Name: Manuka Honeyで処理された創傷原因細菌の生存細胞が培養できない細胞を定量するための生死染色 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: 学ぶマヌカハニー処理による創傷原因細菌のVBNC状態の定量法。培養可能菌数と生死染色を用いて、抗生物質との比較を通じて細菌の休眠応答を評価します。

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<ol><li>Spoering, A., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilms+and+planktonic+cells+of+Pseudomonas+aeruginosa+have+similar+resistance+to+killing+by+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Biofilms and planktonic cells of Pseudomonas aeruginosa have similar resistance to killing by antimicrobials.</a> J Bacteriol. 183 (23), 6746-6751 (2001).</li>
<li>Mulcahy, L. R., Burns, J. L., Lory, S., Lewis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+Pseudomonas+aeruginosa+strains+producing+high+levels+of+persister+cells+in+patients+with+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Emergence of Pseudomonas aeruginosa strains producing high levels of persister cells in patients with cystic fibrosis.</a> J Bacteriol. 192 (23), 6191-6199 (2010).</li>
<li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> F Microbiol. 5, 00258(2014).</li>
<li>Reygaert, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+the+antimicrobial+resistance+mechanisms+of+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AIMS+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An overview of the antimicrobial resistance mechanisms of bacteria.</a> AIMS Microbiol. 4 (3), 482-450 (2018).</li>
<li>Ayrapetyan, M., Williams, T. C., Baxter, R., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+nonculturable+and+persister+cells+coexist+stochastically+and+are+induced+by+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Viable but nonculturable and persister cells coexist stochastically and are induced by human serum.</a> Infect Immun. 83 (11), 4194-4203 (2015).</li>
<li>Cabral, D. J., Wurster, J. I., Belenky, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+persistence+as+a+metabolic+adaptation%3A+Stress%2C+metabolism%2C+the+host%2C+and+new+directions%5BTitle%5D)+AND+%22PHARH2%22%5BJournal%5D)">Antibiotic persistence as a metabolic adaptation: Stress, metabolism, the host, and new directions.</a> PHARH2. 11 (1), 11010014(2018).</li>
<li>Heidelberg, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+aerosolization+on+culturability+and+viability+of+gram-negative+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Effect of aerosolization on culturability and viability of gram-negative bacteria.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (9), 3585-3588 (1997).</li>
<li>Cook, K. L., Bolster, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+Campylobacter+jejuni+and+Escherichia+coli+in+groundwater+during+prolonged+starvation+at+low+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival of Campylobacter jejuni and Escherichia coli in groundwater during prolonged starvation at low temperatures.</a> J Appl Microbiol. 103 (3), 573-583 (2007).</li>
<li>Xu, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+and+viability+of+nonculturable+Escherichia+coli+and+Vibrio+cholerae+in+the+estuarine+and+marine+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbl+Ecol%22%5BJournal%5D)">Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment.</a> Microbl Ecol. 8 (4), 313-323 (1982).</li>
<li>Qi, Z., Huang, Z., Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+differences+of+biofilm+and+planktonic+Pseudomonas+aeruginosa+in+viable+but+nonculturable+state+induced+by+chlorine+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Metabolism differences of biofilm and planktonic Pseudomonas aeruginosa in viable but nonculturable state induced by chlorine stress.</a> Sci Total Environ. 821, 153374(2022).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+Viable+but+Non-culturable+%28VBNC%29+state+formation+of+staphylococcus+aureus+and+its+control+in+food+system%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Study on the Viable but Non-culturable (VBNC) state formation of staphylococcus aureus and its control in food system.</a> F Microbiol. 11, 599739(2020).</li>
<li>Oryan, A., Alemzadeh, E., Moshiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+and+therapeutic+activities+of+honey+in+wound+healing%3A+A+narrative+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Viability%22%5BJournal%5D)">Biological properties and therapeutic activities of honey in wound healing: A narrative review and meta-analysis.</a> J Tissue Viability. 25 (2), 98-118 (2016).</li>
<li>Lusby, P. E., Coombes, A. L., Wilkinson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bactericidal+Activity+of+different+honeys+against+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Bactericidal Activity of different honeys against pathogenic bacteria.</a> Arch Med Res. 36 (5), 464-467 (2005).</li>
<li>Mandal, M. D., Mandal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey%3A+Its+medicinal+property+and+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+Pac+J+Trop.+Biomed%22%5BJournal%5D)">Honey: Its medicinal property and antibacterial activity.</a> Asian Pac J Trop. Biomed. 1 (2), 154-160 (2011).</li>
<li>Carter, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+Manuka+Honey%3A+No+longer+so+alternative%5BTitle%5D)+AND+%22F+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic Manuka Honey: No longer so alternative.</a> F Microbiol. 7, 00569(2016).</li>
<li>Cooper, R. A., Molan, P. C., Harding, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sensitivity+to+honey+of+Gram-positive+cocci+of+clinical+significance+isolated+from+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The sensitivity to honey of Gram-positive cocci of clinical significance isolated from wounds.</a> J Appl Microbiol. 93 (5), 857-863 (2002).</li>
<li>George Narelle May, C., Keith, F. Antibacterial Honey: In-vitro activity against clinical isolates of MRSA, VRE, and other multiresistant Gram-negative organisms. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGeorge+Narelle+May%2C+C+%22HMP+Global+Learning+Network%22">HMP Global Learning Network</a>. , https://www.hmpgloballearningnetwork.com/site/wounds/article/7751 (2007).</li>
