Name: 脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: 学ぶ脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植の標準化プロトコル。スケーラブルで再現性のある方法で、器官バイオエンジニアリング研究を加速します。

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<table><tbody><tr><td>脱細胞化</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 インチBD PrecisionGlide Needle</td><td>BD</td><td>305109</td><td>または同等品 27 G 注射針</td></tr><tr><td>BD Insyte IV カテーテル 20 GA X 1.8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>または同等品 20 G IV カテーテル</td></tr><tr><td>ブレードシルク縫合糸 (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>または同等品</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>ラット頸静脈用カテーテル、PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>体重30g以下のマウスにおすすめです。</td></tr><tr><td>ラット頸静脈用カテーテル、PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td>体重が<td>30gを超えるマウスに推奨されます。</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>ピンポート インジェクター</td><td>インステック</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>ピンポート、22 G</td><td>インステック</td><td>PNP3F22-50</td><td>C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>ピンポートに適合、25 G</td><td>インステック</td><td>PNP3F25-50</td><td>C20PU-MJV1301に適合</td></tr><tr><td>デオキシコール酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>滅菌シリンジ、5 mL</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>CELL CULTURE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 内皮細胞増殖培地-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC &ndash;ヒト臍帯静脈内皮細胞</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>灌流ベースのバイオリアクター</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 G 針</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3 ウェイ活栓</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>コルクボーラー</td><td>ジェネリック</td><td></td>ボー<td>リングサイズ、6-10 mm</td></tr><tr><td>EasyLoad III ポンプヘッド</td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>ガラスキャニスター</td><td>ハリオ</td><td>SCN-200T</td><td>内径: 80 mm</td></tr><tr><td>加熱マグネチック スターラー</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ルアー フィッティング、PVDF、ソフト チューブ用</td><td>ノードソン メディカル</td><td>2-9965-01</td><td>メス、内径 1.5 mm (L/S 14) のチューブに適合</td></tr>)<tr><td>ルアー フィッティング、PVDF、ソフト チューブ用</td><td>ノードソン メディカル</td><td>2-9964-01</td><td>オス、内径 1.5 mm (L/S 14) のチューブに適合)</td></tr><tr><td>ルアー フィッティング、PVDF、ソフト チューブ用</td><td>ノードソン メディカル</td><td>2-9965-03</td><td>メス、内径 3 mm (L/S 16) のチューブに適合ル</td></tr><tr><td>アー フィッティング、PVDF、ソフト チューブ用</td>ノード<td>ソン メディカル</td><td>2-9964-03</td><td>オス、内径 3 mm (L/S 16) のチューブに適合磁</td></tr><tr><td>気撹拌バー</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S リモート I/O およびベンチトップ コントローラー付きデジタル精密モジュラー ドライブ</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S 精密ポンプ チューブ、PharMed BPT、L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Pricision ポンプ チューブ、プラチナ硬化シリコン、L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP シリンジ フィルター ユニット、0.22 &m、ポリエーテルスルホン、33 mm、ガンマ線滅菌</td>ミ<td>リポア</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr>パイ<tr><td>レックス 250 mL グラスボトル、GL-45 スクリューキャップ</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>GL45 オープントップ用シリコンセプタム PBT スクリューキャップ</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>シリコンライトストッパー</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>上径:87 mm、下径:75 mm</td></tr> 滅<tr><td>菌シリンジ、10 mL、50 mL</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マウス手術 (心肺ブロックの分離 |肺移植)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 ナイロンタイ</td><td>河野製作所</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 シルクタイ</td><td>河野製作所</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 シルクタイ</td><td>河野製作所</td><td>N/A</td><td></td></tr> 動脈<tr><td>クランプ、45 mm 湾曲、溝付き</td>夏<td>目製作所</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV カテーテル 24GA</td><td>BD 381512</td><td></td><td>または同等の 24G i.v. カテーテル</td></tr><tr><td>ブルドッグ血管鉗子 45mm 湾曲した</td><td>夏目製剤</td><td>M2</td><td></td></tr> 酒<tr><td>石酸ブトルファノール&nbsp;</td><td>明治精化製薬</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>セファゾリンナトリウム</td><td>大塚製薬</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子 #5/45</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>ファイン</td><td>サイ</td>エンスツール <td>15403-08</td><td>45度、先端、0.01×0.06mm</td></tr>ジェ<tr><td>ミニ焼灼キット</td><td>ハーバード装置</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito クランプ 湾曲した先端、125 mm</td><td>バイオリサーチ センター</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>Hegar ニードルホルダー、150 mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン溶液</td><td>持田製薬</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>メデトミジン</td><td>日本善業工業</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ鉗子ストレート</td><td>B ブラウン/エスキュラップ</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>ミダゾラム</td><td>サンド</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>マウス人工呼吸器</td>ハー<td>バード</td>装置<td>モデル 687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>生理食塩水、臨床グレード</td><td>大塚製薬</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿、60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU 20ゲージポリウレタンカテーテル</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>榊ステンレスハサミ 湾曲 14 cm</td><td>バイオリサーチセンター</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>メスホルダー</td><td>バイオリサーチセンター</td><td>16101040</td><td></td></tr><tr><td>小動物の引き込みシステム</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>スペアブレードメス #11</td><td>村中医療機器</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>スプリングハサミ、15cm</td><td>バイオリサーチセンター</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカマイクロシステム</td>ズ <td>M525</td><td>フレキシブルアームシステムを備えた臨床グレードの手術用顕微鏡が望ましいです。</td></tr><tr><td>杉田チタン動脈瘤クリップ カーブスリム No.98</td><td>みずほメディカル</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>杉田チタンクリップアプライヤー 110mm</td><td>みずほメディカル</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>温度調節可能な電気ウォーマー</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ウルトラファ</td>イン綿棒 <td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>血管・気管支カフ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ファインサンドペーパー</td><td>ジェネリック</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 ゲージ テフロン血管カテーテル</td><td>トップ</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 ゲージ テフロン血管カテーテル</td><td>トップ</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 ゲージ テフロン血管カテーテル</td><td>トップ</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

