Name: Calvarial Bone Marrowにおける血管動態の生体内縦断的イメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 学ぶ頭蓋骨髄の血管動態の生体内縦断イメージング法。二光子顕微鏡とトランスジェニックマウスモデルを用いて、正常および病的造血における血管応答を可視化し、がん生物学と再生医療への応用を示す。

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<ol><li>Lo Celso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+tracking+of+individual+haematopoietic+stem%2Fprogenitor+cells+in+their+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal tracking of individual haematopoietic stem/progenitor cells in their niche.</a> Nature. 457 (7225), 92-96 (2009).</li>
<li>Pittet, M. J., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging.</a> Cell. 147 (5), 983-991 (2011).</li>
<li>Itkin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+bone+marrow+blood+vessels+differentially+regulate+haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Distinct bone marrow blood vessels differentially regulate haematopoiesis.</a> Nature. 532 (7599), 323-328 (2016).</li>
<li>Christodoulou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-animal+imaging+of+native+haematopoietic+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Live-animal imaging of native haematopoietic stem and progenitor cells.</a> Nature. 578 (7794), 278-283 (2020).</li>
<li>Upadhaya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+reveals+motility+of+adult+hematopoietic+stem+cells+in+the+bone+marrow+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging reveals motility of adult hematopoietic stem cells in the bone marrow niche.</a> Cell Stem Cell. 27 (2), 336-345.e4 (2020).</li>
<li>Hawkins, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T-cell+acute+leukaemia+exhibits+dynamic+interactions+with+bone+marrow+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">T-cell acute leukaemia exhibits dynamic interactions with bone marrow microenvironments.</a> Nature. 538 (7626), 518-522 (2016).</li>
<li>Duarte, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+in+vivo+characteristics+of+acute+myeloid+leukemia+cells+behavior+by+intravital+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Defining the in vivo characteristics of acute myeloid leukemia cells behavior by intravital imaging.</a> Immunol Cell Biol. 97 (2), 229-235 (2019).</li>
<li>Passaro, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+permeability+in+the+bone+marrow+microenvironment+contributes+to+disease+progression+and+drug+response+in+acute+myeloid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Increased vascular permeability in the bone marrow microenvironment contributes to disease progression and drug response in acute myeloid leukemia.</a> Cancer Cell. 32 (3), 324-341.e6 (2017).</li>
<li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FLT3+inhibitors+upregulate+CXCR4+and+E-selectin+ligands+via+ERK+suppression+in+AML+cells+and+CXCR4%2FE-selectin+inhibition+enhances+anti-leukemia+efficacy+of+FLT3-targeted+therapy+in+AML%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">FLT3 inhibitors upregulate CXCR4 and E-selectin ligands via ERK suppression in AML cells and CXCR4/E-selectin inhibition enhances anti-leukemia efficacy of FLT3-targeted therapy in AML.</a> Leukemia. 37 (6), 1379-1383 (2023).</li>
<li>Pendleton, E. G., Tehrani, K. F., Barrow, R. P., Mortensen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+harmonic+generation+characterization+of+collagen+in+whole+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Second harmonic generation characterization of collagen in whole bone.</a> Biomed Opt Express. 11 (8), 4379-4396 (2020).</li>
<li>Dispositif de liaison d'un animal de laboratoire à au moins un système d'expérimentation, et procédé de fixation d'un tel dispositif. France patent. , WO/2021/123449 (2021).</li>
<li>Horton, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+myeloid+leukemia+induced+by+MLL-ENL+is+cured+by+oncogene+ablation+despite+acquisition+of+complex+genetic+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Acute myeloid leukemia induced by MLL-ENL is cured by oncogene ablation despite acquisition of complex genetic abnormalities.</a> Blood. 113 (20), 4922-4929 (2009).</li>
<li>Scott, M. K., Akinduro, O., Lo Celso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+4-dimensional+tracking+of+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+in+adult+mouse+calvarial+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo 4-dimensional tracking of hematopoietic stem and progenitor cells in adult mouse calvarial bone marrow.</a> J Vis Exp. (91), e51683(2014).</li>
<li>Jung, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+imaging+of+mouse+bone+marrow%3A+Hemodynamics+and+vascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital imaging of mouse bone marrow: Hemodynamics and vascular permeability.</a> Methods Mol Biol. 1763, 11-22 (2018).</li>
<li>Le, V. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+longitudinal+visualization+of+bone+marrow+engraftment+process+in+mouse+calvaria+using+two-photon+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo longitudinal visualization of bone marrow engraftment process in mouse calvaria using two-photon microscopy.</a> Sci Rep. 7, 44097(2017).</li>
<li>Spencer, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+measurement+of+local+oxygen+concentration+in+the+bone+marrow+of+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Direct measurement of local oxygen concentration in the bone marrow of live animals.</a> Nature. 508 (7495), 269-273 (2014).</li>
<li>Yang, M., Mahanty, A., Jin, C., Wong, A. N. N., Yoo, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+metabolic+imaging+for+sensitive+and+robust+monitoring+of+anti-CD47+immunotherapy+response+in+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Label-free metabolic imaging for sensitive and robust monitoring of anti-CD47 immunotherapy response in triple-negative breast cancer.</a> J Immunother Cancer. 10 (9), e005199(2022).</li>
