Name: デジタル加熱装置に基づくマウスのチェス盤状火傷創傷治癒モデル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-12-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: 学ぶデジタル加熱装置を用いたマウスのチェス盤状火傷創傷治癒モデル。一定の全層熱傷を作製し、TKHヒドロゲル治療による創傷治癒過程を再現性高く評価する手法です。

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<meta charset="utf8"></head><body>治療用包帯を評価するためのマウスにおける一貫した熱傷モデル

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<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+the+hair+follicle+bulge+contribute+to+wound+repair+but+not+to+homeostasis+of+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Stem cells in the hair follicle bulge contribute to wound repair but not to homeostasis of the epidermis.</a> Nat Med. 11 (12), 1351-1354 (2005).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt-dependent+de+novo+hair+follicle+regeneration+in+adult+mouse+skin+after+wounding%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wnt-dependent de novo hair follicle regeneration in adult mouse skin after wounding.</a> Nature. 447 (7142), 316-320 (2007).</li>
<li>Chen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pullulan-collagen+hydrogel+wound+dressing+promotes+dermal+remodeling+and+wound+healing+compared+to+commercially+available+collagen+dressings%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Pullulan-collagen hydrogel wound dressing promotes dermal remodeling and wound healing compared to commercially available collagen dressings.</a> Wound Repair Regen. 30 (3), 397-408 (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mLピペットチップ</td><td>キルゲン、アメリカ</td><td>KG1333</td><td>火傷創部位を見つけるために使用</td></tr><tr><td>3 M テガダームフィルム</td><td>3M、アメリカ</td><td>1624WCN 6 cm x 7 cm</td> 火<td>傷誘発後の創傷カバー用</td></tr><tr><td>4% パラホルムアルデヒド(PFA)</td>バイオ<td>シャープ、中国</td><td>BL539A</td><td>皮膚サンプルの固定に使用</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>シグマ-アルドリッチ、アメリカ</td><td>PHR8955-50MG</td><td>マウスの痛みの管理に</td></tr><tr><td>C57BL/6マウス</td><td>成都大朔実験動物会社、中国</td><td>なし</td><td>バーンモデル</td></tr><tr><td>脱毛クリーム</td><td>Veet、中国</td><td>&mdashの</td>設立のため;<td>マウスの背毛除去に</td></tr><tr><td>デジタル暖房装置</td><td>シンセンKapperの技術会社、マウス</td>の<td>火傷の誘導のための</td>中国<td>No.936D</td></tr><tr><td>電気かみそりAUX</td><td>の</td><td></td>マウスの<td>背部の毛の取り外しのための</td></tr><tr><td>濾紙</td><td>：;</td><td>&mdash;</td><td>皮膚サンプルの展開に使用</td></tr><tr><td>GraphPadソフトウェア</td><td>&mdash;</td><td>GraphPadプリズム9.5.0</td>火<td>傷傷領域の分析用</td></tr><tr><td>耐熱手袋</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>デジタル加熱装置の先端を保持するために使用されます</td></tr><tr><td>ヘマトキシリンおよびエオシンの汚れのキット</td><td>Solarbio、スライド</td>の<td>組織学的分析のための</td>中国<td>G1120</td></tr><tr><td>ImageJのsoftware</td><td>&mdash;</td><td>ImageJ 1.54f</td><td>熱傷創部の分析用</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>RWD,中国</td><td>R510-22-10</td><td>マウスの麻酔用</td></tr><tr><td>Masson's Trichrome Stain Kit</td><td>Solarbio,China</td><td>G1340</td><td>スライドの組織学的解析用</td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス,日本&nbsp;</td><td>VS200 ASW</td><td>H&EおよびMassonはスライドを染めました</td></tr><tr><td>ティッシュカセット</td><td>CITOTEST LABWARE MANUFACTURING Co., LTD,China</td><td>31050102W</td><td>組織パラフィン脱水およびパラフィン包埋用</td></tr></tbody></table>

