSC, 202306310049 [Y.W.へ])の支援を受けたものです。

この研究では、7-8週齢の雌C57BL/6(C57)マウスを使用しました。すべての手順は、眼科および視覚研究における動物の使用に関するARVOガイドラインに準拠しており、貴州医科大学の動物倫理委員会によって承認されました（承認第2305193号)。細隙灯検査では眼表面病変は認められなかった。
1. 術前のステップ
<ol>
	<li>ニードルホルダー、糸付き5-0縫合針、眼科用手術用ハサミ、鉗子などの急速滅菌器を使用して器具を滅菌します。</li>
	<li>0.3 mL / 100 gの用量で腹腔内注射により、1.25%アベルチンでマウスに麻酔をかけます。.</li>
	<li>麻酔が完了したら、マウスを外側の褥瘡の位置に置き、手術部位から毛を取り除きます。メロキシカム 20 mg/kg を術前 30 分に腹腔内に投与し、その後は術後 8 時間ごとに投与します。</li>
	<li>ヨードフォアとアルコールを交互に3回塗布して手術野を消毒します。</li>
	<li>ドライアイモデルの構築
	<ol>
		<li>マウスを横方向の褥瘡の位置に置きます。手術部位を手術用顕微鏡で露出させます。</li>
		<li>切開を行う前に、つま先をつまんで麻酔の深さを確認してください。マウスの顔の右側の皮膚を歯付き鉗子で固定し、外耳介と下顎線と交差する線の中点を目頭に切開します。筋肉組織を露出させます。筋肉にあるELGを慎重に取り外します。</li>
		<li>皮膚の切開部を目頭まで伸ばし、筋肉を鈍く分離し、筋肉の下の明るい赤い腺を見つけます。ILGをはがして取り外します。</li>
		<li>ニードルホルダー、眼科用手術用ハサミ、鉗子を使用して、滅菌済みの5-0ナイロン縫合糸と針を取り付けて切開部を縫合します。</li>
		<li>感染を防ぐために、手術の最後にオフロキサシン軟膏を塗布します。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>片側ELGとILGを除去した後、マウスをリズミカルな12:12時間の明暗サイクルの環境に置いて、餌と水に自由にアクセスできます。これにより、片側ドライアイモデルが作成され、内部および外部の涙腺を持つ反対側の眼が正常な対照群として機能します。</li>
</ol>
2. 涙液生成の測定
<ol>
	<li>マウスに1.25%アベルチンを0.3 mL / 100 gの用量で腹腔内に麻酔します。.</li>
	<li>全身麻酔下で、適切に包装され、市販の滅菌されたフェノールレッドスレッドを使用して、涙液分泌物の測定を行います。</li>
	<li>測定する下まぶたをそっと引き下げます。フェノールレッドスレッドの糸の上部を下まぶたの内側と外側の3分の1に配置し、タイマーをすぐに開始します。</li>
	<li>一度に片方の目で15秒間テストを実行します。</li>
	<li>割り当てられた時間が経過したら、慎重に下まぶたを引っ込め、フェノールレッドスレッドを下向きに取り外します。</li>
	<li>フェノールレッドスレッドの外袋に設けられているスケールを使用して、スレッドの上部からレッド部分全体までを測定します。</li>
	<li>電子ストップウォッチを使用して、テストの時間を正確に記録します。</li>
</ol>
3. 凍結組織スライスの調製
<ol>
	<li>CO2による窒息後のマウスで急速な頸部脱臼を行います。</li>
	<li>ハサミや鉗子を使って、丁寧に眼球を取り出します。</li>
