Name: ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 16 s
Description: 学ぶラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化手法。眼外科顕微鏡とOCTを用いて、再現性と安全性を確保した網膜剥離研究のための正確な手術技術を習得できます。

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<ol><li>Guymer, R. H., Campbell, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> Lancet. 401 (10386), 1459-1472 (2023).</li>
<li>Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Retinitis pigmentosa.</a> Lancet. 368 (9549), 1795-1809 (2006).</li>
<li>Cheung, N., Mitchell, P., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+retinopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diabetic retinopathy.</a> Lancet. 376 (9735), 124-136 (2010).</li>
<li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+death+and+rescue+in+retinal+detachment+and+degenerations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell death and rescue in retinal detachment and degenerations.</a> Prog Retin Eye Res. 37, 114-140 (2013).</li>
<li>Russell, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+voretigene+neparvovec+%28AAV2-hRPE65v2%29+in+patients+with+RPE65-mediated+inherited+retinal+dystrophy%3A+A+randomised%2C+controlled%2C+open-label%2C+phase+3+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of voretigene neparvovec (AAV2-hRPE65v2) in patients with RPE65-mediated inherited retinal dystrophy: A randomised, controlled, open-label, phase 3 trial.</a> Lancet. 390, 849-860 (2017).</li>
<li>Gagliardi, G., Ben M'Barek, K., Goureau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cell+replacement+in+macular+degeneration+and+retinitis+pigmentosa%3A+A+pluripotent+stem+cell-based+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cell replacement in macular degeneration and retinitis pigmentosa: A pluripotent stem cell-based approach.</a> Prog Retin Eye Res. 71, 1-25 (2019).</li>
<li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+experimental+mouse+model+of+retinal+detachment%3A+Complete+functional+and+histologic+recovery+of+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">A novel experimental mouse model of retinal detachment: Complete functional and histologic recovery of the retina.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li>
<li>Matsumoto, H., Miller, J. W., Vavvas, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+detachment+model+in+rodents+by+subretinal+injection+of+sodium+hyaluronate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate.</a> J Vis Exp. 79, e50660(2013).</li>
<li>Timmers, A. M., Zhang, H., Squitieri, A., Gonzalez-Pola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subretinal+injections+in+rodent+eyes%3A+Effects+on+electrophysiology+and+histology+of+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Subretinal injections in rodent eyes: Effects on electrophysiology and histology of rat retina.</a> Mol Vis. 7, 131-137 (2001).</li>
<li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. 101, 672-681 (1994).</li>
<li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundus+autofluorescence+findings+in+a+mouse+model+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Fundus autofluorescence findings in a mouse model of retinal detachment.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li>
<li>Becker, S., Wang, H., Stoddard, G. J., Hartnett, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+subretinal+injection+on+retinal+structure+and+function+in+a+rat+oxygen-induced+retinopathy+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Effect of subretinal injection on retinal structure and function in a rat oxygen-induced retinopathy model.</a> Mol Vis. 23, 832-843 (2017).</li>
<li>Sene, A., Apte, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation-induced+photoreceptor+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammation-induced photoreceptor cell death.</a> Adv Exp Med Biol. 1074, 203-208 (2018).</li>
<li>Zhang, Z. Y., Sun, Y. J., Song, J. Y., Fan, B., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+and+examination+methods+of+retinal+detachment%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Experimental models and examination methods of retinal detachment.</a> Brain Res Bull. 169, 51-62 (2021).</li>
<li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am J Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li>
<li>Dentel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+optics+flood+illumination+ophthalmoscopy+in+nonhuman+primates%3A+Findings+in+normal+and+short-term+induced+detached+retinae%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Sci%22%5BJournal%5D)">Adaptive optics flood illumination ophthalmoscopy in nonhuman primates: Findings in normal and short-term induced detached retinae.</a> Ophthalmol Sci. 3 (4), 100316(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>アチペマゾール (Antidorm 4.27mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, France</td><td>/</td><td>Awakening</td></tr><tr><td>Chloramphenicol-retinol (Ophtalon 10mg/g)</td><td>TVM, Lempdes, France</td><td>FR/V/3787889 6/1989</td><td>Postoperative care</td></tr><tr><td>Cover slips Mini 8mm</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>/</td><td>https://www.wpiinc.com/var-1040-cover-slips-pkg-100.html?srsltid=AfmBOoraZfMhuUuY_7rQbM5YKfqM2VR1PT0L-UHQ5uQUdjaeZuogbKP1&utm_source=chatgpt.com</td></tr><tr><td>ヒドロキシプロピルメチルセルロース</td><td>FCI S.A.S., Paris, France</td><td>/</td><td>Viscous subretinal delivery</td></tr><tr><td>Ketamine (Ketamidor 100 mg/mL)</td><td>Axience SAS, Pantin, France</td><td>/</td><td>General anesthesia</td></tr><tr><td>Lumera 700</td><td>Carl Zeiss, Oberkochen,ドイツ</td><td>https://www.zeiss.com/meditec/en/products/surgical-microscopes/ophthalmic-microscopes/opmi-lumera-700.html?utm_source=chatgpt.com</td><td>眼科顕微鏡</td></tr><tr><td>メデトミジン (Domitor 0.85 mg/mL)</td><td>Vetoquinol S.A., Paris, France</td><td>https://www.vetoquinol.com/en</td><td>General anhesia</td></tr><tr><td>Microinjector Micro 4</td><td>World Precision Instruments, Sarasota, FL</td><td>SYS-MICRO4</td><td>Injection</td></tr><tr><td>オキシブプロカイン1.6 mg / 0.4 mL</td><td>Th&eacute;a, Clermont-Ferrand, France</td><td>https://www.laboratoires-thea.com/en/chlorhydrate-doxybuprocaine-thea?utm_source=chatgpt.com</td><td>Local anesthesia</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies Europe B.V., Bleiswijk, The Netherlands</td><td>14190-094</td><td>網膜下水送達</td></tr><tr><td>シリンジ (10 or 20 &micro;L)</td><td>Hamilton, Reno, NV</td><td>80300</td><td>Injection</td></tr><tr><td>Tear gel (Lubrithal)</td><td>Dechron, Shrewsbury, UK</td><td>https://www.dechra.ca/our-products/ca/companion-animal/dog/non-prescription/lubrithal?utm_source=chatgpt.com</td><td>角膜保護</td></tr><tr><td>Tropicamide (Mydriaticum 1 mg/mL)</td><td>Th&eacute;a, Clermont-Ferrand, France</td><td>/</td><td>瞳孔散大</td></tr></tbody></table>

ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化

Intraoperative Visualization of Subretinal Injection and Retinal Detachment in Rats

網膜下注射の成功は、網膜切開術を通じて網膜下空間(すなわち、光受容体とRPE層の間)への正確かつ排他的な送達に依存しており、血液は光受容体およびRPE細胞に有毒であるため、網膜下出血を回避します。成功した送達は、術中の視覚化 (図 2L)、術後直後の眼底写真、および光干渉断層撮影 (OCT) によって確認されます。眼底写真は網膜下出血を除外しますが、OCT Bスキャンは透明な網膜下液による網膜剥離(RD)を確認します(図1および図3)。さらに、眼底撮影では、処置中に気付かれない可能性のあるレンズの接触や誘発された白内障を特定できます(図3C、D)。写真撮影とOCTスキャンの両方で、剥離領域またはブレブのサイズを推定できます(図1B-E)。
ブレブのサイズにはいくつかの要因が影響します:(1)注入部位の位置:注入部位が視神経乳頭から離れているほど、剥離領域は小さくなります。(2)注入量:20〜25μLの注入量は、ラットの網膜の約半分を剥離することができます。(3)剥離した網膜の品質:網膜変性モデル(P23H、RCSなど)では、神経膠症や網膜下物質の蓄積などの変性過程によって引き起こされる光受容体とRPE細胞との間の抵抗の増加により、剥離が困難な場合があります。このような場合、誘発された網膜剥離は通常平坦であり、OCTスキャンは剥離領域を明確に描写するために重要です。
網膜微小血管を常に完全に回避できるとは限らないため、注射部位に軽度の硝子体内出血が発生する可能性があります(図3E)。しかし、このような出血は通常、網膜下腔には広がりません。
剥離が不十分な場合、問題は術中に認識する必要があり、事前に形成された網膜切開術による即時の再注入が必要です。20匹のラットを用いた実験セッションでは、2人の外科医(1人は経験者、1人は初心者)が段階的な方法を実行しました。経験豊富な外科医は10回中9回成功し、初心者は10回中6回成功しました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig1.jpg"> 
図1:プロセスと結果の概要(A)ラットの眼における網膜下注射プロセスの概略図で、レンズのかなりの体積を示しています。(B,C)注入直後(B)と注入後6日後(C)の眼底撮影。矢印は注入部位を示しています。網膜剥離領域は破線で輪郭が描かれています。(D,E)注入直後 (D) および注入後 6 日間 (E) の光干渉断層撮影 B-スキャン。ON:視神経。倍率:1倍 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig2.jpg"> 
図2:網膜下注射プロトコルの手順。 このプロトコルは、全身麻酔下で8週齢のLong Evansラットで実証されています。各手順の詳細については、ビデオまたはテキストの「プロトコル」セクションを参照してください。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67483/67483fig3.jpg"> 
図3:さまざまな術後眼底撮影結果の例(A)注射部位にわずかな色素分散を伴う正常な術後の外観(矢印)。(B) 注射部位に小さな硝子体内気泡がある正常な術後の外観。これらの小さな気泡は注射器から発生し、網膜下腔でも無害です。(C,D)軽度 (C) または重大な (D) レンズ混濁 (白内障) を引き起こすレンズ接触。(E,F)軽度 (E) またはより広範な (F) 硝子体内出血は、注射部位の近くに局在し、網膜下腔には広がりません。(G)注射部位の出血が主に網膜下腔に広がっている。この場合、網膜切開術は網膜血管の損傷を引き起こしました。(H)強膜浸透に起因する広範な硝子体内出血。.倍率:1倍 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67483/67483fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

Subretinal injection, the delivery of a solution between the photoreceptors and the retinal pigment epithelium (RPE), creates a subretinal space where ...

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JoVE Journal

Medicine

医学

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ラットにおける網膜下注射と網膜剥離の術中可視化

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