<li>Blair, S. E., Cokcetin, N. N., Harry, E. J., Carter, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unusual+antibacterial+activity+of+medical-grade+Leptospermum+honey%3A+Antibacterial+spectrum%2C+resistance+and+transcriptome+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The unusual antibacterial activity of medical-grade Leptospermum honey: Antibacterial spectrum, resistance and transcriptome analysis.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 28 (10), 1199-1208 (2009).</li>
<li>Cooper, R. A., Jenkins, L., Henriques, A. F. M., Duggan, R. S., Burton, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+bacterial+resistance+to+medical-grade+manuka+honey%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Soc+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Absence of bacterial resistance to medical-grade manuka honey.</a> Eur Soc Clin Microbiol. 29 (10), 1237-1241 (2010).</li>
<li>Lu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Honey+can+inhibit+and+eliminate+biofilms+produced+by+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Honey can inhibit and eliminate biofilms produced by Pseudomonas aeruginosa.</a> Sci Rep. 9 (1), 18160(2019).</li>
<li>Bischofberger, A. M., Pfrunder Cardozo, K. R., Baumgartner, M., Hall, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+honey+resistance+in+experimental+populations+of+bacteria+depends+on+the+type+of+honey+and+has+no+major+side+effects+for+antibiotic+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Evol+Appl%22%5BJournal%5D)">Evolution of honey resistance in experimental populations of bacteria depends on the type of honey and has no major side effects for antibiotic susceptibility.</a> Evol Appl. 14 (5), 1314-1327 (2021).</li>
<li>Cunningham, E., O'Byrne, C., Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+weak+acids+on+Listeria+monocytogenes+survival%3A+Evidence+for+a+viable+but+nonculturable+state+in+response+to+low+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Effect of weak acids on Listeria monocytogenes survival: Evidence for a viable but nonculturable state in response to low pH.</a> Food Control. 20 (12), 1141-1144 (2009).</li>
<li>Kogure, K., Simidu, U., Taga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+tentative+direct+microscopic+method+for+counting+living+marine+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria.</a> Can J Microbiol. 25 (3), 415-420 (1979).</li>
<li>Albertini, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+multiparameter+analysis+for+Vibrio+alginolyticus+viable+but+nonculturable+state+determination%5BTitle%5D)+AND+%22Cytom+J+Int+Soc+Anal+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of multiparameter analysis for Vibrio alginolyticus viable but nonculturable state determination.</a> Cytom J Int Soc Anal Cytol. 69 (4), 260-265 (2006).</li>
<li>Nocker, A., Camper, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+toward+preferential+detection+of+viable+cells+using+nucleic+acid+amplification+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol+Lett%22%5BJournal%5D)">Novel approaches toward preferential detection of viable cells using nucleic acid amplification techniques.</a> FEMS Microbiol Lett. 291 (2), 137-142 (2009).</li>
<li>Trevors, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viable+but+non-culturable+%28VBNC%29+bacteria%3A+Gene+expression+in+planktonic+and+biofilm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Viable but non-culturable (VBNC) bacteria: Gene expression in planktonic and biofilm cells.</a> J Microbiol Methods. 86 (2), 266-273 (2011).</li>
<li>Ankley, L. M., Monteiro, M. P., Camp, K. M., O'Quinn, R., Castillo, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manuka+honey+chelates+iron+and+impacts+iron+regulation+in+key+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+App+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Manuka honey chelates iron and impacts iron regulation in key bacterial pathogens.</a> J App Microbiol. 128 (4), 1015-1024 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>ミューラーヒントンブロス</td><td>フィッシャーバイオ試薬</td><td>B12322</td><td></td></tr><tr><td>ルリアベルタニ(LB)ブロス&nbsp;</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP142602</td><td></td></tr><tr><td>BD Difco 寒天</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0812-07-1</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S3014-500g</td><td></td></tr><tr><td>メロペネム</td><td>TargetMol</td><td>T0224</td><td></td></tr><tr><td>トブラマイシン</td><td>セレック ケミカルズ</td><td>S2514</td><td></td></tr><tr><td>黄色ブドウ球菌&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>ATCC29213</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;緑膿菌</td><td>ATCC</td><td>ATCC9721</td><td></td></tr><tr><td>振盪インキュベーター</td><td>エッペンドルフ</td><td>M13520000</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>ベンチマークサイエンティフィック</td><td>H2200-H&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>マヌカガード マヌカハニー</td><td>アマゾン</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DMIL倒立型蛍光顕微鏡&nbsp;</td><td>ライカマイクロシステムズ</td><td>11521265</td><td></td></tr><tr><td>デジタルカメラ</td><td>ライカマイクロシステムズ</td><td>12730522</td><td></td></tr><tr><td>15 mL ファルコンチューブ</td><td>ジェネシーサイエンティフィック</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット</td><td>ダイグノシン</td><td>DP-LB0100005、DP-LB010010</td><td></td></tr><tr><td>ピペットエイド ピペット</td><td>ドラモンド・サイエンティフィック・カンパニー</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>ブンゼンバー</td>ナー <td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>S48108</td><td></td></tr><tr><td>レイニンピペット</td><td>Pipette.com</td><td>L-20, L-200, L-1000</td><td></td></tr><tr><td>バランス</td><td>メトラー・トレド</td><td>XS603S</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルプレート</td><td>ファルコン</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>接種ループ</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>13-104-5</td><td></td></tr><tr><td>イソプロパノール</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>BP2618-1</td><td></td></tr><tr><td>ガラススプレッダー</td><td>自家製</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>細菌用生死染色キット</td><td>Invitrogen</td><td>L7012</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ</td><td>Biologix Research Company</td><td>SKU 80-1500/P80-1500</td><td></td></tr><tr><td>錫箔</td><td>コストコ</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>フィギュア作成ソフト</td><td>GraphPad</td><td>NA</td><td>GraphPad Prismは、フィギュア作成と統計分析に使用しました。</td></tr></tbody></table>