<li>Li, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+strain-specific+morphogenesis+and+angiogenesis+of+murine+calvaria+with+large-scale+optoacoustic+and+Ultrasound+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Tracking strain-specific morphogenesis and angiogenesis of murine calvaria with large-scale optoacoustic and Ultrasound Microscopy.</a> J Bone Miner Res. 37 (5), 1032-1043 (2022).</li>
<li>Lassailly, F., Foster, K., Lopez-Onieva, L., Currie, E., Bonnet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+imaging+reveals+structural+and+functional+heterogeneity+in+different+bone+marrow+compartments%3A+functional+implications+on+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Multimodal imaging reveals structural and functional heterogeneity in different bone marrow compartments: functional implications on hematopoietic stem cells.</a> Blood. 122 (10), 1730-1740 (2013).</li>
<li>Rindone, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+3D+imaging+of+the+cranial+microvascular+environment+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Quantitative 3D imaging of the cranial microvascular environment at single-cell resolution.</a> Nat Commun. 12 (1), 6219(2021).</li>
<li>Mills, W. A. 3rd, Coburn, M. A., Eyo, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emergence+of+the+calvarial+hematopoietic+niche+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">The emergence of the calvarial hematopoietic niche in health and disease.</a> Immunol Rev. 311 (1), 26-38 (2022).</li>
<li>Bixel, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+is+uncoupled+from+osteogenesis+during+calvarial+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis is uncoupled from osteogenesis during calvarial bone regeneration.</a> Nat Commun. 15 (1), 4575(2024).</li>
<li>Koh, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+skull+bone+marrow+is+an+expanding+and+resilient+haematopoietic+reservoir%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adult skull bone marrow is an expanding and resilient haematopoietic reservoir.</a> Nature. 636 (8041), 172-181 (2024).</li>
<li>Kolabas, Z. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+molecular+profiles+of+skull+bone+marrow+in+health+and+neurological+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct molecular profiles of skull bone marrow in health and neurological disorders.</a> Cell. 186 (17), 3706-3725.e9 (2023).</li>
<li>Rosenhain, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+preclinical+micro-computed+tomography+database+including+3D+whole+body+organ+segmentations%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">A preclinical micro-computed tomography database including 3D whole body organ segmentations.</a> Sci Data. 5, 180294(2018).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>アミラ</td><td>サーモサイエンティフィックTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>麻酔</td><td></td><td></td><td>イソフルラン2%〜3%</td></tr><tr><td>麻酔マスク(動物検出)</td><td>ミネルブ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>麻酔ユニット</td><td>ミネルブ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm9(CAG-tdトマト)Hze</td><td>ジャクソン研究所</td><td>MGI:3809523</td><td></td></tr><tr><td>カルバリアビュー</td><td>イメトリー</td><td>https://ymetry.com/site/head-fixation-implants/44-mouse-head-fixation-implant-for-calvaria.html</td><td></td></tr><tr><td>歯科用セメント</td><td>ケムデント</td><td>サン527</td><td></td></tr><tr><td>デキストラン 500 kDa-Cy5&nbsp;</td><td>テブバイオ</td><td>DX500-S5-1</td><td>3 mg/マウス</td></tr><tr><td>デキストラン 70 kDa-TRITC</td><td>シグマ</td><td>T1162</td><td>3 mg/マウス</td></tr><tr><td>消毒剤</td><td>MP-ラボ</td><td>デルミジン-60ml</td><td></td></tr><tr><td>電気カミソリ</td><td>エスキュラー</td><td>イシス</td><td></td></tr><tr><td>アイジェル</td><td>オクリゲル</td><td>10グラム</td><td></td></tr><tr><td>フィジー&nbsp;</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>v 17 5月 30</td><td></td></tr><tr><td>フィジーがイマリスと橋渡しをする</td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads</td><td>Imaris_Bridge96.jar ;ImarisBridgeUtils.jar</td><td></td></tr><tr><td>加熱ボックス&nbsp;</td><td>Datesと</td><td>サーマカージュ</td><td></td></tr><tr><td>手術用加熱パッド</td><td>ミネルブ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イメージング加熱パッド&直腸プローブ</td><td>F.ハール</td><td></td><td></td></tr><tr><td>イマリス v9.6.0</td><td>オックスフォードの楽器</td><td></td><td></td></tr><tr><td>サイト内ゲル</td><td>チノクシア</td><td>2390766</td><td></td></tr><tr><td>LAS AFソフトウェア</td><td>ライカ</td><td>ラス X 3.5.7.23225</td><td></td></tr><tr><td>薬</td><td></td><td></td><td>ブプレケア、0.01 mg/kg</td></tr><tr><td>対物レンズ HCX IRAPO L 25x/0.95 WATER</td><td>ライカ</td><td>506374</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水バッファー(PBS 1x)</td><td>シグマ</td><td>P4417</td><td>オートクレーブによる滅菌</td></tr><tr><td>SP8 DIVE FALCON 多光子顕微鏡&nbsp;</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>立体毒性マスク</td><td>ミネルブ</td><td>1201261</td><td></td></tr><tr><td>滅菌ビーズ</td><td>シグマ</td><td>Z742555</td><td></td></tr><tr><td>手術器具</td><td>モリア</td><td>4877A;2183</td><td></td></tr><tr><td>サバイバルブランケット</td><td>安全</td><td>11006</td><td></td></tr><tr><td>綿棒/ティッシュ</td><td></td><td></td><td>オートクレーブによる滅菌</td></tr><tr><td>シリンジ 1 mL 26 g</td><td>BDプラスティパック</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>温度調節器</td><td>F.ハール</td><td>40-90-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Nes-EGFP)33Enikマウス&nbsp;</td><td>ジャクソン研究所</td><td>MGI:5523870</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Pdgfb-icre/ERT2)1Frut マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>MGI:3793852</td><td></td></tr><tr><td>Tg(Cdh5-cre/ERT2)1Rhaマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>MGI:3848982</td><td></td></tr><tr><td>超音波ゲル&nbsp;</td><td>パーカー研究所</td><td>アクアソニック100</td><td></td></tr></tbody></table>