	<li>眼球を最適な切断温度コンパウンドに埋め込み、凍結ミクロトームを利用して、厚さ5〜7μmの凍結組織スライスを取得します28。</li>
	<li>すべてのスライドを試料ボックスに室温で約30分間保存します。その後、-80°Cの超低温冷凍庫に移します。</li>
</ol>
4. ヘマトキシリンとエオシン(H&E)染色
<ol>
	<li>凍結したティッシュスライスを超低温冷凍庫から取り出し、ティッシュボックスに平置きし、ドラフトで乾燥させます。</li>
	<li>スライスを1x PBSで洗い、5分間覆ってからPBSを取り除きます。試料を4%パラホルムアルデヒドで覆い、蒸発を防ぐために蓋が閉じていることを確認します。室温で15分後、1x PBSで試料を3 x 5分間すすぎます。</li>
	<li>試料をラックに入れ、0.5%ヘマトキシリン色素に5分間浸します。</li>
	<li>試料を水道水で5分間すすぎ、余分な染料を洗い流します。その後、0.1%塩酸アルコールに1〜2秒間浸漬して、分化を促進します。</li>
	<li>試料ホルダーを水道水に15分間入れて、非特異的な染色を取り除きます。</li>
	<li>余分な水分を排出し、試料を0.05%エオシン染色溶液に3分間浸します。</li>
	<li>試料を水道水で洗浄し、100%アルコールを75%、80%、95%、および2回ずつ2回、それぞれ2分間浸します。</li>
	<li>試料ホルダーを2ラウンドのキシレンにそれぞれ2分間浸します。</li>
	<li>ホルダーをドラフトに入れて乾燥させ、試料を封入剤で埋込し、損傷や気泡を防ぎます。</li>
	<li>染色した標本を室温の箱に保管し、バイオ顕微鏡写真システムを使用して写真を撮ります。</li>
</ol>
5. 免疫蛍光染色
<ol>
	<li>冷凍庫から試料を取り出し、箱に平らに置き、フードで乾燥させます。</li>
	<li>試料を1x PBSで洗浄し、5分間蓋をして、余分な液体を吸引します。標本を4%パラホルムアルデヒドで覆い、免疫組織化学ウェットボックスに水を加え、蓋を閉めて蒸発を防ぎます。室温で15分間放置します。次に、試料を1x PBS. で3 x 5分間すすぎます。
	注:このプロセス中は、試料の取り扱いに注意してください。</li>
	<li>標本表面から余分なPBSを取り除き、組織切片の周囲に残った液体を濾紙で優しく拭きます。試料表面を細胞透過化溶液(0.2% Triton X-100)で覆い、室温で20分間インキュベートしてメンブレンを透過化します。</li>
	<li>透過処理溶液を取り出し、1x PBSで試料を3 x 5分間すすぎます。</li>
	<li>試料表面からPBSを流し出し、組織切片周辺の残留液を濾紙でやさしく拭き取ります。試料を予温したブロッキング溶液(2%BSA)で覆います。蒸発を防ぐために蓋を閉め、室温で1時間インキュベートします。</li>
	<li>ブロッキングプロセスでは、実験ニーズに応じて適切な抗体を選択し、推奨比率に従って免疫蛍光抗体希釈液(1% BSA)で一次抗体を調製し、調製した一次抗体を4°C遠心分離機で2,000 × g、10分で遠心分離します 
	注:上記はすべて氷上または低温で操作されます。サンプルあたり約120 μLの一次抗体を使用することをお勧めします。</li>
	<li>一次抗体を廃棄または廃棄してください。試料を1x PBSバッファーで3×10分間洗浄します。PBSを注ぎ落とした後、試料を新しい1x PBSですすいでください。最初のすすぎでは、PBSがスライドを覆っていることを確認してください。</li>
