Name: 解剖された幼生ゼブラフィッシュの神経筋接合部におけるシナプス小胞のリサイクルのライブイメージング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 学ぶpHluorinベースの蛍光イメージング法で、幼生ゼブラフィッシュの神経筋接合部におけるシナプス小胞の動態を可視化する。コスト効率の高いこの手法は、シナプス伝達の分子メカニズム解明に有用である。

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<ol><li>Sudhof, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+synaptic+vesicle+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The synaptic vesicle cycle.</a> Ann Rev Neurosci. 27, 509-547 (2004).</li>
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<li>Egashira, Y., Takase, M., Takamori, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+vacuolar-type+h%2B+atpase-mediated+proton+influx+into+synaptic+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Monitoring of vacuolar-type h+ atpase-mediated proton influx into synaptic vesicles.</a> J Neurosci. 35 (8), 3701-3710 (2015).</li>
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<li>Balaji, J., Ryan, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-vesicle+imaging+reveals+that+synaptic+vesicle+exocytosis+and+endocytosis+are+coupled+by+a+single+stochastic+mode%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Single-vesicle imaging reveals that synaptic vesicle exocytosis and endocytosis are coupled by a single stochastic mode.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (51), 20576-20581 (2007).</li>
<li>Santos, M. S., Park, C. K., Foss, S. M., Li, H., Voglmaier, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+of+the+vesicular+gaba+transporter+to+functional+vesicle+pools+by+an+atypical+dileucine-like+motif%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sorting of the vesicular gaba transporter to functional vesicle pools by an atypical dileucine-like motif.</a> J Neurosci. 33 (26), 10634-10646 (2013).</li>
<li>Wen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synchronous+and+asynchronous+modes+of+synaptic+transmission+utilize+different+calcium+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Synchronous and asynchronous modes of synaptic transmission utilize different calcium sources.</a> Elife. 2, e01206(2013).</li>
<li>Wen, H., Hubbard, J. M., Wang, W. C., Brehm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatigue+in+rapsyn-deficient+zebrafish+reflects+defective+transmitter+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fatigue in rapsyn-deficient zebrafish reflects defective transmitter release.</a> J Neurosci. 36 (42), 10870-10882 (2016).</li>
<li>Wyatt, R. M., Balice-Gordon, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+in+synaptic+vesicle+release+at+neuromuscular+synapses+of+mice+expressing+synaptophluorin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity in synaptic vesicle release at neuromuscular synapses of mice expressing synaptophluorin.</a> J Neurosci. 28 (1), 325-335 (2008).</li>
<li>Tabares, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+synaptic+function+at+the+neuromuscular+junction+of+a+mouse+expressing+synaptophluorin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Monitoring synaptic function at the neuromuscular junction of a mouse expressing synaptophluorin.</a> J Neurosci. 27 (20), 5422-5430 (2007).</li>
<li>Odermatt, B., Nikolaev, A., Lagnado, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+of+luminance+and+contrast+by+linear+and+nonlinear+synapses+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Encoding of luminance and contrast by linear and nonlinear synapses in the retina.</a> Neuron. 73 (4), 758-773 (2012).</li>
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<li>Vaithianathan, T., Henry, D., Akmentin, W., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+dynamics+of+synaptic+vesicle+trafficking+and+fusion+at+the+presynaptic+active+zone%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Nanoscale dynamics of synaptic vesicle trafficking and fusion at the presynaptic active zone.</a> eLife. 5, e13245(2016).</li>
