犬の鼻免疫微小環境のサンプリングのための生理食塩水洗浄液

放射線療法に関連する免疫応答と鼻腫瘍の犬を研究しています。私たちは、免疫系を調節することで、放射線療法に対するがん患者の転帰をどのように改善できるかを理解しようとしています。免疫微小環境の変化は、治療効果を研究する上で重要になる可能性があります。したがって、微小環境の細胞を連続的に分析することが望まれます。ただし、複雑な解剖学的構造と粘膜の出血傾向により、生検を繰り返して鼻腔の組織をサンプリングすることは困難な場合があります。

生理食塩水鼻洗浄技術により、組織の破壊を最小限に抑えながら、鼻腔の免疫微小環境を連続的にサンプリングすることができます。鼻洗浄技術で収集された細胞とタンパク質は、さまざまなアッセイで分析して、鼻の免疫微小環境の状態を経時的に調査できます。

処置の1日前に、520ミリリットルの注射器に滅菌生理食塩水を入れます。注射器にしっかりと蓋をし、摂氏 37 度のインキュベーターに入れて一晩温めます。次に、麻酔をかけた犬の外部リカンベントを治療台に置きます。犬の頭をテーブルの端から自然かつ快適に下向きに傾けるように調整し、最適な鼻洗浄サンプルの採取を容易にします。気管内チューブのカフを膨らませて、気道をしっかりと密閉します。鼻洗浄の場合は、温かい生理食塩水を含むプレフィルド20ミリリットルの注射器の1つにぴったりとフィットするように、基部で8つのフレンチ滅菌赤色ゴムカテーテルを切断します。油性マーカーを使用して、カテーテルの基端に印を付け、鼻孔の入り口の開始点を示します。所定の長さが鼻腔内にまたがり、先端が目的の位置に配置されていることを確認します。次に、定義された鼻腔内カテーテルの長さに合わせてカテーテルの先端を切断し、鼻腔内の適切な位置に着地するようにします。鼻洗浄手順を実行するには、カテーテルを鼻腔に供給して投与する人が 1 人、鼻から出るときにサンプルを採取する人がもう 1 人を指定します。手袋を着用して、犬の頭の前と下に1人を配置します。カテーテルのマークが鼻孔の入り口と揃うまで、赤いゴム製カテーテルを鼻腔の内側にそっと導きます。同時に、もう一人は、カテーテルを所定の位置に置いた状態で、鼻孔の下に50ミリリットルの円錐形のチューブを持ちます。片手を使って、反対側の鼻孔をそっと塞ぎます。犬の頭を下向きの角度に保ちながら、ゆっくりと安定した圧力で、またはパルス注入で生理食塩水を鼻腔に注入し始めます。鼻孔の下に配置された50ミリリットルの円錐形のチューブに排出液を集めます。処置後、犬を頭を下に向けて外側に横たわったまま、犬が麻酔から回復するまで待ちます。次に、注入された生理食塩水の総量に対して、収集された鼻洗浄液の総量を記録します。サンプルを処理するには、円錐形のチューブ内で鼻洗浄サンプルを穏やかにボルテックスまたはピペットで移動させ、破片や細胞の塊を砕きます。プールされたサンプルを70マイクロメートルのセルフィルターに通し、粘液中の大きな破片を除去します。ろ過したサンプルを300 Gで5〜10分間遠心分離して、細胞ペレットを形成します。ピペットを使用して、遠心分離機サンプルから上清を慎重に吸引します。上清をクリーンなチューブに沈着させ、その後のタンパク質分析を行います。最後に、細胞ペレットをPBSまたは目的の細胞アッセイ用の好ましい溶液に再懸濁します。