calvarial bone marrowにおける血管動態の生体内縦断的イメージング

Intravital Longitudinal Imaging of Vascular Dynamics in the Calvarial Bone Marrow

図1と図2では、スキャンしたマウスの頭蓋骨にチタン製の頭部固定インプラントを配置したCADモデルが示されており、これは頭蓋骨の解剖学的構造に追従し、顕微鏡ステージにしっかりと保持できる軽量で生体適合性のあるデバイスを提供し、細胞レベルの安定性を確保しています。この段階的なプロトコルに従うことにより、インプラントはマウスの頭蓋骨に安定して取り付けられ、そのダブテールによって顕微鏡ホルダーにしっかりと固定できるため、液体の保持と経時的な生体内観察のためのフラットなイメージング領域が可能になります。カバーで閉じることで、傷口の損傷や感染を最小限に抑えることができ、同じ組織領域を数週間にわたって繰り返しイメージングすることができます。一度目を覚ますと、頭部インプラントを装着したマウスは自由に歩き回り、餌をやったり、定期的なルーチンを持つことができます。
図3は、細動脈、遷移毛細血管、正弦波などの不均一な毛細血管で作られた頭蓋骨BM血管系のタイルスキャンビューを示しています。血管は、骨表面および血管周囲間葉系細胞と密接に接触した複雑な組織微小環境に埋め込まれます。白血病の発症時には、BM微小環境内で血管に近接した単一の単離白血病細胞が検出され、その生着が時間とともに増加し、疾患の後期に頭蓋骨が満たされます。
図4は、このプロトコルで取得した画像が定量的データを提供し、統計的手法で分析できる方法を示しています。IMARISフィラメントツールを使用して血管をセグメント化し、血管断片の長さと直径、およびそれらの真直度を測定する方法を示します。これらのパラメータの相関も評価できます。
図5は、4日目、7日目、10日目のAML進行中の頭蓋骨BMの2つの異なる位置の縦断的イメージング取得を示しており、10日目は、フローサイトメトリー(図示せず)を介して測定されたBMの白血病細胞への~50%の生着と関連しています。既存の血管のサイズの重要なリモデリングと、局所的な骨量減少に関連する特定の領域での新しい血管の形成を観察できます。
最後に、 図6では、さまざまな血管バリアが蛍光色素を長期にわたって保持する能力を示すタイムラプスイメージングを使用して、血管透過性を動的パラメータとして測定する方法を示します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig01.jpg"> 
図1:チタンベースの生体適合性ヘッドホルダーの設計と製造。 (A)インプラントのその 場の部品:観察リング1個、セメンチング機能2個、安定化アンカー3個、テール4個、ダブテール5個、ネジ穴6個、ブレグマ7個。(B)ヘッドインプラントのホルダーへの接続:8固定本体、9クランプ、10偏心レバー、11構造、12顕微鏡対物レンズ。(C)最大変位が0.04Nの力に対して0.23μmのFEMシミュレーションによる荷重に対するインプラントの変形。(D)保護カバーとそのネジ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig02.jpg"> 
図2:生体内イメージングのためのマウスの準備(A)頭部インプラントとイメージング前に外科的に露出したイメージング領域の図。(B)マウスの頭蓋骨にしっかりと取り付けられた頭部インプラント。(C)ヘッドインプラントの閉じたカバーで回復ケージ内でマウスを目覚めさせています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig03.jpg"> 
図3:心房細血管系の生体内イメージング (A)cdh5-DSREDで標識された心房細血管のタイルスキャンビューのz投影。(B)描かれた領域を拡大して、矢印で描かれたさまざまな種類の血管、赤い矢印で細動脈、オレンジ色の矢印で移行毛細血管、黄色の矢印で正弦波を説明します。(i)および(ii)Xμm組織のz投影。(iii)シングルスライス。(C)骨表面(SHG)、血管周囲細胞(nes-GFP+)、血管内腔(デキストラン-TRITC)を示す、BM血管のいくつかの視野の単一のスライス。(D)AMLの進行に関連する血管ニッチ。AML開発の初期(上)と後期(下)の時点の代表的なスライス。MLL-AF9白血病はtdTOMATOで標識(赤矢印)、血管はpdgfb-GFP(緑の矢印)、骨表面はSHG、マクロファージは黄色(自家蛍光、黄色のアスタリスク)で標識されています。スケールバー = 200 μm (A)、40 μm (B、D-下部パネル)、50 μm (C)。略語:BM =骨髄;GFP = 緑色蛍光タンパク質;AML = 急性骨髄性白血病;EC=内皮細胞。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig04.jpg"> 