<li>Vaithianathan, T., Wollmuth, L. P., Henry, D., Zenisek, D., Matthews, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+newly+released+synaptic+vesicle+proteins+at+ribbon+active+zones%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Tracking newly released synaptic vesicle proteins at ribbon active zones.</a> iScience. 17, 10-23 (2019).</li>
<li>Shrestha, A. P., Vaithianathan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+the+dynamics+of+single+fused+synaptic+vesicle+proteins+from+a+single+ribbon+active+zone+in+zebrafish+retinal+bipolar+cells%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Tracking the dynamics of single fused synaptic vesicle proteins from a single ribbon active zone in zebrafish retinal bipolar cells.</a> STAR Protoc. 3 (1), 101107(2022).</li>
<li>Egashira, Y., Zempo, B., Sakata, S., Ono, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+neuromuscular+junction+research+prompted+by+the+zebrafish+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opinion+Physiol%22%5BJournal%5D)">Recent advances in neuromuscular junction research prompted by the zebrafish model.</a> Curr Opinion Physiol. 4, 70-75 (2018).</li>
<li>Egashira, Y., Kumade, A., Ojida, A., Ono, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneously+recycling+synaptic+vesicles+constitute+readily+releasable+vesicles+in+intact+neuromuscular+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spontaneously recycling synaptic vesicles constitute readily releasable vesicles in intact neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 42 (17), 3523-3536 (2022).</li>
<li>Weng, W., Li, D., Peng, C., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recording+synaptic+plasticity+in+acute+hippocampal+slices+maintained+in+a+small-volume+recycling-%2C+perfusion-%2C+and+submersion-type+chamber+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Recording synaptic plasticity in acute hippocampal slices maintained in a small-volume recycling-, perfusion-, and submersion-type chamber system.</a> J Vis Exp. (131), e55936(2018).</li>
<li>Myers, P. Z., Eisen, J. S., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+axonal+outgrowth+of+identified+motoneurons+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development and axonal outgrowth of identified motoneurons in the zebrafish.</a> J Neurosci. 6 (8), 2278-2289 (1986).</li>
<li>Westerfield, M., Mcmurray, J. V., Eisen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identified+motoneurons+and+their+innervation+of+axial+muscles+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Identified motoneurons and their innervation of axial muscles in the zebrafish.</a> J Neurosci. 6 (8), 2267-2277 (1986).</li>
<li>Brehm, P., Wen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+neuromuscular+junction%3A+The+power+of+n%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Zebrafish neuromuscular junction: The power of n.</a> Neurosci Lett. 713, 134503(2019).</li>
<li>Ben Fredj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+activity+and+activity-dependent+competition+regulates+axon+arbor+maturation%2C+growth+arrest%2C+and+territory+in+the+retinotectal+projection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic activity and activity-dependent competition regulates axon arbor maturation, growth arrest, and territory in the retinotectal projection.</a> J Neurosci. 30 (32), 10939-10951 (2010).</li>
<li>Mandal, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retrograde+mitochondrial+transport+is+essential+for+organelle+distribution+and+health+in+zebrafish+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Retrograde mitochondrial transport is essential for organelle distribution and health in zebrafish neurons.</a> J Neurosci. 41 (7), 1371-1392 (2021).</li>