	<li>一次抗体をすすぎている間に、そのカテゴリーに基づいて適切な二次抗体を選択します。1% BSA希釈剤で1:300の比率で希釈します。調製した抗体を4°C、2,000 × gの遠心分離機で10分間遠心します。すべてのプロセスを氷上または暗闇の低温で実行します。</li>
	<li>スライドをPBSですすぎ、検体周囲の液体を濾紙で優しく拭き取り、吸引ポンプで残った液体を吸収し、調製した二次抗体を速やかに試料に添加します。それを覆い、室温で1時間インキュベートします。すべてのプロセスが暗闇の中で行われるようにします。</li>
	<li>二次抗体を廃棄し、1x PBSバッファーですすぎ、10分×3回洗浄します。試料を洗い流さないように、試料を優しく取り扱ってください。</li>
	<li>1x PBSを注ぎ、濾紙で余分な液体を拭き取り、吸引ポンプで残った液体を取り除き、DAPIを含む封入剤で試料をマウントします。カバーをスライドプレートに置き、スズ箔で光から保護された4°Cの冷凍庫に保管します。試料を傷つけたり、気泡を発生させたりしないように注意してください。</li>
	<li>レーザー共焦点または正立蛍光顕微鏡システムを使用して、染色したサンプルを撮影します。蛍光消光を防ぐために、イメージングが1週間以内に行われることを確認してください。</li>
</ol>
6. 角膜mRNAの抽出
<ol>
	<li>CO2による窒息後のマウスで急速な頸部脱臼を行います。次に、はさみと鉗子を使用して眼球を慎重に抽出し、1x PBSで3回洗浄し、1x PBSを含むシャーレに眼球を置きます。</li>
	<li>顕微鏡下で、はさみと鉗子を使用して眼球の後極から眼球を切断し、レンズを分離します。余分な強膜と虹彩をきれいにしますが、0.5mmの白い強膜と角膜全体は残します。指示に従って、RNA抽出キットを使用してマウスの眼球からmRNAを抽出します。</li>
</ol>
7. 逆転写PCR
<ol>
	<li>逆転写を行う前に、UV分光光度計でRNAの濃度を測定してください。</li>
	<li>測定したRNA濃度に基づいて1mgのRNAを服用します。逆転写キットを用いて逆転写反応を行います。</li>
	<li>反応成分を添加した後、混合物を200μLの遠心分離管に加え、穏やかに振とうして混合し、気泡を避けるために低速で遠心分離し、すぐに通常のサーマルサイクラーに入れて反応させます。</li>
	<li>逆転写プロセスで得られたcDNAをリアルタイムPCRで直接解析するか、-20°Cの冷凍庫で保存します。</li>
</ol>
8. リアルタイム定量PCR反応(qRT-PCR)
<ol>
	<li>リアルタイムPCRキット29に付属の指示に従って、10 μLの反応システムをセットアップします:3.6 μLのDEPC処理水、センスプライマー0.2 μM、アンチセンスプライマー0.2 μM、1 μLのcDNA、5 μLのMix。プライマーの詳細については、表1を参照してください。</li>
	<li>実験のグループ化に応じて、qRT-PCR専用の96ウェルプレートまたは8ストリップチューブに反応システムを追加します。qRT-PCRシステムを設定したら、混合物が十分に混合されていることを確認し、卓上遠心分離機を使用して短時間の遠心分離を行い、チューブ壁から液体を振り落とします。qRT-PCRの前に、必ずチューブに気泡がないか確認してください。</li>
	<li>反応をトリプリケートで行い、平均Ct(サイクル閾値)を計算します。</li>
</ol>

