Name: マウス内耳組織の凍結切片および免疫染色:胚期から成虫期まで (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 学ぶマウス内耳組織の凍結切片と免疫染色法。胚期から成虫期までの蝸牛構造を正確に観察し、聴覚研究の初学者が信頼性の高い実験結果を得るための詳細なガイドです。

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<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+control+vascular+stability+and+auditory+spiral+ganglion+neuron+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Pericytes control vascular stability and auditory spiral ganglion neuron survival.</a> Elife. 12, e83486(2023).</li>
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<li>Donadieu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+cryosections+and+specific+immunohistochemical+methods+for+detecting+hypoxia+in+mouse+and+rat+cochleae%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Histochem%22%5BJournal%5D)">Improved cryosections and specific immunohistochemical methods for detecting hypoxia in mouse and rat cochleae.</a> Acta Histochem. 109 (3), 177-184 (2007).</li>
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<li>Ahmad, S., Chen, S., Sun, J., Lin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+26+and+30+are+co-assembled+to+form+gap+junctions+in+the+cochlea+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Connexins 26 and 30 are co-assembled to form gap junctions in the cochlea of mice.</a> Biochem Biophys Res Commun. 307 (2), 362-368 (2003).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spag6+mutant+mice+have+defects+in+development+and+function+of+spiral+ganglion+neurons%2C+apoptosis%2C+and+higher+sensitivity+to+paclitaxel%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Spag6 mutant mice have defects in development and function of spiral ganglion neurons, apoptosis, and higher sensitivity to paclitaxel.</a> Sci Rep. 7 (1), 8638(2017).</li>
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<li>Goodyear, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+age-related+degradation+of+the+tectorial+membrane+in+the+Ceacam16%CE%B2gal%2F%CE%B2gal+null+mutant+mouse%2C+a+model+for+late-onset+human+hereditary+deafness+DFNB113%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Accelerated age-related degradation of the tectorial membrane in the Ceacam16βgal/βgal null mutant mouse, a model for late-onset human hereditary deafness DFNB113.</a> Front Mol Neurosci. 12, 147(2019).</li>
<li>Zupančič, D., Terčelj, M., Štrus, B., Veranič, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+obtain+good+morphology+and+antigen+detection+in+the+same+tissue+section%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">How to obtain good morphology and antigen detection in the same tissue section.</a> Protoplasma. 254 (5), 1931-1939 (2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>BP151-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>コーニング株式会社</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>シグマ アルドリッチ LLC。</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>スクロース&nbsp;</td><td>VWRインターナショナル株式会社</td><td>97061-432</td><td></td></tr><tr><td>アジ化ナトリウム&nbsp;</td>株式会社<td>アムレスコ</td><td>0639-250G</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15714</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>デコン ラボ、株式会社</td><td>v1001</td><td></td></tr>ジ<tr><td>メチルブタン&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>19387-AP</td><td></td></tr><tr><td>最適切削温度コンパウンド (OCT)</td><td>VWR インターナショナル株式会社</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>特定機器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryostat</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>14-071-459</td><td></td></tr><tr><td>解剖鉗子</td><td>電子顕微鏡</td>科学 <td>72700-DZ</td><td></td></tr><tr><td>疎水性バリア ペルオキシダーゼ - 抗ペルオキシダーゼ ペン (PAP)&nbsp;</td>ベ<td>クターラボラトリーズ株式会社</td><td>H-4000</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>Carl Zeiss Microscopy, LLC.</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>P20マイクロピペット</td><td>ギルソン株式会社</td><td>F144056M</td><td></td></tr><tr><td>解剖ハサミ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>08-951-20</td><td></td></tr><tr><td>シルガード皿</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>24236-10</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>実装材料</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蛍光マウント</td><td>電子顕微鏡 Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>スーパーフロストプラススライド</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>1255015</td><td></td></tr><tr><td>免疫染色試薬</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Donkey Serum</td><td>Jackson ImmunoResearch, Inc.</td><td>017-000-121</td><td></td></tr>抗<tr><td>マウスFABフラグメント&nbsp;</td><td>ジャクソン・イムノリサーチ株式会社</td><td>715-007-003</td><td></td></tr><tr><td>ブロックヘン</td><td>アベス ラボ株式会社</td><td>BH-1001</td><td></td></tr><tr><td>Tuj1(β-III-チューブリン)マウスモノクローナル抗体</td><td>Biolegend, Inc.</td><td>MMS-435P</td><td></td></tr><tr><td>Sox2ヤギポリクローナル抗体</td>R<td>&株式会社Dシステムズ</td><td>AF2018</td><td></td></tr><tr><td>Myo6ウサギポリクローナル抗体</td><td>プロテウスバイオサイエンス25</td><td>&ndash;6791</td><td></td></tr><tr><td>Myo7Aウサギポリクローナル抗体</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>PA1-936</td><td></td></tr><tr><td>プレクシン-B1ヤギポリクローナル抗体</td><td>R&株式会社Dシステムズ</td><td>AF3749</td><td></td></tr><tr><td>二次抗体(ロバ製;Alexa-488、Cy3、Cy5)</td><td>ジャクソン・イムノリサーチ株式会社</td><td>カタログ</td><td></td>を見る</tr></tbody></table>

マウス内耳組織の凍結切片および免疫染色:胚期から成虫期まで

Cryosectioning and Immunostaining Mouse Inner Ear Tissue: From Embryonic to Adult Stages

