ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化
2025年3月7日
この記事では、ラットにおける網膜下注射の方法について、術中の視覚化を利用して注射部位と網膜剥離の領域の両方を制御する方法について説明します。
私は網膜剥離における細胞死のメカニズムを探求しており、in vitroデータのin vivo実験へのトレーサビリティを確保することを目標としています。私たちのチームでは、視細胞変性におけるさまざまな細胞死メカニズムの関与を示しました。げっ歯類の網膜剥離を誘発するために説明されている多くの方法があります。
このプロトコルは、再現性と安全性という2つの課題に答えるために設計されました。網膜剥離における再現性のある安全なプロトコールを提供することで、この種の研究の効率を確保することができます。まず、25マイクロリットルのシリンジにセメントで固定された斜めのない10ミリメートル30ゲージカニューレの金属チップをマイクロインジェクターに取り付けます。
長期的な網膜剥離を誘発するには、2%ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたは1%〜5%ヒアルロン酸ナトリウムを使用します。.調製した溶液をシリンジに入れます。次に、麻酔をかけたラットの片方の目に0.5%トロピカミドを1滴塗布して散瞳を発症します。
手術する眼にオキシブプロカインを1滴塗布します。フットスイッチに接続された眼科用顕微鏡を使用して手術を行います。強膜を露出させるには、上まぶたと下まぶたの眼瞼縁の外側4分の1に2つのまぶたを引っ張る縫合糸を固定します。
縫合糸を引っ張ると、目が穏やかに膨らみます。30ゲージの針で、角膜辺縁部から約1〜2ミリメートルの側頭球結膜を通る強膜チャネルを作成します。処置全体を通して、レンズの目のインターフェースとして涙液ジェルを塗布します。
網膜板を視覚化するには、直径8mmの平らなコンタクトレンズを目の表面に置きます。顕微鏡のフットスイッチを使用して、網膜面に焦点を合わせます。次に、事前に形成された強膜チャネルを介してカニューレを垂直に挿入します。
ゆっくりと網膜に近づき、網膜の白化が観察されるまで優しく押します。注入流によって形成された網膜切開術を通して注入しながら先端の安定性を維持する 注入後、先端を網膜切開術から取り外します。次に、カニューレ全体を硝子体腔からゆっくりと引き抜き、レンズが触れないようにします。
瞳孔腔内の血流を観察せずに、網膜剥離によって瞳孔赤反射が変化していることを確認します。まぶたの縫合糸を取り外し、出血があれば慎重に綿棒で拭きます。眼圧を手動で簡単に評価します。
術後ケアのために、手術した眼にクロラムフェニコールレチノール眼軟膏を塗布します。.次に、1ミリリットルの5%グルコース一水和物を腹腔内に投与します。.アチパメゾールを1キログラムあたり0.9ミリグラムを皮下に注射します。.
最後に、動物を温度制御されたチャンバーに移し、目を覚ますまで監視します。網膜下注射の成功は、光コヒーレンストモグラフィーでの透明な網膜下液と、眼底写真での網膜下出血の欠如によって確認されました。そして、両方のモダリティで明確な網膜剥離が観察されました。
軽度の硝子体内出血は、主に注射部位の近くで時折観察されましたが、網膜下腔には広がりませんでした。.
概要
この記事では、術中視覚化を利用して注射部位と網膜剥離の領域の両方を制御するラットの網膜下注射法について説明します。このプロトコルは、網膜剥離研究における再現性と安全性を向上させることを目的としています。
主要な研究要素
科学の分野
- 神経科学
- 網膜研究
- 実験プロトコル
背景
- 網膜剥離における細胞死メカニズムの理解。
- in vitro から in vivo データへのトレーサビリティの重要性。
- 実験手順における再現性と安全性の確保の課題。
- げっ歯類における網膜剥離を誘発する様々な方法。
研究目的
- 網膜剥離のための再現性と安全なプロトコルを提供すること。
- 網膜変性を効率的に研究することを促進すること。
- 網膜下注射のための正確な外科的技術を確保すること。
使用された方法
- マイクロインジェクターに非ベベルカニューレを取り付けること。
- 網膜剥離にヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒアルロン酸を使用する。
- 眼科用顕微鏡下で手術を行う。
- 事前に形成された強膜チャネルを通じて注射を行い、光干渉断層法で結果を評価する。
主な結果
- 網膜下液の明瞭さによって確認された網膜下注射の成功。
- 眼底写真で網膜下出血が観察されなかった。
- 画像モダリティを通じて確認された明確な網膜剥離。
- 網膜内出血は軽微に観察されたが、網膜下空間には広がらなかった。
結論
- このプロトコルは網膜剥離研究の安全性と再現性を向上させます。
- 注射の成功の視覚的確認は研究の妥当性にとって重要です。
- 術後ケアは動物の福祉と回復のために不可欠です。
よくある質問
Executive Industry Relevance
Intraoperative visualization of subretinal injection and retinal detachment in rats addresses a critical need for reproducible, controlled delivery of therapeutics and disease modeling in ophthalmic drug discovery. This protocol enables precise manipulation and monitoring of retinal detachment, supporting translational continuity from preclinical models to human-relevant workflows. Enhanced reproducibility and safety directly impact the predictive confidence of early-stage retinal therapeutic programs.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables controlled induction of retinal detachment for mechanistic studies of photoreceptor degeneration.
- Supports functional validation of therapeutic targets in the subretinal space.
- Facilitates reproducible disease modeling for hypothesis-driven research.
Screening & Assay Development
- Provides a validated in vivo system for evaluating subretinal delivery of candidate compounds.
- Ensures quantitative assessment of injection success via imaging modalities.
- Standardizes procedure for consistent assay outputs across studies.
Translational & Preclinical Research
- Aligns preclinical retinal detachment models with clinical procedures for translational relevance.
- Enables assessment of therapeutic efficacy and safety in a controlled, reproducible setting.
- Supports risk-adjusted advancement of retinal therapies based on robust in vivo data.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum for retinal disease research, bridging in vitro findings with in vivo validation and supporting lead identification and optimization.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing on cell death mechanisms and target engagement in retinal tissue.
- Screening: Delivers reproducible, quantifiable readouts for compound evaluation in a disease-relevant model.
- Analytics: Employs fundus photography and optical coherence tomography for objective measurement of injection and detachment outcomes.
- Translational Research: Provides continuity between rodent models and human surgical procedures for subretinal delivery.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized protocol adaptable across retinal research programs and therapeutic modalities.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in retinal target validation.
- Operational Value: Enhances reproducibility, safety, and standardization of in vivo retinal procedures.
- Strategic Value: Improves go/no-go decision-making and capital efficiency in ophthalmic R&D portfolios.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of retinal therapeutic candidates.
Implementation Considerations
- Requires expertise in ophthalmic microsurgery and rodent anesthesia.
- Demands access to ophthalmic microscopes, microinjectors, and imaging platforms.
- Necessitates cross-team standardization for reproducibility and data comparability.
- Adaptable to various retinal detachment durations and solution viscosities as needed for specific research aims.
- Potential limitations include risk of lens damage, hemorrhage, or detachment failure, requiring careful procedural adherence.