脱細胞化プロトコルに従うと、マウスの肺は目に見えて白く半透明になります(図6A)。細胞成分は完全に除去されるべきですが、組織学的観察では肺胞構造は無傷のままです(図6B、C)。3 × 107 HUVECと2日間の灌流ベースのバイオリアクター培養を用いた再細胞化マウス肺は、HUVECの均一な分布を示しています(図7A)。HUVECは末梢歯槽領域に移動し、毛細血管網を形成します(図7B)。同所性移植とバイオエンジニアリング肺の再灌流後、赤血球を含む血流がバイオエンジニアリング肺で均一に観察されます(図8A、B)。
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Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

私たちは、脱細胞肺癌細胞外マトリックスと機能的な肺組織を生成するために使用することができる新規バイオミメティックバイオリアクターを開発している。バイオリアクターにおけるマトリックスと培養に細胞を播種することにより、我々は短期間のためのin...

肺のエンジニアリングのための手順

全臓器の脱細胞化は、再生医療に使用できる可能性のある天然の生物学的足場を生成します。肺全体の細胞が脱細胞化され、血管循環と液体媒体の換気を促進するバイオリアクターで成体幹細胞と内皮細胞が播種される肺再生の非ヒト霊長類モデルの説明が提示されます。...

非ヒト霊長類の肺脱細胞化と特殊大型臓器バイオリアクターを用いた再細胞化

組織工学心臓弁における新組織形成および狭窄の開発の基礎となる細胞および分子メカニズムを理解するためには、異所性心臓弁移植のマウスモデルを開発した。肺動脈心臓弁は異所心臓移植技術を用いてレシピエントに移植した。...

異心臓移植のマウスモデルを用いた肺動脈弁の移植

&gt;jove_content&lt;局所的な血管新生を刺激する臓器特異的微小環境の再現は、損傷した組織の正常な再生に不可欠です。本報告は、成体マウスにおいて、肺特異的微小環境が血管新生と肺胞再生をどのように調節するかを探るために、生きたマウスの肺表面にフィブリンゲルを移植する新しい方法を示すものである。...

肺特異的血管形成を研究するためにマウスの肺にフィブリンゲルの移植

ここでは、二重播種部分的人工多能性幹細胞がマウスにグラフトするための機能的な組織工学血管移植片を生成するためのプロトコルを提示する（PiPSC）は - 脱細胞化血管足場バイオリアクターに由来内皮細胞 - 平滑筋細胞およびPiPSC由来。...

マウスモデルにおける組織工学血管の生成とグラフト

このプロトコルは、効率的に気道上皮細胞を成熟するために、マウスの胚性幹細胞由来の胚体内胚葉を指示します。この分化技術は、定義された、無血清培養の設定において、肺系統の仕様を指示するために3次元の脱細胞化肺足場を使用します。...

脱細胞肺足場を使用してESC由来のマウス気道上皮細胞の生成

このプロトコールは、脱細胞化された精密切断肺スライスに肺胞上皮2型細胞、線維芽細胞、および内皮細胞を再移入することによって、再現性のある小規模の操作された肺組織を生成する方法を記載している。...

脱細胞化肺スライスから調製された人工肺組織

この記事では、新生児マウスから初代肺内皮細胞を単離し、培養しました。...

初代マウス肺内皮細胞の単離

ここに提示されるのは、局所脱細胞化肺組織の単離のためのプロトコルである。このプロトコルは、細胞外マトリックスおよび細胞-マトリックス相互作用の複雑さを研究するための強力なツールを提供します。...

領域特異的脱細胞化肺組織の解剖と単離

ここでは、移植したマウスの左肺を2光子顕微鏡で生体内イメージングするプロトコールを紹介します。これは、マウス肺移植後の細胞動態と相互作用をリアルタイムで研究するための貴重なツールです。...

移植されたマウス肺の生体内2光子顕微鏡検査

学ぶ脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植の標準化プロトコル。スケーラブルで再現性のある方法で、器官バイオエンジニアリング研究を加速します。

脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植

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