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著者には開示すべき利益相反はありません。

ELGとILGの両方を外科的に切除し、房水欠乏性ドライアイ疾患のマウスモデルの確立に成功し、房水欠乏性ドライアイ疾患の条件下での眼表面の変化を調べることを目指しました。ELGとILGの二重切除に起因するドライアイのこのマウスモデルで観察された形態学的および生理学的変化を注意深く文書化しました。モデリングの2週間後、確立されたドライアイのマウスモデルを観察し、サンプリングしました。 
温度、風流速度、相対湿度、季節性、汚染物質などの要因が涙液層の蒸発速度に影響を与え、ドライアイの症状を悪化または緩和する可能性があることを考慮して、治療前後のマウスの環境を細心の注意を払って維持しました。マウスのリズミカルな12:12時間の明暗サイクルを確保し、食物と水への自由なアクセスを提供し、研究における潜在的な交絡因子を最小限に抑えました。手術前に、手術中ずっとマウスが動かないように適切な麻酔が投与され、それによってストレスと生理学的影響が軽減されました。さらに、感染を防ぐために手術器具を清潔で無菌の状態に保ちました。処置中、マウスのELGとILGの解剖学的位置に特に注意が払われました。周囲の血管...

ドライアイは、世界中で最も一般的な眼表面疾患となり、人口の5%から50%がこの病気に苦しんでいると推定されています1.ドライアイによる目の乾燥や不快感は、持続すると、視覚障害や不安定な涙液膜を引き起こし、さらに眼球表面の損傷につながる可能性があります2.ドライアイの患者の中には、慢性的な痛みに苦しむ人もいます2。
2017年のTFOS DEWS II Dry Eye Consensusによると、ドライアイは複数の要因が関与する複雑な状態であり、涙液膜の自然なバランスの乱れを特徴としています。この状態には、さまざまな眼の症状、涙液膜の不安定性、涙液の浸透圧の増加、炎症と眼表面の損傷、神経因性疼痛が伴います。これらは、病気の進行を理解する上で重要です3。このフィードバックループでは、ドライアイは角膜上皮細胞に損傷を与え、角膜間質の厚さと内皮細胞密度を減少させ、角膜表面での免疫細胞の活性化と凝集を引き起こし、杯細胞によるムチン分泌を減らし、涙腺の免疫機能障害を引き起こし、状態をさらに悪化させる可能性があります4,5,6,7、8,9,10.コンセンサスは、ドライアイ症候群の3つの主要な形態を描写しています:水性欠乏症ドライアイ、蒸発性ドライアイ、および混合ドライアイ3として知られる両方の組み合わせ。水性ドライアイは、涙腺の構造的および機能的変化に関連しています11。これらの変化には、腺房萎縮、涙液の流れを妨げる乳管閉塞、免疫応答を示すリンパ球浸潤、および涙液膜の健康と安定性を維持するために不可欠なタンパク質の分泌の減少が含まれます12,13。
涙腺は、涙液膜内の水成分の生成に関与する管状の外分泌腺です13,14、水、電解質、タンパク質を含み、眼表面微小環境の安定性の維持に貢献します15,16.目の健康と視覚的な明瞭さは、角膜の表面に重要な光学層を形成する涙液膜の存在に依存し、角膜と結膜のスムーズな潤滑を保証します17。涙液膜は、眼表面細胞の代謝活性を促進し、クリーナーとして機能し、目の表面から不純物や潜在的な刺激物を効果的に除去し、それによってeye18、19の生理学的バランスと快適さを維持します。
ラットやマウスなどのげっ歯類では、涙腺は内部と外部の眼窩葉の2つの葉で構成されています。外眼窩葉は耳の下にあり、その機能部分は延長された管によって眼に接続されています。この管は、眼に到達する前に眼窩の涙腺葉と噛み合い、涙液の生成に関与しています20。眼窩内涙腺としても知られる内眼窩葉は、外眼窩の球結膜の下にあります。ILG は ELG よりも小さいです。涙腺の機能障害は、水性欠乏症のドライアイにつながる可能性があり、治療せずに放置すると、角膜潰瘍や視力喪失に進行する可能性があります21。
水性ドライアイの動物モデルは、外科的導入モデル、薬物誘発モデル、トランスジェニックモデルの3つの介入方法に分類できます。外科的導入モデルには、ELGの除去が含まれます。しかし、このモデルはILG22の存在により安定していません。コリン作動性受容体遮断薬スコポラミンの全身注射は、薬物誘発性model23で一般的です。アトロピン24および塩化ベンザルコニウム25の局所適用も、ムチンと涙液の分泌を減らすことができます。Concanavalin-Aは、ウサギの涙腺に局所的に注射して免疫性涙腺炎を引き起こすことができ、それにより水性欠乏症のモデルを確立します ドライアイ26。さらに、NOD、Aly/aly、NFS/sld、IQI/Jic、Id3 KO、およびその他のマウス系統などのトランスジェニック動物は、原発性シェーグレン症候群27の症状と表現型を模倣して、水性ドライアイを再現することができます。
この研究では、マウスのELGとILGを痛みを伴わずに正確に除去する外科的処置を中核的な実験デザインに含んでいました。これらの涙腺は、目の水分と潤滑を維持するために不可欠です。それらの除去は、マウスの水性欠乏症ドライアイを模倣して、涙液分泌の大幅な減少をもたらします。このアプローチにより、マウスの行動、生理学的反応、およびドライアイ状態の眼組織の変化の観察と分析が可能になり、病理学研究とドライアイ疾患の治療オプションの評価のための重要な実験的基礎が提供されます。

