Name: ハイブリッドスフェロイドの生成のための光ピンセットの使用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 11 s
Description: 学ぶ光ピンセットを用いたハイブリッドスフェロイドの構築法。リンパ腫細胞と間質細胞の相互作用を単細胞レベルで制御し、3次元細胞培養や組織工学の研究に応用可能です。

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<table><tbody><tr><td>&micro;-ディッシュ35 mm、高ガラス底</td><td>IBIDI</td><td>81158</td><td></td></tr><tr><td>12-256 mico-mold 3D PetriDish&nbsp;</td><td>Microtissues Inc.、ロードアイランド州、米国</td><td>12-256TR</td><td></td></tr><tr><td>3 & マイクロ;m ポリスチレン微小球</td><td>Polysciences</td><td>17134-15</td><td></td></tr><tr><td>anti CD20 antibody (clone L26)</td><td>Dako</td><td>IS604</td><td></td></tr><tr><td>Automated Cell Counter, EVE</td><td>NanoEntek</td><td>EVE/ EVE-MC</td><td></td></tr><tr><td>Autostainer Link 48</td><td>Dako</td><td>D09634</td><td></td></tr><tr><td>Camera&nbsp;</td><td>オリンパス</td><td>U-TV0.63XC</td><td></td></tr><tr><td>セルカルチャー CO2インキュベーター</td><td>エスコテクノロジーズ(株)</td><td>CCL</td><td></td></tr><tr><td>細胞計数スライド、EVE</td><td>NanoEntek</td><td>NE-EVS</td><td></td></tr><tr><td>細胞株HS-5</td><td>ATCC</td><td>CRL-3611</td><td></td></tr>細胞<tr><td>株Ri-1&nbsp;</td><td>DSMZ&nbsp;</td><td>ACC 585</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Gibco</td><td>A5256701</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス</td><td>BX43</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ program</td><td>米国国立衛生</td><td></td><td></td>研究所</tr><tr><td>倒立顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>IX73</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead 試薬キット&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水、pH 7.4</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 培地</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム溶液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム溶液 0.9%、滅菌済み</td><td>ITW ReITW試薬、S.R.L.エージェント、S.R.L.</td><td>A1671</td><td></td></tr><tr><td>トリパンブルー溶液、0.4%</td><td>Gibco 15250061</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1X)、フェノールレッド不</td>使用 <td>Gibco</td><td>12604013</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%)、フェノールレッド</td><td>Gibco</td><td>25300096</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Agarose Invitrogen</td><td></td><td></td> 16500500<td></td></tr><tr><td>光学ピンセット セットアップ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ダイクロイックミラー</td><td>Thorlabs</td><td>DMSP805R</td><td></td></tr><tr><td>デジタルカメラ</td><td>Mikrotron GmbH</td><td>MC1362</td><td></td></tr><tr><td>ガルバノミラーXYスキャンシステム</td><td>Thorlabs</td><td>GVS002</td><td></td></tr><tr><td>倒立顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>レンズ 1</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-050-B-ML</td><td></td></tr><tr><td>レンズ 2</td><td>Thorlabs</td><td>AC508-200-B-ML</td><td></td></tr><tr><td>Nd:YAG 1064 nm</td><td>レーザー Quantum</td><td>Ventus</td><td></td></tr></tbody></table>

ハイブリッドスフェロイドの生成のための光ピンセットの使用

Using Optical Tweezers for the Generation of Hybrid Spheroids

これまでの結果から、リンパ腫細胞と培養した間葉系間質細胞が、がん細胞が均一に付着する均質な間質コアを構成していることが示された18。本研究では、特注の光ピンセットを用いて、間葉系間質細胞とリンパ腫細胞からなるヒトハイブリッドスフェロイドの改変に成功しました。 図2B は、光ピンセットシステムの重要な部分である明視野顕微鏡の代表的な回転楕円体を示しています。次に、 図2C は、抗CD20抗体37を用いたハイブリッドスフェロイドの免疫組織化学的染色を示す。CD20はB細胞の一般的なマーカーであり、これらの細胞の大部分に存在します。ハイブリッドスフェロイドの構築に使用されたリンパ腫細胞はすべてCD20抗原を発現し、茶色に染色されていますが、間質細胞はCD20陰性です。
ハイブリッドスフェロイドを作成する最初のステップは、上記の詳細なプロトコルを使用して間葉系間質スフェロイドを...