<li>Wong, H. C., Drerup, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+fluorescent+indicators+for+in+vivo+quantification+of+spontaneous+or+evoked+motor+neuron+presynaptic+activity+in+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Using fluorescent indicators for in vivo quantification of spontaneous or evoked motor neuron presynaptic activity in transgenic zebrafish.</a> STAR Protoc. 3 (4), 101766(2022).</li>
<li>Truckenbrodt, S., Rizzoli, S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+vesicle+recycling+in+the+synaptic+bouton%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spontaneous vesicle recycling in the synaptic bouton.</a> Front Cell Neurosci. 8, 409(2014).</li>
<li>Casey, J. R., Grinstein, S., Orlowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensors+and+regulators+of+intracellular+ph%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sensors and regulators of intracellular ph.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 11 (1), 50-61 (2010).</li>
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<table><tbody><tr><td>40倍水浸対物レンズ</td><td>オリンパス</td><td>LUMPLFLN40XW</td><td></td></tr><tr><td>4ch 重力流灌流システム</td><td>ALA</td><td>VCPlus-4G</td><td></td></tr><tr><td>5倍対物レンズ</td><td>オリンパス</td><td>NPLN5X</td><td></td></tr><tr><td>カスタムメイド イメージングチャンバー</td><td>フィジオテック</td><td>カスタムメイド</td><td>ブラックアクリル板(直径10.7cm、厚さ3mm)にウェル(底部径1cm、上部径1.5cm)を収納約0.5mlの灌流液。</td></tr><tr><td>デジタルI/Oデバイス</td><td>Arduino</td><td>Uno Rev3</td><td></td></tr><tr><td>D-ツボクラリン二塩化物 五水和物</td><td>Sigma</td><td>93750</td><td></td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td>Microsoft Office Professional Plus 2016</td><td></td></tr><tr><td>フィジー / imageJ</td><td>https://imagej.net/</td> <td>imageJ 1.54f</td><td></td></tr><tr><td>細い鉗子</td><td>AsOne</td><td>7-562-05 (Dumont #5)</td><td></td></tr><tr><td>ガラス パスツールピペット</td><td>いわき</td><td>IK-PAS-5P</td><td>先端はトリミングし、最終直径が1.5°1.5°ndashになるまでファイヤーポリッシュする必要があります。2 mm.&nbsp;</td></tr><tr><td>ガラスシャーレ</td><td>AsOne</td><td>1-4564-06</td><td></td></tr><tr><td>Igor Pro</td><td>WaveMetrics</td><td>Ver. 6.37</td><td></td></tr><tr><td>インラインソリューションヒーター</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>SF-28</td><td></td></tr><tr><td>LED照明システム</td><td>X-cyte</td><td>XYLIS</td><td></td></tr><tr><td>メチレンブルー</td><td>和光</td><td>133-06962</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Manager</td><td>https://micro-manager.org/</td> <td>Ver.2.0.0</td><td></td></tr><tr><td>灌流管用ミニ磁気クランプ</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>64-1553</td><td></td></tr>電動<tr><td>マイクロマニピュ</td><td>レーターScientifica</td><td>PatchStar</td><td></td></tr><tr><td>電動可動サンプルプレート</td><td>Scientifica</td><td>MMSP</td><td></td></tr><tr><td>ピペットホルダー</td><td>成茂</td><td>H-13</td><td></td></tr><tr><td>ピペットプーラー</td><td>成茂</td><td>PC-100</td><td></td></tr><tr><td>プラチナ線(&phi;0.1mm)</td><td>Nilaco</td><td>PT-351165</td><td></td></tr><tr><td>プラチナ線(&phi;0.5 mm)</td><td>Niaco</td><td>PT-351381</td><td></td></tr><tr><td>Scalpel</td><td>AsOne</td><td>8-3086-02 (Feather #11)</td><td></td></tr><tr><td>Scientific cMOS camera</td><td>Thorlabs</td><td>CC215MU</td><td></td></tr><tr><td>Sea salt</td><td>NAPQO</td><td>Instant Ocean</td><td></td></tr><tr><td>Stereo microscope</td><td>Olympus</td><td>SZX7</td><td></td></tr><tr><td>Stimulus</td><td>isolater AMPI</td><td>ISO-FLEX</td><td></td></tr><tr><td>吸引チューブ</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>ST-3、64-1406</td><td></td></tr><tr><td>温度コントローラー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>TC-324C</td><td></td></tr><tr><td>シータガラスキャピラリー</td><td>サッターインストゥルメント</td><td>BT-150-10</td><td></td></tr><tr><td>トリカイン(MS-222)</td><td>TCI</td><td>T0941</td><td></td></tr><tr><td>直立顕微鏡</td>オ<td>リンパス</td><td>BX51WI</td><td></td></tr></tbody></table>