manuka honeyで処理された創傷原因細菌の生存細胞が培養できない細胞を定量するための生死染色

Live/Dead Staining for Quantifying Viable but Not Culturable Cells in Manuka Honey-Treated Wound-Causing Bacteria

生存可能だが培養できない(VBNC)細菌の生命体は、抗生物質治療などのストレッサーによって誘発され、抗生物質耐性のために再発性感染症を引き起こします。MHは広域スペクトルの抗菌薬であり、耐性はほとんど検出されていないため、MHは従来の抗生物質よりもVBNCの誘導が少ないという仮説が立てられました。ここで説明した方法は、2つの創傷原因細菌、 黄色ブドウ球菌 と 緑膿菌によって形成されるVBNCを定量するために使用されました。VBNCの数は、生/死染色によって決定された生細胞の数から、生菌プレート数によって決定された培養可能な細胞の数を差し引いたものに等しくなります。 表3 は、 黄色ブドウ球菌 と 緑膿菌でそれぞれ検出されたVBNCの平均数と、示された時点と治療を示しています。これらの実験で直面する課題の1つは、生存細胞数が培養可能細胞数よりも少なく、VBNCの数がマイナスになることです。すべての培養可能な細胞は、繁殖してコロニーを形成する能力に基づいて生存可能です。これは、各処理で培養可能な細胞数が生細胞数と有意に異なるかどうかを判...

Manuka Honeyで処理された創傷原因細菌の生存細胞が培養できない細胞を定量するための生死染色

Antibiotic resistance and tolerance among bacteria pose a significant threat to global health. Mechanisms contributing to antibiotic resistance and ...

livedead-staining-for-quantifying-viable-but-not-culturable-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオは、ハ​​マダラカの細胞株とし、無細胞培地で培養endosymbiontをからボルバキアpipientisを精製する方法を説明します。細菌の生存のためのアッセイは、示されている。...