Two-dimensional (2D) cell culture is still among the most commonly used models in preclinical cancer research. However, the three-dimensional (3D) in ...

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

スフェロイドは、2D細胞培養単層モデルと比較して、細胞の環境をより正確に表現するために使用される3D細胞培養モデルの一種です。このプロトコル例では、科学者が結腸直腸がん細胞株からスフェロイドを作製し、生細胞イメージングを適用してスフェロイドの成長を追跡します。...

細胞株からのスフェロイド作製:三次元(3D)細胞培養法

出典: Huang, Y. et.al., 光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍スフェロイドの縦断的形態学的および生理学的モニタリング. J. Vis. Exp.

光干渉断層撮影法を用いた腫瘍スフェロイドの形態学的および生理学的モニタリング

ここでは、細胞凝集を通じて3D細胞スフェロイドを形成するための迅速で柔軟なプロトコルについて説明します。これは、複数の細胞タイプに容易に適応でき、細胞遊走、浸潤、アノイキスアッセイなどのさまざまなアプリケーションでの使用や、細胞-マトリックス相互作用のイメージングと定量化に適しています。...

3Dスフェロイド生産のための効率的で柔軟な細胞凝集法

光コヒーレンストモグラフィ...

光コヒーレンストモグラフィーを用いた三次元腫瘍回転楕円体の縦断的形態学的および生理学的監視

細胞回転楕円体を培養できるモータ駆動遠心マイクロ流体装置を紹介する。この装置を使用して、単一または複数の細胞タイプの回転楕円体は、高い重力条件下で容易に共培養することができる。...

多細胞三次元回転楕円体を生成するためのラボオンCDプラットフォーム

このプロトコルは、標準的な蛍光顕微鏡での酸素化および細胞死のマルチパラメトリック分析を使用して、バイオプリンティングのためのハイスループットスフェロイド生成を記述している。このアプローチは、スフェロイドの生存率を制御し、3D組織、腫瘍微小環境、および成功した(マイクロ)組織バイオファブリケーションのモデリングにおいて重要な標準化を実行するために適用することができる。...

多細胞スフェロイドの手頃な価格の酸素顕微鏡支援バイオファブリケーション

このプロトコルは、大規模なハイコンテンツスクリーニングおよび分析に適した方法で3つの異なるタイプのスフェロイドを製造する方法を詳述する。さらに、回転楕円体および個々の細胞レベルでそれらをどのように分析できるかを示す例を提示する。...

ハイコンテンツスクリーニングおよび分析アプリケーションのためのスフェロイドの大規模生産のための堅牢な方法

本プロトコルは、3Dプリントされたスタンプ様デバイスを使用して、大規模かつ費用対効果の高い方法で組織スフェロイドを作製する技術を記載している。...

3Dプリントされたスタンプ状デバイス による 組織スフェロイドの生成

腫瘍スフェロイドは、腫瘍細胞と微小環境の相互作用および治療応答を評価するためにますます利用されつつある。本プロトコルは、迅速な光学的クリアリングを用いた3D腫瘍スフェロイドの半ハイスループットイメージングのための堅牢かつ簡単な方法を記載する。...

腫瘍スフェロイドの半ハイスループット分析のための迅速な光学的クリアリング

この研究では、アガロース型にマイクロウェルを作製するためのスタンプベースのシステムを使用して、3D細胞構造を生成するための費用対効果が高く効率的な方法論を提示します。このシステムは、均一なスフェロイド/オルガノイドの形成を促進し、細胞相互作用を改善します。このアプローチは、実験のばらつきを減らし、薬物試験や組織工学への応用をサポートします。...

新規スタンプデバイスを用いた二次元細胞培養からの三次元スフェロイド/オルガノイドの作製

学ぶ光ピンセットを用いたハイブリッドスフェロイドの構築法。リンパ腫細胞と間質細胞の相互作用を単細胞レベルで制御し、3次元細胞培養や組織工学の研究に応用可能です。

ハイブリッドスフェロイドの生成のための光ピンセットの使用

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