図4:血管パラメータの定量化 (A)TRITC-デキストランで標識された骨髄血管の代表的なz投影におけるIMARIS フィラメントツール による血管パラメータの測定。線と円錐の表現が表示されます。(B) Aに示す画像内の血管パラメータの定量化。(C)血管の真直度と長さとの間に反対の相関を示す血管パラメータ間の相関(負、Spearman r = -3523; p &lt; 0.0001;R2 = 0.2102) 対 直径 (正;スピアマンr = 0.4110;p &lt; 0.0001;R2 = 0.1299)。スケールバー = 100 μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig05.jpg"> 
図5:AML発生上のcalvaria BMの2つの異なる位置の縦断的イメージング。 血管の内側を覆う内皮細胞は cdh5-GFP、骨表面はSHG、マクロファージは黄色(自家蛍光)で標識されています。既存の船の改造(赤い矢印)と新しい船の編成(黄色の矢印)を示しています。スケールバー = 100 μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67332/67332fig06.jpg"> 
図6:血管透過性 (A) IMARIS 表面ツール による血管透過性測定の概略図 (B) 1時間にわたって縦方向に画像化された同じ領域のZ投影 (C) Aに示されている領域内の血管透過性の定量化。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/67332fig06large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S1:準備された頭蓋骨。 中央平面で、頭蓋骨に接する軸を作成し、準備した頭蓋骨を保存します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_1_JoVE67332R1_screenfile5_prepared_skull.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S2:平面図2mm間隔。 頭蓋骨を横切る等間隔の平面(2 mm間隔)のセットを作成する方法。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_2_JoVE67332R1_screenfile4_plans_2mm_spaced.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S3:観測可能な表面の輪郭。 カルバリア平面にスケッチを作成し、AP 0.0 で AP +6.5 から -2、幅 6 mm の洋ナシ形のスプラインを作成します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_3_JoVE67332R1_screenfile3_Observable_Surface_Contour.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S4:観察ヴィンドウ。 カルバリア平面にスケッチを作成し、 観測 ウィンドウに接続する厚さ0.5mmのC字型を描きます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_4_JoVE67332R1_screenfile1_1.4.1.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S5:[新しいスタディ]をクリックします。 [シミュレーション]タブに移動するか(表示されている場合)、または[シミュレーション]|勉強。[スタディ]ダイアログ ボックスで、スタディ タイプとして[静解析]を選択します。[OK]をクリックして、新しいスタディを作成します。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_5_JoVE67332R1_screenfile2_clic_new_study.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>
補足図S6:右クリックしてメッシュを作成します。 高い応力や変形が予想される領域でメッシュを細分化します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67332/Sup_fig_6_JoVE67332R1_screenfile6_right_clic_create_mesh.jpg" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