デジタル加熱装置に基づくマウスのチェス盤状火傷創傷治癒モデル

Chessboard-like Burn Wound Healing Model of Mice Based on Digital Heating Device

このプロトコルでは、デジタル加熱装置によって、97°Cで10秒の燃焼時間でチェス盤のような火傷が作成されました(図1)。デバイスの先端は、優れた熱伝導性と高速加熱能力で知られる純銅でできています。実験者が保持するグリップはポリカーボネート素材でできており、耐熱性と不燃性を備えています。予熱された単一の金属板/棒、または沸騰または熱湯の方法と比較して、このデバイスは優れた安全性能を示し、マウスの麻酔時間を短縮し、結果として全体的な実験時間を短縮します。
火傷の誘発と解析の一般的なプロセスを 図 2 に示します。各動物は、 図2Eに示されているように配置された背部に6つの火傷を負っていました。これらの動物の創傷サイズを評価し、組織学的分析のために皮膚サンプルを採取しました。これには、それぞれ火傷後1日目、3日目、7日目、10日目、14日目のH&amp;Eおよびマッソントリクローム染色が含まれていました。
各火傷創は円形で、面積が等しく、火傷誘発後の深さも均一でした。火傷の縁の色はワックス状の白から赤に変化し、損傷に対する即時の炎症反応による充血ゾーンを伴いました。さらに、火傷の創のサイズは、火傷後72時間にわたってわずかに増加しました(図4A)。
H&amp;EとMassonのトリクローム染色された創傷切片の顕微鏡分析(図4B)により、表皮層の完全な破壊と真皮の全厚の損傷が明らかになり、皮下脂肪と筋肉の両方に影響を及ぼしました。組織学的検査では、創傷治癒過程は3日目に炎症段階にあり、血管拡張と炎症細胞の実質的な浸潤を特徴とすることが示されました。サンプルの顕微鏡画像に見られるように、火傷後の 7 日目には 3 日目と比較して創傷面積の顕著な減少が観察されました。肉芽組織と心血管が形成され、14日目にはコラーゲン線維が密集して沈着するため、創傷治癒がリモデリング段階に入ります。創傷は、治癒過程を通じて明らかな感染なしに回復しました。
さらに、創傷治癒データを定量化し、創傷追跡を分析することにより、創傷治癒能力を評価しました(図5)。創傷回復は、TKHペプチドハイドロゲル12,14で治療された創傷で促進されることが観察され、7日目、10日目、および14日目の創傷領域が有意に小さくなったことが証明されました。
隣接する創傷(図6)の間隔は、横方向または縦方向のいずれかで、非火傷の皮膚と比較して差は確認されませんでした。表皮、真皮、皮下組織は無傷で、リンパ球の浸潤や血管拡張はありませんでした。2つの傷の治癒過程は互いに干渉しません。したがって、 in vivoでの効果を評価するために、モデルに基づいてさまざまな薬物または包帯を創傷治療に適用することができます。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig01.jpg"> 
図1:燃焼誘導用のデジタル加熱装置。 火傷を誘発するために使用されるデジタル加熱装置。(a)温度コントローラーは、50〜450°Cの範囲の温度設定を可能にします。(c)デバイスの先端はさまざまなサイズに切り替えることができます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig02.jpg"> 
図2:チェス盤のような傷モデルの概略図。 記事で説明したチェス盤のような傷のモデルを再現するためのステップバイステップの概要。(A)創傷治癒実験のモデルとして8週齢のマウスを使用します。(B)指定された傷口から髪の毛を取り除きます。(C)6つの創傷部位は、1mLのピペットチップを使用してマーキングされます。(D)デジタル加熱装置を使用して、マークされた各サイト(E)の中央に6つの火傷を作成します。(F)火傷誘導後の背部のアップ画像。(G)皮膚サンプル(約1cm×1cm)は、3日目、7日目、10日目、14日目に採取します。(H)皮膚サンプルをフィルトペーパーを使用して平らにし、埋め込みカセットに移します。(I)パラフィン脱水を行い、(J)試料を5μmの厚さに切片化します。(K)切片は、ヘマトキシリンとエオシン(H&amp;E)、およびマッソントリクロームを使用して染色されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig03.jpg"> 
図3:全層熱傷誘発プロセス (A)1mLピペットチップの直径と(B)デジタル加熱装置のチップの直径は、それぞれ9mmと4mmです。(C)マウスの背側部分を電気シェーバーで剃ります。(D)脱毛クリームを3分間塗布します (E)削った部分を洗浄して乾燥させ、傷口に滅菌した1mLピペットチップで印を付けます。(F)デジタル加熱装置を97°Cで10秒間適用して、6つの火傷を作成します。(G)痛みの管理のために火傷の傷に氷を塗ります。(H)マウスの背面全体には、6つの全層熱傷の傷が見られます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig04.jpg"> 
図4:熱傷の代表的な画像と組織学的解析 (A)治癒の進行を示す3日目、7日目、10日目、14日目の熱傷の画像。(B)H&amp;EおよびMassonのトリクロームで染色された組織学的画像は、創傷治癒および皮膚再生を示している。スケールバー = 200 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig04large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig05.jpg"> 
図5:経時的な創傷サイズの変動 (A)ImageJソフトウェアを使用して分析した、対照動物およびTKHハイドロゲル処理動物における経時的な創傷サイズの変動。(B)対応する創傷痕跡データが提示されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig05large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67375/67375fig06.jpg"> 
図6:隣接する熱傷と組織学的分析 (A)1日目の隣接する熱傷の代表的な画像。(B)3日目に組織学的分析のために採取された隣接する創傷サンプル(赤丸で囲んだ部分)。(C)パラフィン脱水前に組織サンプルを平らにするために濾紙を使用します。(D)H&amp;EとMassonの隣接する創傷のトリクローム分析。スケールバー:1mmおよび200μm(拡大)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67375/67375fig06large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

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