Name: がん免疫療法のためのmRNAを用いた一過性キメラ抗原受容体T細胞を作製するための非ウイルス性アプローチ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: 学ぶ非ウイルス性mRNA電気穿孔法による一過性CAR-T細胞作製法。がん免疫療法において、安全性とコスト効率に優れた細胞治療技術を確立し、細胞傷害活性評価手法も解説する。

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<table><tbody><tr><td>7-AAD生存率色素&nbsp;</td><td>Biolegend</td><td>420404</td><td></td></tr><tr><td>ACEA Novocyte Flow Cytometer</td><td>Agilent</td><td>NovoCyte 3000</td><td></td></tr><tr><td>AIM-V medium</td><td>Gibco</td><td>12055083</td><td></td></tr><tr><td>APC goat anti-human IgG F(ab')2 antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch Laboratories</td><td>109-136-097</td><td></td></tr><tr><td>BglII Restriction Enzyme</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>R0144L</td><td></td></tr><tr><td>3&acute;-O-Me-m7G(5')ppp(5')G RNAキャップ構造アナログNEB</td><td></td><td>S1411S</td><td></td></tr><tr><td>DMEM、高グルコース</td><td>Gibco</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads ヒトT活性剤CD3 / CD28ビーズ</td><td>Gibco</td><td>11131D</td><td></td></tr><tr><td>E-Plate 96</td><td>Agilent</td><td>5232376001</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma</td><td>459844-4L</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Lonza.com</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>HiScribe SP6 RNA 合成キット</td><td>New England BioLabs (NEB)</td><td>E2070S</td><td></td></tr><tr><td>ヒト IL-2 組換えタンパク質</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Millennium RNA Markers</td><td>Invitrogen</td><td>AM7150</td><td></td></tr><tr><td>Monarch RNA Cleanup Kit (500 &mu;g)</td><td>NEB</td><td>T2050L</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methylpseudo-UTP</td><td>Trilink</td><td>N-1081-10</td><td></td></tr><tr><td>ネオントランスフェクション装置</td><td>Invitrogen</td><td>MPK5000</td><td></td></tr><tr><td>ネオントランスフェクションシステム 100-&mu;L Kit</td><td>Invitrogen</td><td>MPK10096</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (10000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>14-503F</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 中程度</td><td>Gibco</td><td>11875135</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA (0.05%)、フェノールレッド</td><td>Gibco</td><td>25300120</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure フェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール (25:24:1, v/v)</td><td>Invitrogen</td><td>15593049</td><td></td></tr><tr><td>xCELLigenceリアルタイム細胞解析(RTCA)装置</td><td>Agilent</td><td>RTCA MP</td><td></td></tr><tr><td>ZymoPURE II プラスミド Midiprepキット</td><td>Zymo Research</td><td>D4201</td><td></td></tr></tbody></table>

がん免疫療法のためのmrnaを用いた一過性キメラ抗原受容体t細胞を作製するための非ウイルス性アプローチ

A Nonviral Approach to Generate Transient Chimeric Antigen Receptor T Cells Using mRNA for Cancer Immunotherapy

ヒト化抗HER2マウスモノクローナル抗体(mAb)4D547に由来するscFv、膜貫通領域、および細胞内4-1BB共刺激ドメインとそれに続くCD3ζ活性化ドメインを含む第2世代のHER2標的CARを構築しました(図1A)。CARをコードするDNA配列には、 in vitro でCARのmRNAの転写を促進する5' SP6プロモーターが含まれていました(図1B)。CAR mRNAの長さは約2 kbで、これはゲル電気泳動によって検証されました(図1C)。
次に、CAR mRNAを、上記の手順に従ってエレクトロポレーションにより活性化T細胞にトランスフェクションしました。エレクトロポレーションの1日後、細胞の50%以上がCARを発現したのに対し、mRNAなしでエレクトロポレーションしたコントロールT細胞はCAR陰性でした(<strong clas...

がん免疫療法のためのmRNAを用いた一過性キメラ抗原受容体T細胞を作製するための非ウイルス性アプローチ

Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has emerged as a pioneering cancer treatment, achieving unprecedented success in treating certain ...

a-nonviral-approach-to-generate-transient-chimeric-antigen-receptor-t

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がん研究

このビデオは、キメラ抗原受容体(CAR)T細胞をex...

キメラ抗原受容体T細胞を作製するex vivo技術

このビデオは、腫瘍抗原特異的キメラ抗原受容体(CAR)T細胞のex...

腫瘍特異的キメラ抗原受容体T細胞を作製するためのex vivo技術

このビデオでは、レトロウイルス形質導入により抗原特異的なキメラ抗原受容体(CAR)T細胞を作製する技術を紹介しています。活性化マウスCD8+...

抗原特異的CAR-T細胞の作製技術

単一のセル対人間 TCR アルファとベータ鎖シーケンスで現在のプロトコル結合合理化レトロウイルスベクターの in vitroとin vivoの TCR...

合理化単細胞 TCR 分離し体外の Retroviral ベクトルの生成、人間 Tcr の生体内で発現

キメラ抗原受容体(CAR)T細胞を確実に生成し、その分化と機能をインビトロとインビボでテストするアプローチについて説明します。...

キメラ抗原受容体(CAR)T細胞の養子免疫療法用

このプロトコールは、臨床的に利用可能なプラットフォームを用いて 、インビボで...

[18F]テトラフルオロホウ酸陽電子放射断層撮影/コンピュータ断層撮影によるキメラ抗原受容体T細胞の動的イメージング

本稿では、臨床用のキメラ抗原受容体T細胞の製造プロセス、特にT細胞のウイルス形質導入および培養を行うことができる自動細胞プロセッサーの使用について詳述する。私たちは、初期段階の臨床試験のプロセス開発と実施中に考慮すべき推奨事項を提供し、落とし穴について説明します。...

自動セルプロセッサーでのキメラ抗原受容体T細胞製造

このプロトコルは、レトロウイルスベクターの生産とマウスT細胞の形質導入を合理化し、マウスCAR-T細胞の効率的な生成を促進します。...

マウスキメラ抗原受容体(CAR)-T細胞の効率的な作製

このプロトコールは、ヒトキメラ抗原受容体制御性T細胞(CAR制御性T細胞)を生成および試験するための合理化されたワークフローを提供します。...

ヒトキメラ抗原受容体制御性T細胞の作製

CRISPR/Cas9技術を使用して、相同性終末結合(HMEJ)DNA修復経路 を介して...

大規模DNAテンプレートの相同性を介した末端結合標的統合 による 初代ヒトT細胞の非ウイルス工学

このプロトコルは、一次T細胞の培養に必要な手順、すなわち単離、活性化、増殖、そしてmRNA電気穿孔による一時的なトランスフェクションを説明しています。さらに、表現型、活性化マーカー、生存可能性、キメラ抗原受容体(CAR)発現のフローサイトメトリー解析のためのワークフローおよび抗体パネルも提案されています。...

一次ヒトT細胞の分離、培養、そして一時的なトランスフェクションによるキメラ抗原受容体(CAR)T細胞の生成

学ぶ非ウイルス性mRNA電気穿孔法による一過性CAR-T細胞作製法。がん免疫療法において、安全性とコスト効率に優れた細胞治療技術を確立し、細胞傷害活性評価手法も解説する。

がん免疫療法のためのmRNAを用いた一過性キメラ抗原受容体T細胞を作製するための非ウイルス性アプローチ

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