解剖された幼生ゼブラフィッシュの神経筋接合部におけるシナプス小胞のリサイクルのライブイメージング

Live Imaging of Synaptic Vesicle Recycling in the Neuromuscular Junction of Dissected Larval Zebrafish

解剖したサンプルが深刻な組織損傷なしに調製され、刺激電極が脊髄に適切に挿入されている場合、高周波電気刺激によって強力なpHluorin応答を誘発できます(図4D、E)。刺激前のベースライン蛍光は、シナプス前部の表面に存在するプローブによるものであった可能性が高い。刺激中の蛍光の増加は、プローブの表面へのエキソサイトーシス放出を反映しています。その後の崩壊は、プローブ含有SVのエンドサイトーシスと再酸性化を反映しています。pHluorinベースのプローブのこれらの特性は、さまざまな実験設定10、11、12、13、14、15、<sup ...

Neuronal communication is mediated by synaptic transmission, which depends primarily on the release of neurotransmitters stored in synaptic vesicles (SVs) ...

私たちは、ゼブラフィッシュの幼生の神経筋接合部をモデルシステムとして、シナプス伝達の分子的および細胞的メカニズムを研究しています。私たちは、様々な生理学的・病理学的条件に対するシナプスの調節調節を明らかにすることに興味を持っています。このプロトコルにより、ゼブラフィッシュの幼生の神経筋接合部における活動電位誘発性の新たな伝達を、感度を向上させて可視化することができます。中程度の刺激によって誘発されるシナプス機能をモニターすることができますが、これはこれまで検証されたことがありません。このイメージングプロトコルは、従来の落射蛍光顕微鏡で実施でき、必ずしも共焦点レーザー走査型顕微鏡は必要ありません。言い換えれば、この方法は、他の実験装置と比較して、神経筋機能をイメージングするための費用対効果の高いプラットフォームを提供します。200ミリリットルの細胞外溶液を調製するには、6.4ミリリットルの3.5モル塩化ナトリウム、0.4ミリリットルの1モル塩化カリウム、1ミリリットルの1モルHEPES、0.4ミリリットルの1モル塩化カルシウム、0.2ミリリットルの1モル塩化マグネシウム、および360ミリグラムのグルコースを混合します。次に、超純水を加えて総容量を200ミリリットルにします。20マイクロリットルの15ミリモルD-ツボクラリンストック溶液を添加して、3マイクロモルのD-ツボクラリンを含む100ミリリットルの細胞外溶液を調製します。0.02%トリカインを含む25ミリリットルの細胞外溶液を調製するには、0.5ミリリットルの1%トリカイン原液を25ミリリットルの溶液に加えます。マイクロピペットプーラーを使用して、先端の直径が3〜10マイクロメートルの範囲に収まるまでシータガラスキャピラリーを引っ張ります。ピペットに細胞外溶液を入れます。キャピラリーの各開口部に細い白金線を挿入し、シータガラスピペット電極を電動マイクロマニピュレーターのピペットホルダーに保持します。次に、各ワイヤの後端を刺激アイソレータに接続します。0.02%トリカインを含む25ミリリットルの細胞外溶液をガラスのペトリ皿に入れるには、ゼブラフィッシュの幼虫をペトリ皿に移して解剖します。.2つの細い鉗子を使用して、幼虫の皮膚をはがします。最初の鉗子を使用して幼虫を所定の位置に保持し、他の鉗子で水泳膀胱の背側の皮膚をつまみます。次に、メスを使用して、水泳用膀胱、内臓、および頭を取り出します。先端がファイヤーポリッシュ仕上げのガラス製パスツールピペットを使用して、解剖したゼブラフィッシュのサンプルをイメージングチャンバーに移します。C字型のプラチナワイヤーに接着されたナイロン糸でサンプルを機械的に固定し、刺激電極とほぼ平行な角度でサンプルを向けます。重力流システムを使用して、毎分1ミリリットルの速度でサンプルを灌流し、3マイクロモルのD-ツボクラリンを含む細胞外溶液を使用します。次に、刺激電極を脊髄に挿入します。脊髄の腹側に位置するTagRFP陽性ニューロンとして識別される脊髄運動ニューロンの近くに電極先端を慎重に配置します。隣接するセグメントから目標位置まで電極を斜めに進めます。コンピュータで開始するには、TagRFP蛍光のライブ画像に基づいてイメージング領域を選択します。選択した領域に複数のボタンが含まれ、ボディ セグメント境界付近のブートンが除外されていることを確認します。イメージング用の蛍光フィルターユニットGFPフッ素蛍光を切り替えます。次に、光源の強度を調整して、飽和のない1ヘルツのタイムラプスモードで明るい画像を取得します。micromanager ウィンドウの exposure ミリ秒 フィールドに、露出時間を 100 に入力します。画像取得ソフトウェアとデジタル入力出力デバイスを設定して、画像取得を電気刺激と同期させます。次に、Arduinoスクリプトで、画像取得の開始から刺激配信までの刺激周波数、活動電位の数、および時間遅延を決定します。これらの設定に基づいて、取得に必要な画像の総数を計算し、この値をMicroManagerの多次元取得ウィンドウのカウントフィールドに入力します。1ヘルツのタイムラプス撮影の間隔フィールドに1秒間隔を設定します。電気刺激の場合は、70 mV の 1 ミリ秒の定電圧パルスを送達するように刺激アイソレータを構成します。デジタイザコマンドを実行して、画像取得を開始します。プロセスをモニタリングして、許容できない画像ドリフトがないこと、およびフッ素と応答が観察できることを確認します。パルス数の周波数など、刺激強度を変更したり、実験目的に基づいて温度を調整したりします。タイムラプス画像をTIFF時系列スタックとして保存します。シグナル増加の大きいシナプスを解析用に選択しましたが、すべてのブートンは20ヘルツ100の活動電位条件で検出可能な変化を示しましたが、高周波電気刺激では堅牢なフッ素応答が観察され、刺激中のエキソサイトーシスとその後の崩壊を示す蛍光変化は、エンドサイトーシスとシナプス小胞の再酸性化を反映しています。蛍光減衰時定数は、刺激、強度、温度によって異なり、20ヘルツの25の活動電位は16.6秒、20ヘルツの100の活動電位は56.8秒、50ヘルツの500の活動電位は62.7秒で示されました。

live-imaging-synaptic-vesicle-recycling-neuromuscular-junction

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

このプロトコルは、ゼブラフィッシュ胚の生体内で個々の神経細胞や神経堤細胞のイメージングを説明します。このメソッドは、蛍光共焦点タイムラプス顕微鏡を使用して細胞の行動とアクチンの局在を調べるために使用されます。...