無細胞培地でボルバキアの維持

出典: アンダーソン、Q.L.、 他。ハイスループット,高含有量,液体ベースの C.エレガンス 病態系 J. Vis. 経験。 (2018年)このビデオは、遺伝子組み換えされた C.エレガンスの...

C.エレガンス幼虫における病原菌誘発性死亡率の評価

Source: Calatayud Arroyo, M., et al. Assessing the Viability of a Synthetic Bacterial Consortium on the In Vitro Gut Host-microbe Interface. J. Vis. Exp. (2018)The video demonstrates a method to evaluate the viability of anaerobic oral bacteria using fluorescent dyes and flow cytometry. It begins with culturing bacteria in oxygen-free broth, followed by resuspending a single colony from a blood agar plate. After incubation and dilution, the culture is stained with membrane-permeable and...

Fluorescence-Based Viability Assessment of Oral Anaerobic Bacteria

ビデオは、ヒト好中球と肺炎連鎖球菌の共培養を使用したin...

細菌性病原体に対するオプソノファゴサイトーの殺傷活性の評価

このビデオは、接着細胞の細菌感染に対する細胞外マトリックス(ECM)硬化の影響を研究するためのアッセイを示しています。さまざまな硬さのポリアクリルアミドハイドロゲルをコラーゲンで重ね合わせたマルチウェルプレートに重ね合わせることで、生理的ECMの硬さを模倣します。ヒト内皮細胞をハイドロゲル上に重ね合わせ、細胞内で蛍光タンパク質を発現するように設計されたリステリア菌を細胞に感染させると、フローサイトメトリーを使用して、硬いハイドロゲル上に存在する細胞内の内在する細菌と柔らかいハイドロゲル上に存在する細菌を比較します。...

細胞外マトリックスの硬直が細菌感染に及ぼす影響を研究するためのアッセイ

微生物は、真核細胞への曝露後に存続した場合、どのように細菌の病原性の分野の中心となるのは、定義する機能です。この記事では、内部および宿主細胞に関連する個々の細菌の生存を明らかに蛍光色素を使用するためのプロトコルの概要を説明します。...

哺乳動物細胞に関連して細菌の生存を決定するための蛍光顕微鏡法

バイオフィルム感染症は、化学療法に対して高い耐性を示します。バイオフィルムの複雑さを捉える単一のアッセイはありません。代わりに、補完的なアッセイが必要です。生存率、バイオマス、およびバイオフィルムマトリックスのアッセイを組み合わせたスクリーニングプラットフォーム(黄色ブドウ球菌用に開発された)を紹介します。これにより、長期的な化学療法効果の評価を含む、抗バイオフィルム創薬が可能になります。...

天然化合物ライブラリーの探査に適した抗バイオフィルムアッセイのプラットフォーム

単純な ATP 測定法およびライブ/デッド染色法は、定量化し、セフトリアキソン、治療後の淋菌生存を視覚化する使用されました。このプロトコルを拡張して任意の抗生物質の抗菌効果を確認して、細菌バイオ...

淋菌ATP の使用率が集計を使用して商業試金およびライブ/デッド染色の抗生物質感受性の定量的検討

ここで説明は、動物組織細胞レベルでの細菌の遺伝子発現解析の方法です。このメソッドは、組織環境への応答で感染症に細菌の人口の内で発生する表現型の多様性を研究するためのリソースを提供します。...

感染した組織の細菌の遺伝子の規則を勉強する蛍光ベースのメソッド

プロトコルは、黄色ブドウ球菌に感染したex vivoヒツジ創傷皮膚モデルをセットアップするための段階的な方法を説明しています。このハイスループットモデルは、従来の微生物学技術と比較してin...

新しい抗生物質をテストするための新しいハイスループット Ex Vivo ヒツジ皮膚創傷モデル

ここでは、酵母サンプルにおけるストレス後の生存を定量化するためのプロトコルを提示します。このアッセイでは、原形質膜の完全性を定量するために、SYTO 9 とヨウ化プロピジウム (PI) の 2...

酵母細胞におけるストレス後生存を定量化するためのフローサイトメトリーと組み合わせた最適化されたLIVE/DEADアッセイ

学ぶマヌカハニー処理による創傷原因細菌のVBNC状態の定量法。培養可能菌数と生死染色を用いて、抗生物質との比較を通じて細菌の休眠応答を評価します。

Manuka Honeyで処理された創傷原因細菌の生存細胞が培養できない細胞を定量するための生死染色

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