<table><tbody><tr><td>10 mLシリンジ</td><td>浙江KDL医療機器有限公司 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5-0縫合針</td><td>蘇州66ビジョン株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>無水エタノール</td>上海<td>シノファーム化学試薬有限公司、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>アレクサフルオット488、ロバ抗マウスIgG</td>イン<td>ビトゲン</td><td></td>811493<td></td></tr><tr><td>アレクサフルオット594、ロバ抗ウサギIgG</td><td>Invitrogen</td><td>A21207</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Keratin 12 antibody EPR17882</td><td>Abcam</td><td>ab185627</td><td></td></tr><tr><td>Anti-PAX6 antibody</td><td>Abcam</td><td>ab5790</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Hirayama.日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 マウス</td><td>上海スラック実験動物有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr>エッペンドルフ<td>の室温で遠心分離します</td><td>。ドイツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td>上海バイオエンジニアリング株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>電子バランス</td><td>上海Auhaus Biotech Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蛍光逆位相コントラスト顕微鏡撮影システム</td><td>TE-2000U,ニコン.日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>カセット</td><td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スライス刃を凍結</td><td>Xiamen Taijing Biotechnology Co., Ltd. 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>H-1200 with DAPI 封入剤</td><td>Xiamen Juin Biotechnology Co., Ltd. 中国</td><td>DAPI</td>H-5000 錠剤封入剤ベクターを含む封<td></td>入剤</tr><tr><td></td><td>。米国</td><td></td><td>封入用媒体</td></tr><tr><td>HCl</td><td>上海Sinopharm化学試薬有限公司、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘマトキシリン-エオシン染色キット</td><td>Auragene。米国</td><td></td><td></td></tr>ヨ<tr><td>ウ素</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ki-67抗体</td><td>Abcam</td><td>ab16667</td><td></td></tr><tr><td>液体窒素</td><td>厦門Yidongガス株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡針ホルダー</td><td>蘇州66ビジョン株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡歯付き鉗子</td><td>蘇州66ビジョン株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡歯のない鉗子</td><td>蘇州66ビジョン株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>モデル3050冷凍スライカ</td><td>、ディアフィールド、イリノイ州 米国OCT</td><td></td><td></td></tr>上海<tr><td></td><td>Maokangバイオテクノロジー株式会社 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>オフロキサシン軟膏</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼科フルオレセインナトリウムテストストリップ</td><td>天津景明新技術開発有限公司 中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド粉末</td><td>シグマ。米国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>フェノールレッドコットンスレッド</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>急速滅菌器滅菌器</td><td>蘇州66ビジョン株式会社中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>組換えヒトSPRR1bタンパク質&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab167925</td><td></td></tr>冷蔵<tr><td>卓上遠心分離機</td><td>エッペンドルフ。ドイツ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スライドホルダー</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>スリットランプト</td><td>プコン。日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>標本ボックス</td><td>ランボリド(福州)バイオテクノロジー株式会社中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>テルアミルアルコール</td><td>上海。マックリン生化学、中国</td><td>A800283</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>トリブロモエタノール</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma.米国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>超低温冷凍庫</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック社。米国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>直立蛍光顕微鏡写真</td><td>ライカDM2500。米国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>直立した通常のバイオマイクログラフィーシステム</td><td>Eclipse 50i、ニコン。日本</td><td></td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>上海シノファーム化学試薬有限公司、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ツァイス手術用顕微鏡</td><td>VISU150、カールツァイス。ドイツ</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

水性欠乏性ドライアイのマウスモデルの構築

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

ドライアイ疾患は、世界人口の5%〜50%が罹患している一般的な状態です。動物モデル研究は、その根底にあるメカニズムを理解する上で重要な役割を果たします。そこで、眼窩外涙腺(ELG)と眼窩内涙腺(ILG)の両方を外科的に切除し、ドライアイ疾患のマウスモデルを開発し、水性欠乏性ドライアイの文脈で眼表面の病理を調査しました。術後2週間で、マウスは涙液分泌の減少、角膜上皮の不規則性、陽性のフルオレセインナトリウム染色、血管新生などの重度のドライアイ症状を示しました。ヘマトキシリンとエオシン染色による組織学的検査により、炎症性細胞浸潤と角膜上皮異形成が明らかになりました。免疫蛍光染色および定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応により、正常な角膜上皮バイオマーカーK12およびPax6の発現減少と、角膜上皮におけるSprr1bの発現増加が明らかになりました。これらの眼の症状は、異常な角膜上皮分化を示しました。さらに、Ki67の免疫蛍光染色により、細胞増殖の増加が明らかになりました。結論として、ELG と ILG の切除モデルは、眼表面の変化を研究し、水性ドライアイの根底にあるメカニズムを解明するのに適していることが証明されました。

眼表における水欠乏性ドライアイの影響とその基礎的なメカニズムを調べるため、ELGおよびILGを外科的に除去することで、水欠乏性ドライアイのマウスモデルを構築した（図1A）。涙腺切除から2週間後、ドライアイ群（涙腺除去後）のマウスでは、正常群と比較して涙分泌が著しく減少した（図1B,C）。スリットランプ顕微鏡による角膜の評価では著しい乾燥が認められ、フルオレセインナトリウム染色では角膜全体にびまん性の点状染色の出現が確認され、角膜上皮欠損が示された。さらに、角膜の上皮層および実質層の両方において新生血管が観察され、角膜中央部に向かってびまん性に広がっていた（図1D）。
H&amp;E染色による組織学的解析の結果、角膜上皮に扁平上皮化生が認められ、あわせて角膜実質層において濃い青紫色の細胞核を持つ小型で円形の炎症細胞の集積が確認された（<strong class="xfig"...