私たちは、胚の16.5日目(E16.5)マウス蝸牛の頂点と基底回転、および出生後0日目(P0)とP30蝸牛の基底回転の私たち自身の研究室からの例を紹介します。これらのサンプルは、有毛細胞(Myo7AおよびMyo6)、スパイラル神経節ニューロン(SGN;Tuj1)、グリアおよび支持細胞(Sox2)、および蝸牛管とSGNの周りの基底膜を標識するPlexin-B1。さまざまな発達段階における蝸牛の断面は、蝸牛の成熟を反映して、形態と細胞組織に大きな違いがあることを明らかにしています。
E16.5では、蝸牛は発達の初期段階にあり、コルチ器官が分化し始めています。この段階では、SGNによる有毛細胞の神経支配が始まっていますが(図1C)、神経が完全に発達するのはさらに数週間後になります。有毛細胞の前駆体は識別可能です。初期の内有毛細胞と外有毛細胞が見えます(図1D)。構造的には、蝸牛管は存在しますが、成人の全長まで伸びていません。P0までに、蝸牛は比較的はるかに成熟しています...

This protocol details general histology methods for preparing inner ear samples from embryonic, neonatal, and adult mice. The purpose of this protocol is ...

cryosectioning-immunostaining-mouse-inner-ear-tissue-from-embryonic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

免疫組織化学と共焦点顕微鏡に続くコルチ器官を、切片ビブラトームの簡単な手順が説明されています。この手順では、コルチ器の哺乳類器官の微細な細胞構築の改良保全を可能にし、その結果、細胞の種類を正確に定量することができます。...

ビブラトームは、コルチ器の哺乳類器官の細胞構築の強化された保全のためセクショニング

私たちは、胚マウスの内耳からの蝸牛外植片の分離と培養を説明する方法を提示します。 また、方形波エレクトロポレーションによる蝸牛外植片への遺伝子導入法も示しています。in...

エレクトロポレーションによりマウス胎児蝸牛外植の文化と遺伝子導入

私たちは3無傷の蝸牛ターン（頂点、ミドル、ベース）としてコルチ大人の臓器を分離する手法を提案します。また、蛍光タグ付き抗体で免疫染色するための手順を示しています。一緒に、これらの技術は、蝸牛に見出さ有毛細胞、支持細胞、および他の細胞型の研究を可能にします。...

成体マウス蝸牛のホールマウント解剖および免疫蛍光

私たちは、出生後のマウスから聴覚水疱、カプセル、耳小骨を分離するためのプロトコルを提示し、全体のマウントと組織学的分析を行います。...

生後マウスにおける聴覚ブラの解剖：中耳の骨の単離および組織学的解析

ここでは、マウス頭蓋組織を例に免疫染色することにより、頭蓋顔面形態/病因の間のタンパク質レベルを検出し、定量するための詳細なプロトコルを提示する。また、免疫染色のための若いマウスからの非デカル化された硬質組織の調製および凍結切除の方法について説明する。...

マウス頭蓋組織および非除電骨の組織調製と免疫染色

本原稿は、正常マウスにおけるリボンシナプスの形態学的特徴および機能状態を評価するための実験プロトコルについて説明する。本モデルは、騒音誘発および加齢性共生性シナプトパシー制限モデルにも適している。以前のマウス研究の相関結果についても議論する。...

マウスコクレアの特定周波数領域におけるリボンシナプスの形態学的および機能的評価

本稿では、大人のマウス人工内耳における免疫組織化学のための人工内皮の10mmラウンドカバースリップに人工内皮の断片を付着させるために、細胞および組織接着剤の脱塩および使用を必要とする修飾人工内皮調製方法を提示する。...

大人のマウスにおける人工内耳表面製剤

この研究では、さまざまな年齢でマウスの内耳から内リンパ嚢を解剖する方法について説明しています。同様の解剖の結果は、内リンパ嚢の肥大の...

マウスの内リンパ嚢の解剖

ここでは、騒音性難聴(NIHL)のマウスモデルのプロトコルを提示します。NIHLを誘導するために、波形プラスチック、ラットトラップケージ、スピーカーを使用した新しいシンプルなデバイスを開発しました。聴覚脳幹反応と免疫蛍光イメージングを使用して、それぞれ聴覚機能と外有毛細胞の損傷を評価しました。...

マウスの騒音性難聴の実験条件の修正と聴力機能と外有毛細胞損傷の評価

脈管筋は内蝸牛電位の生成に不可欠です。ここでは、単核シーケンシングまたは免疫染色のための成体マウス脈条血管の解剖を紹介します。...

単核シーケンシングまたは免疫染色のための成体マウス脈条血管の解剖

マウス網膜凍結切片を調製し、光受容体上で免疫染色を実施するためのプロトコルが記載されている。この記事により、研究者は、保存状態の良い形態と高品質の免疫染色結果を備えたマウス網膜凍結切片を一貫して作製することができます。...

マウス網膜の凍結切片および免疫染色

学ぶマウス内耳組織の凍結切片と免疫染色法。胚期から成虫期までの蝸牛構造を正確に観察し、聴覚研究の初学者が信頼性の高い実験結果を得るための詳細なガイドです。

マウス内耳組織の凍結切片および免疫染色:胚期から成虫期まで

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