クエン酸吸入による咳過敏症マウスモデルの確立

慢性的な咳は生活の質を著しく損ない、差し迫った外観と多大な経済的負担を引き起こします。咳の持続性、特に咳過敏症のメカニズムに焦点を当てます。咳過敏症のマウスモデルを確立し、慢性咳嗽のメカニズムのさらなる研究に役立てます。他の動物モデル、特にモルモットと比較して、メンテナンスが容易で、費用対効果が高く、遺伝子操作に適しています。私たちのプロトコルは操作が簡単です。モデルの方が対比しやすいです。MAの方が実現可能です。このモデルは、慢性咳嗽のメカニズムと潜在的な新しい治療法に関するさらなる研究にも役立ちます。

[ナレーター]まず、マウスを2つの独立したチャンバーに入れ、それぞれが超音波ネブライザーに接続します。モデル群を0.1モルのクエン酸エアロゾルにさらし、対照群を0.9%生理食塩水エアロゾルにさらします。霧化速度を最大値の毎分3ミリリットルに設定し、2週間にわたって1日2時間に曝露を調整します。各セッションの後、マウスをそれぞれのケージに戻します。非侵襲的な全身プレチスモグラフィーシステムをセットアップして、咳の感受性を測定します。チャンバー、流量変換器、バイアスフロー、およびその他のコンポーネントを接続します。[校正]ボタンをクリックしてシステムを校正し、正確な測定を保証します。次に、マウス用のシステムソフトウェアで新しい咳研究を作成します。順応に1分、応答時間に10分、薬液送達に10分を許容するように試験パラメータを設定します。その後、意識のある各マウスを個別のチャンバーに入れ、チャンバーごとにマウスが 1 匹だけになるようにします。次に、生理食塩水、クエン酸、カプサイシンなどの適切な薬液を 1 ミリリットルをネブライザーに加え、手順開始後の咳イベントの数を記録します。気道過敏性測定用の機器を準備します。マウスのシステムソフトウェアで用量反応研究を作成します。測定パラメーターとタスク シーケンスを構成します。順応に1分、メタコリン送達に30秒、応答時間に3分、回復に1分。意識のある各マウスを個別のチャンバーに入れ、チャンバーごとにマウスが 1 匹だけになるようにします。次に、50マイクロリットルのPBSまたはメタコリンをネブライザーに加え、研究を開始します。メタコリン濃度の増加に反応した気管支収縮を示すPenhの値を記録します。モデル群では1週間後に咳の感受性が有意に増加し、曝露期間を通じて持続した。研究中、モデル群または対照群のいずれでも死亡率は観察されませんでした。曝露後、自発的な咳イベントの数は、対照群よりもモデル群の方が有意に多かった。生理食塩水、クエン酸、カプサイシンによって誘発される咳の感受性も、曝露後のモデル群で有意に高かった。気道過敏性は、モデリング後も有意差がなく、2 つのグループ間で同等のままでした。まず、安楽死させたマウスの眼窩洞から血液を1.5ミリリットルの微量遠心チューブに採取します。チューブを氷の上に置き、血液を摂氏4度で10分間3000 Gで遠心分離します。ピペットを使用して上清を回収し、分注します。次に、胸を開いて気管を露出させ、22ゲージの留置針を気管に挿入します。0.5ミリリットルの予冷PBSで気管を3回洗浄し、気管支肺胞洗浄液を採取します。次に、収集した液体を摂氏4度で500Gで10分間遠心分離します。上清を集めて分注し、-80°Cで保存します。ペレットを100マイクロリットルのPBSに再懸濁します。胸を開いて肺を露出させ、肺組織を慎重に取り除きます。収集した肺組織を極低温バイアルに入れます。気管支肺胞洗浄液中の総炎症細胞数と差分細胞数に、グループ間で有意差は観察されませんでした。