Name: 反復磁気刺激下 でのin vitro でのミエリン破片のミクログリア食作用の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-17T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 学ぶ反復磁気刺激がミクログリアのミエリン破片食作用に与える影響をin vitro共培養モデルで評価する方法。神経リハビリテーションにおける治療的可能性を探索し、細胞応答メカニズムを解明する。

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<ol><li>Osso, L. A., Hughes, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+mature+myelin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dynamics of mature myelin.</a> Nat Neurosci. 27 (8), 1449-1461 (2024).</li>
<li>Gao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+debris+phagocytosis+in+demyelinating+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Myelin debris phagocytosis in demyelinating disease.</a> Glia. 72 (11), 1934-1954 (2024).</li>
<li>Kopper, T. J., Gensel, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+as+an+inflammatory+mediator%3A+Myelin+interactions+with+complement%2C+macrophages%2C+and+microglia+in+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Myelin as an inflammatory mediator: Myelin interactions with complement, macrophages, and microglia in spinal cord injury.</a> J Neurosci Res. 96 (6), 969-977 (2018).</li>
<li>Yu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytic+microglia+and+macrophages+in+brain+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22CNS+Neurosci+Ther%22%5BJournal%5D)">Phagocytic microglia and macrophages in brain injury and repair.</a> CNS Neurosci Ther. 28 (9), 1279-1293 (2022).</li>
<li>Filbin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-associated+inhibitors+of+axonal+regeneration+in+the+adult+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Myelin-associated inhibitors of axonal regeneration in the adult mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 4 (9), 703-713 (2003).</li>
<li>Sen, M. K., Mahns, D. A., Coorssen, J. R., Shortland, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+microglia+and+astrocytes+in+phagocytosis+and+myelination%3A+Insights+from+the+cuprizone+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">The roles of microglia and astrocytes in phagocytosis and myelination: Insights from the cuprizone model of multiple sclerosis.</a> Glia. 70 (7), 1215-1250 (2022).</li>
<li>Jia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microglial+phagocytosis+in+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of microglial phagocytosis in ischemic stroke.</a> Front Immunol. 12, 790201(2021).</li>
<li>Kettenmann, H., Hanisch, U. K., Noda, M., Verkhratsky, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of microglia.</a> Physiol Rev. 91 (2), 461-553 (2011).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+nanovesicle+protects+against+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+through+enhancing+myelin+clearance+by+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Neutrophil nanovesicle protects against experimental autoimmune encephalomyelitis through enhancing myelin clearance by microglia.</a> ACS. 16 (11), 18886-18897 (2022).</li>
<li>Cignarella, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM2+activation+on+microglia+promotes+myelin+debris+clearance+and+remyelination+in+a+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">TREM2 activation on microglia promotes myelin debris clearance and remyelination in a model of multiple sclerosis.</a> Acta Neuropathol. 140 (4), 513-534 (2020).</li>
<li>Dufor, T., Lohof, A. M., Sherrard, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+stimulation+as+a+therapeutic+approach+for+brain+modulation+and+repair%3A+Underlying+molecular+and+cellular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Magnetic stimulation as a therapeutic approach for brain modulation and repair: Underlying molecular and cellular mechanisms.</a> Int J Mol Sci. 24 (22), 16456(2023).</li>
<li>Martin, D. M., McClintock, S. M., Forster, J. J., Lo, T. Y., Loo, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+enhancing+effects+of+rTMS+administered+to+the+prefrontal+cortex+in+patients+with+depression%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+individual+task+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Depress+Anxiety%22%5BJournal%5D)">Cognitive enhancing effects of rTMS administered to the prefrontal cortex in patients with depression: A systematic review and meta-analysis of individual task effects.</a> Depress Anxiety. 34 (11), 1029-1039 (2017).</li>
<li>Kamo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+peripheral+magnetic+stimulation+for+impairment+and+disability+in+people+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Repetitive peripheral magnetic stimulation for impairment and disability in people after stroke.</a> Cochrane Database Syst Rev. 9 (9), CD011968(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wang, L., Ni, X., Jiang, M., Zhao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+with+different+application+parameters+for+post-stroke+cognitive+impairment%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Fron+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Efficacy of repetitive transcranial magnetic stimulation with different application parameters for post-stroke cognitive impairment: A systematic review.</a> Fron Neurosci. 18, 1309736(2024).</li>
<li>Chu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcranial+magneto-acoustic+stimulation+attenuates+synaptic+plasticity+impairment+through+the+activation+of+Piezo1+in+alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Research%22%5BJournal%5D)">Transcranial magneto-acoustic stimulation attenuates synaptic plasticity impairment through the activation of Piezo1 in alzheimer's disease mouse model.</a> Research. 6, 0130(2023).</li>
<li>Zhai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+trans-spinal+magnetic+stimulation+promotes+microglial+phagocytosis+of+myelin+debris+after+spinal+cord+injury+through+LRP-1%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Repeated trans-spinal magnetic stimulation promotes microglial phagocytosis of myelin debris after spinal cord injury through LRP-1.</a> Exp Neurol. 379, 114844(2024).</li>