細胞運動やゼブラフィッシュ胚における個々の神経細胞と神経堤細胞のアクチン細胞骨格のライブイメージング

このプロトコルではのライブ解剖について説明...

ショウジョウバエ幼虫分節軸索内ではシナプス小胞の in vivo可視化で

幼虫ゼブラフィッシュは、脊髄運動ニューロンとターゲット骨格筋からの同時パッチクランプ記録を可能にした最初の脊椎動物のモデルシステムを表す。このビデオでは、分節キャップ運動ニューロンと標的筋細胞と同様に各セルのタイプから録音するための方法論を識別するために使用される微細な方法を示しています。...

モーターニューロンとターゲットゼブラフィッシュの骨格筋からの対のパッチクランプ記録

で、アクティブなゾーンの解剖とイメージングショウジョウバエ神経筋接合部

シンプルなマイクロ流体デバイスは、麻酔薬を無料で行うために開発されました...

のためのシンプルなマイクロ流体デバイス<em生体内で&gt;</emの&gt;イメージング<em&gt; Cエレガンス</em&gt;<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;とゼブラフィッシュ

このビデオは、チャネルロドプシンを発現するショウジョウバエの幼虫の神経筋接合部でのシナプス小胞のリサイクルを蛍光色素を使用して研究するプロトコルを示しています。青色光はチャネルロドプシンを活性化し、カルシウムの流入とシナプス小胞のエキソサイトーシスを引き起こします。この色素は神経膜に組み込まれ、エンドサイトーシス中に内在化されるため、蛍光が増強されます。さらにブルーライト刺激を受けると、エキソサイトーシスと色素の放出が誘発され、これは蛍光の減少によって示されます。...

ショウジョウバエ幼虫におけるシナプス小胞のリサイクルと蛍光色素の取り込みの解析

出典:Schramm, P. et al.頭蓋骨および皮膚の除去による覚醒したゼブラフィッシュの幼虫および幼魚の完全活性脳組織のin vivoイメージング。J. Vis. Exp. (2021)このビデオは、プルキンエ細胞の蛍光タンパク質を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュ幼生の小脳ニューロンのin...

ゼブラフィッシュ幼生の脳のin vivoイメージングによる小脳ニューロンの可視化

出典: Lukasz, D., et al.ゼブラフィッシュ幼生における側線有毛細胞のin vivoカルシウムイメージングJ. Vis.

ゼブラフィッシュ幼生の側線有毛細胞におけるカルシウム動態のイメージング

ゼブラフィッシュは、光学的透明度、急速な外部の開発を含む多くの貴重な機能を持ち、聴力と平衡感覚のフィールドに、特定の重要な感覚の有毛細胞に位置する外部モデル システムです。この資料について説明どのようにトランスジェニックゼブラフィッシュ...

ゼブラフィッシュ稚魚における側線有毛細胞の生体内カルシウム イメージング

私たちは、高速走査型共焦点顕微鏡法を利用して、発生中のゼブラフィッシュの視蓋でミクログリア細胞のライブイメージングを行い、これらの細胞のin...

ゼブラフィッシュ胚におけるミクログリア動態のライブイメージングとキャラクタリゼーション

ここでは、共焦点顕微鏡を用いて、GCaMPカルシウム指標を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュの脳領域における神経活動を調べるための詳細なプロトコルを紹介します。...

インビボ 部分的に拘束されたゼブラフィッシュ幼魚における感覚刺激により誘発される神経活動の共焦点蛍光イメージング

学ぶpHluorinベースの蛍光イメージング法で、幼生ゼブラフィッシュの神経筋接合部におけるシナプス小胞の動態を可視化する。コスト効率の高いこの手法は、シナプス伝達の分子メカニズム解明に有用である。

解剖された幼生ゼブラフィッシュの神経筋接合部におけるシナプス小胞のリサイクルのライブイメージング

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