Calvarial Bone Marrowにおける血管動態の生体内縦断的イメージング

Intravital longitudinal fluorescence microscopy imaging has emerged as a crucial technique for studying dynamic biological processes, notably in the ...

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コンピュータ断層撮影法と頭蓋骨自家移植と同種移植片の統合を評価するために、骨形成、血管新生のカップリングの光イメージング

HIV誘導神経炎症のマウスモデルでは二光子顕微鏡を用いた脳血管のアーキテクチャの定量化

この原稿が縦2光子顕微鏡を用いたin vivoでのアミロイド斑の蓄積の間に脳血管系のリモデリングを追跡するための手順を説明します。間引き頭蓋骨製剤は、アルツハイマー病のマウスモデルにおける脳損傷の進行を評価するために、蛍光色素の可視化を可能にします。...

縦<em&gt;インビボ</em&gt;脳血管系のイメージング：中枢神経系疾患との関連

この記事の目標は、マイクロ コンピューター断層撮影で脳血管攣縮を定量化する使用ことができますすべての船セグメントのボリュームの決定後、マウスの脳血管の木の 3...

くも膜下出血のマウスモデルにおける脳血管攣縮の定量化法の体積

ここでは、2光子顕微鏡を用いて生きているマウスの頭蓋骨の骨髄にメガカルヨサイトおよびプロ血小板をイメージングする方法について説明する。...

イン・ヴィヴォ マウスの頭蓋骨骨髄における巨核球とプロ血小板の2光子イメージング

このプロトコルは、麻酔薬を使用したマウスの近くの血管から脳を包み込む周囲細胞からの蛍光カルシウム画像と血流データを取得して分析するステップを提示する。これらの技術は、壁画細胞生理学の研究に有用であり、任意の細胞型のカルシウム過渡症を調査するために適応することができる。...

生体内のトランスジェニックマウスにおける脳ペリサイトカルシウムと血行力学イメージング

白血球および血小板の動員は、動脈形成中の側副動脈の効果的な成長に必要な必須成分を構成する。多光子顕微鏡は、動脈形成中の白血球の動員と血管外漏出を研究するために、 in vivoで...

マウス後肢モデルにおける動脈形成中の白血球動員モニタリングのための多光子生体内イメージング

学ぶ頭蓋骨髄の血管動態の生体内縦断イメージング法。二光子顕微鏡とトランスジェニックマウスモデルを用いて、正常および病的造血における血管応答を可視化し、がん生物学と再生医療への応用を示す。

Calvarial Bone Marrowにおける血管動態の生体内縦断的イメージング

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