<li>Qin, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+ameliorates+cognitive+deficits+in+mice+with+radiation-induced+brain+injury+by+attenuating+microglial+pyroptosis+and+promoting+neurogenesis+via+BDNF+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Comm+Signal%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation ameliorates cognitive deficits in mice with radiation-induced brain injury by attenuating microglial pyroptosis and promoting neurogenesis via BDNF pathway.</a> Cell Comm Signal. 22 (1), 216(2024).</li>
<li>Qian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+astrocytes+responses+contribute+to+alleviating+inflammatory+damage+by+repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+in+rats+with+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia and astrocytes responses contribute to alleviating inflammatory damage by repetitive transcranial magnetic stimulation in rats with traumatic brain injury.</a> Neurochem Res. 49 (9), 2636-2651 (2024).</li>
<li>Luo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repetitive+transcranial+magnetic+stimulation+improves+neurological+function+and+promotes+the+anti-inflammatory+polarization+of+microglia+in+ischemic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Repetitive transcranial magnetic stimulation improves neurological function and promotes the anti-inflammatory polarization of microglia in ischemic rats.</a> Front Cell Neurosci. 16, 878345(2022).</li>
<li>Jannati, A., Oberman, L. M., Rotenberg, A., Pascual-Leone, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+mechanisms+of+brain+plasticity+by+transcranial+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the mechanisms of brain plasticity by transcranial magnetic stimulation.</a> Neuropsychopharmacol. 48 (1), 191-208 (2023).</li>
<li>Luo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intermittent+theta-burst+stimulation+improves+motor+function+by+inhibiting+neuronal+pyroptosis+and+regulating+microglial+polarization+via+TLR4%2FNF%CE%BAB%2FNLRP3+signaling+pathway+in+cerebral+ischemic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammat%22%5BJournal%5D)">Intermittent theta-burst stimulation improves motor function by inhibiting neuronal pyroptosis and regulating microglial polarization via TLR4/NFκB/NLRP3 signaling pathway in cerebral ischemic mice.</a> J Neuroinflammat. 19 (1), 141(2022).</li>
<li>Eichler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cytokines+mediate+plasticity+induced+by+10+Hz+repetitive+magnetic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cytokines mediate plasticity induced by 10 Hz repetitive magnetic stimulation.</a> J Neurosci. 43 (17), 3042-3060 (2023).</li>
<li>Kent, S. A., Miron, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+regulation+of+central+nervous+system+myelin+health+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Microglia regulation of central nervous system myelin health and regeneration.</a> Nat Rev Immunol. 24 (1), 49-63 (2024).</li>
<li>Yong, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+multiple+sclerosis%3A+Protectors+turn+destroyers%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Microglia in multiple sclerosis: Protectors turn destroyers.</a> Neuron. 110 (21), 3534-3548 (2022).</li>
<li>Sarlus, H., Heneka, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Microglia in Alzheimer's disease.</a> J Clin Invest. 127 (9), 3240-3249 (2017).</li>
<li>Cantuti-Castelvetri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+cholesterol+clearance+limits+remyelination+in+the+aged+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Defective cholesterol clearance limits remyelination in the aged central nervous system.</a> Science. 359 (6376), 684-688 (2018).</li>
<li>Norton, W. T., Poduslo, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelination+in+rat+brain%3A+Method+of+myelin+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Myelination in rat brain: Method of myelin isolation.</a> J Neurochem. 21 (4), 749-757 (1973).</li>
<li>Gordon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phagocytosis%3A+An+immunobiologic+process%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Phagocytosis: An immunobiologic process.</a> Immunity. 44 (3), 463-475 (2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr>DAPI <td>Beyotime、中国</td><td>P0131</td><td></td>BCA キット<td>付き退色防止マウント培地</td></tr><tr><td></td><td>ThermoFisher Scientific、アメリカ</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Bv-2 セル</td><td>ATCC</td><td>CBP60922</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養 12 ウェル プレート</td><td>Biofil、中国</td><td></td><td></td></tr> 細胞<tr><td>培養 24 ウェル プレート</td><td>Biofil、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>共焦点レーザー スキャン顕微鏡</td><td>Zeiss、ドイツ</td><td>800</td><td></td></tr><tr><td>恒温インキュベーター</td><td>ThermoFisher Scientific、アメリカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFSE</td><td>MedChemExpress、アメリカ</td><td>HY-158820</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 培地</td><td>KeyGen、中国</td><td>KGL1202-500</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco、アメリカ</td><td>16250078</td><td></td></tr><tr><td>Iba1</td><td>Abcam、アメリカ</td><td>ab48004</td><td></td></tr><tr><td>磁気刺激装置</td><td>Yiruide、中国</td><td>CCY-IA</td><td></td></tr><tr><td>磁気刺激コイル</td><td>Yiruide、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>BioSharp、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>KeyGen、中国</td><td>KGL2210-500</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Gibco、アメリカ</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td>MedChemExpress、アメリカ</td><td>HY-B1779</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン</td><td>KeyGen、中国</td><td>KGL2107-100</td><td></td></tr><tr><td>超遠心分離機</td><td>ベックマン、アメリカ</td><td>L-100XP</td><td></td></tr></tbody></table>