ここでは、眼窩外および眼窩下涙腺を切除して水性欠損ドライアイのマウスモデルを確立し、水性欠損ドライアイの眼表面の変化を評価する方法を紹介します。

Dry eye disease is a prevalent condition affecting 5%-50% of the global population. Animal model investigations play a crucial role in understanding its ...

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Medicine

医学

このビデオは、ラットに慢性的な実験的自己免疫性ドライアイ疾患を誘発する技術を示しています。自己抗原および外来抗原を含む抗原アジュバントエマルジョンを所定の間隔でラットに注射すると、同じ抗原を眼表面組織に注入することにより、免疫ラットに慢性眼の炎症が誘発されます。...

ラットに慢性実験的自己免疫性ドライアイを誘発する技術

麻酔を使用せずに、ラットの尾の付け根にエマルジョンを皮下注射します。次に、14日目に同様の方法で、同じ抗原と不完全なフロイントアジュバントを200マイクロリットル注入します。同じ日に、100マイクロリットルのPBSに300ナノグラムの百日咳毒素を腹腔内に注射します。...

このビデオは、自己免疫ラットモデルにおける角膜の滑らかさと涙液膜の安定性を評価する方法を示しています。これは、ドライアイ疾患を理解するために重要な、腺機能障害が涙液膜の安定性に与える影響を強調しています。...

自己免疫性ドライアイラットモデルにおける角膜と涙液の滑らかさの評価

この報告では、ラット涙腺抽出物、オボアルブミン、完全フロインドアジュバントのエマルジョンで免疫化した後、涙腺下涙腺および涙腺に涙腺抽出物およびオボアルブミンを注入することにより、Lewisラットにおいて慢性的な実験的自己免疫ドライアイを誘導する方法が記載されている6週間後。...

眼球組織におけるエフェクター記憶T細胞の増加を伴う慢性自己免疫ドライアイラットモデル

この記事では、眼窩涙腺系のすべての部分にコンカナリンAを注入することによって、ウサギの急性または慢性ドライアイ病を誘発する方法の開発について説明します。この方法は、既に報告されているものよりも優れ、薬理剤の研究に適したドライアイの再現性、安定モデルを生成する。...

コンカナバリンによる涙腺への注射によって誘発される水性欠損性ドライアイ病のウサギモデル:薬物有効性研究への応用

すべての眼窩涙腺を外科的に除去することによってウサギの慢性ドライアイ病を誘発する新しいアプローチが提示される。この方法は、以前に報告されたものとは異なり、涙液生理学および病態生理学および眼科治療の研究に適した水性欠乏ドライアイの安定した、再現可能なモデルを生成する。...

ウサギにおける完全なダクリオアデネクトー切除術を用いた重症ドライアイモデルの確立

ここでは、涙腺機能障害のラットモデルを確立し、水欠損ドライアイの研究の基礎を提供します。...

スコポラミンによる涙腺機能障害を有するラットドライアイモデル

角膜は、血管組織を欠いている点でユニークです。しかし、堅牢な血管の成長と生存が強力な血管新生因子によって角膜に誘導することができる。そのため、角膜は私達と血管新生の研究のための貴重なツールを提供することができます。このプロトコルは、角膜のポケットアッセイのマウスモデルを実行する方法と、このモデルを用いて血管新生因子によって誘導される血管新生を評価する方法を示しています。...

血管新生研究のための角膜ポケットアッセイのマウスモデル

細菌の病因を理解し、新しい治療法の開発を生み出すためには、尿路感染症(UTI)をモデル化する能力が重要です。この研究の目標は、ヒトで見られる所見を再現および予測する実験的UTIおよびカテーテル関連UTIのマウスモデルを実証することです。...

マウスモデルにおけるUTIとCAUTIの樹立とその性状

学ぶ水性欠乏性ドライアイのマウスモデル構築法。眼窩外涙腺と眼窩下涙腺を摘出し、シェーグレン症候群などの重症ドライアイに類似した病理状態を再現します。手術の簡略化と動物への負担低減を実現し、新たな治療法開発の基盤となります。

水性欠乏性ドライアイのマウスモデルの構築

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