反復磁気刺激下 でのin vitro でのミエリン破片のミクログリア食作用の評価

Assessing Microglial Phagocytosis of Myelin Debris in vitro Under Repeated Magnetic Stimulation

本研究では、まず、脳由来のミエリン破片を抽出し、反復磁気刺激を利用して食作用能を高めることにより、in vitro でBV-2ミクログリア細胞に栄養を与えました。その後、BV-2ミクログリア細胞を培養し、磁気刺激の前にLPS介入を行ったため、厳密な神経学的検証の下でミクログリアの in vivo 状態をエミュレートしました。その後、LPS刺激後にrMS介入を適用しました。細胞の食作用を検証するために、免疫蛍光法を使用し、IBA-1を使用してミクログリアを標識し、CFSEを使用してミエリン破片を標識しました(図1)。免疫蛍光の結果は、包み込まれた外側のミエリン破片(CFSE)の面積と、対照群と比較してLPS群のIBA+/myelin+ 細胞の数の両方で有意な減少を示しました。さらに、磁気刺激後、飲み込まれた外部ミエリン破片の領域とIBA+/myelin+ 細胞の数は、LPSグループと比較してLPS+rMSグループで有意な増加を示しました(<strong cl...

Microglia, the resident phagocytes of the central nervous system (CNS), play a pivotal role in maintaining CNS integrity and homeostasis by removing ...

assessing-microglial-phagocytosis-myelin-debris-vitro-under-repeated

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ミクログリアは中枢神経系の防衛と免疫監視の最初の行を提供するマクロファージを常駐しています。...

ノーマルCNSのリアルタイムPCRによると神経炎症時のミクログリアにおけるマイクロRNAの検出

このビデオは、磁気細胞ソーティングを使用してマウス脳の脱髄病変からミクログリア細胞を抽出するためのプロトコルを示しています。このプロトコルは、ミクログリア細胞を含む病変のある脳組織を解剖し、特定の酵素で組織を処理して単一細胞懸濁液を取得し、ミクログリア受容体特異的磁気ビーズを利用してミクログリア細胞を単離することを含みます。...

磁気活性化細胞選別を用いたマウス脳脱髄病変からのミクログリアの単離

小膠細胞は、それらの細胞外環境に材料を貪食又は巻き込むための高い能力を有する中枢神経系（CNS）の居住者の免疫細胞である。ここでは、シナプスのコンポーネントのミクログリア媒介貪食を可視化し、測定するために広く適用可能で信頼性が高く、高度に定量的なアッセイが記載されている。...

貪食アッセイ：CNS食細胞と神経細胞間の相互作用を評価するためのプロトコル

組織の恒常性と不十分な食細胞機能の維持が病態に関与しているためにミクログリアの貪食作用が重要です。しかしながら、 インビボでのミクログリアの機能を評価することは技術的に困難です。私たちは、正確に監視し、生理的な環境の中でミクログリアの貪食の可能性を定量化するためのシンプルでありながら堅牢な技術を開発しました。...

網膜ミクログリアの貪食機能を評価します<em&gt;インビボ</em&gt;フローサイトメトリーベースのアッセイを使用しました

ここでは、in vitroの実験のために出生後の仔マウス（1日目）からミクログリアを分離するためのプロトコルを提示します。分離のこの即興方法は、高収率および高純度、ミクログリア生物学を解明する目的で、広範囲の実験を可能にする別の方法を超える有意な利点の両方を生成します。...

強化された純度と汎用性を持つ初代ミクログリアの迅速かつ洗練されたCD11b磁気分離

蛍光に分類された髄鞘の残骸と細胞内脂質液滴染色を使用してプライマリ...

体外骨髄由来マクロファージによって髄鞘の残骸の貪食

神経変性疾患は、調節不変のミクログリア機能に関連付けられている。本稿では、iPSCマクロファージによる神経芽細胞細胞の貪食のインビトロアッセイについて概説する。量的顕微鏡読み出しは、ライブ細胞タイムラプスイメージングと固定細胞高含有イメージングの両方について説明されています。...

iPSCマクロファージによる死んだ神経芽細胞の食細胞に対するインビトロ定量イメージングアッセイ

初代ミクログリア培養は、新しい抗炎症分子を評価するために一般的に使用されます。本プロトコルは、新生児の子犬からミクログリアを磁気的に分離するための再現可能で関連性のある方法を記載しています。...

初代細胞培養のための新生児マウスからのミクログリア細胞の磁気単離

ここでは、柱状磁気活性化細胞選別を利用して、脱髄疾患の動物モデルにおける原発性ミクログリアを単離および精製するためのプロトコルを提示する。...

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

ここでは、フローサイトメトリーを使用してvGLUT1陽性シナプスとpHRodo...

フローサイトメトリーを用いたシナプス材料のミクログリア包絡の定量化

私たちは、磁気活性化セルソーティング(MACS)を使用して、マウスの視床下部(または同等の小さな脳構造)からミクログリア細胞を比較的短時間で単離するためのプロトコルについて説明します。MACSで選別された視床下部ミクログリアは、 ex vivo 分析に使用でき、 in vitro...

磁気活性化細胞選別による灌流したばかりの成体マウス脳からの視床下部ミクログリアの単離  

学ぶ反復磁気刺激がミクログリアのミエリン破片食作用に与える影響をin vitro共培養モデルで評価する方法。神経リハビリテーションにおける治療的可能性を探索し、細胞応答メカニズムを解明する。

反復磁気刺激下でのin vitro でのミエリン破片のミクログリア食作用の評価

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反復磁気刺激下 でのin vitro でのミエリン破片のミクログリア食作用の評価

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