Name: マウスの耳への Mycobacterium avium の皮内接種 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: 学ぶマウス耳へのMycobacterium avium皮内接種法。低用量で非結核性抗酸菌感染モデルを構築し、28日間の持続感染と免疫応答を評価する再現性の高いin vivo手法を解説する。

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<ol><li>Abdelaal, H. F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus%3A+It%27s+Complex%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus: It's Complex.</a> Microorganisms. 10 (7), (2022).</li>
<li>Baldwin, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+complexities+and+challenges+of+preventing+and+treating+nontuberculous+mycobacterial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">The complexities and challenges of preventing and treating nontuberculous mycobacterial diseases.</a> PLoS Negl Trop Dis. 13 (2), p. e0007083(2019).</li>
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<li>Honda, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+sources+and+transmission+of+nontuberculous+mycobacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Environmental sources and transmission of nontuberculous mycobacteria.</a> Clin Chest Med. 44 (4), 661-674 (2023).</li>
<li>Pfaller, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+revisited%3A+Mycobacterium+avium+and+Mycobacterium+intracellulare+in+potable+water+in+the+USA%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Occurrence revisited: Mycobacterium avium and Mycobacterium intracellulare in potable water in the USA.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 106 (7), 2715-2727 (2022).</li>
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<li>Ghasemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+non-tuberculous+mycobacteria+on+BCG+vaccine+efficacy%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Tuberc+Other+Mycobact+Dis%22%5BJournal%5D)">Effects of non-tuberculous mycobacteria on BCG vaccine efficacy: A narrative review.</a> J Clin Tuberc Other Mycobact Dis. 36, 00451(2024).</li>
<li>Njagi, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+tuberculin+skin+test+responses+associated+with+Mycobacterium+intracellulare+sputum+colonization+in+an+adolescent+TB+prevalence+survey+in+Western+Kenya%5BTitle%5D)+AND+%22Tuberculosis+%28Edinb%29%22%5BJournal%5D)">Attenuated tuberculin skin test responses associated with Mycobacterium intracellulare sputum colonization in an adolescent TB prevalence survey in Western Kenya.</a> Tuberculosis (Edinb). 147, 102514(2024).</li>
<li>Larsen, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit+vaccine+protects+against+a+clinical+isolate+of+Mycobacterium+avium+in+wild+type+and+immunocompromised+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Subunit vaccine protects against a clinical isolate of Mycobacterium avium in wild type and immunocompromised mouse models.</a> Scientific Reports. 11 (1), 9040-9040 (2021).</li>
<li>Dutt, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mucosal+exposure+to+non-tuberculous+mycobacteria+elicits+B+cell-mediated+immunity+against+pulmonary+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Mucosal exposure to non-tuberculous mycobacteria elicits B cell-mediated immunity against pulmonary tuberculosis.</a> Cell Rep. 41 (11), 111783(2022).</li>
<li>Kupz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Latent+Tuberculosis+Infection+to+Study+Intervention+Strategies+to+Prevent+Reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Latent Tuberculosis Infection to Study Intervention Strategies to Prevent Reactivation.</a> PLoS One. 11 (7), e0158849(2016).</li>
<li>Reece, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serine+protease+activity+contributes+to+control+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+hypoxic+lung+granulomas+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Serine protease activity contributes to control of Mycobacterium tuberculosis in hypoxic lung granulomas in mice.</a> J Clin Invest. 120 (9), 3365-3376 (2010).</li>
<li>Nemeth, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contained+Mycobacterium+tuberculosis+infection+induces+concomitant+and+heterologous+protection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Contained Mycobacterium tuberculosis infection induces concomitant and heterologous protection.</a> PLoS Pathogens. 16 (7), e1008655(2020).</li>
<li>Jarchow-MacDonald, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changing+Incidence+and+Characteristics+of+Nontuberculous+Mycobacterial+Infections+in+Scotland+and+Comparison+With+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+Incidence+%282011+to+2019%29%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Forum+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Changing Incidence and Characteristics of Nontuberculous Mycobacterial Infections in Scotland and Comparison With Mycobacterium tuberculosis Complex Incidence (2011 to 2019).</a> Open Forum Infect Dis. 10 (1), ofac665(2023).</li>
<li>Thomson, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+climate+variables+on+the+rising+incidence+of+nontuberculous+mycobacterial+%28NTM%29+infections+in+Queensland%2C+Australia+2001-2016%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Influence of climate variables on the rising incidence of nontuberculous mycobacterial (NTM) infections in Queensland, Australia 2001-2016.</a> Sci Total Environ. 740, 139796(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.05% Tween80</td><td>Sigma</td><td>P6224</td><td></td></tr><tr><td>1mL シリンジ</td><td>Fisher</td><td>15-823-434</td><td></td></tr><tr><td>7H10 寒天三板</td><td>Moltox</td><td>21-40S234</td><td></td></tr><tr><td>26G 鈍針</td><td>Fisher</td><td>NC0981254</td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネット</td><td>Nuaire</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>CO2 インキュベーター</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-103-0513</td><td></td></tr>両<tr><td>面テープ</td>ス<td>コッチ</td><td>3136</td><td></td></tr>ハ<tr><td>ミルトン701Nマイクロリットルシリンジ</td><td>フィッシャー14-824-16</td><td></td><td></td></tr>ハード<tr><td>ティッシュオムニチップ</td><td>フィッシャー15-340-102</td><td></td><td></td></tr>加熱<tr><td>パッド</td>ケン<td>トサイエンティフィ</td>ック<td>HTP-1500</td><td></td></tr>イン<tr><td>スリン針</td><td>フィッシャー</td><td>NC1551333</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td>パターソン獣医</td><td>07-890-8598</td><td></td></tr><tr><td>照明付き虫</td>眼鏡 <td>Brightech</td><td>B07MMZ27QK</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>ThermoFisher</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュホモジナイザー</td><td>Omni</td><td>TH115</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュホモジナイザースタンド</td><td>Omni</td><td>S1000</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>パターソン獣医</td><td>07-808-1947</td><td></td></tr></tbody></table>

マウスの耳への mycobacterium avium の皮内接種

Intradermal Inoculation of Mycobacterium avium in the Mouse Ear

上記のプロトコルを使用して、真耳を感染経路または曝露経路として使用した再現性のあるNTMチャレンジモデルが確立できるかどうかを判断しました。耳は、チャレンジ後 28 日目に 2 匹の動物から採取し、均質化し、マイコバクテリア選択性 7H10 培地に記載されているようにプレーティングしました。皮内チャレンジを受けた耳では 、M. avium は28日間持続し、チャレンジを受けていない耳では M. avium が存在しないことが観察されました(図2)。
感染後28日までに問題のない耳への播種は観察されなかったが、この真耳モデルを潜伏結核モデリングに使用している他の人々は、他の遠位臓器部位への播種を観察している14。私たちは、チャレンジの用量を減らし、 M. avium 分離物を使用すると、慢性感染 に対する曝露をより よく反映する可能性のある後の時点への播種を減らす可能性があるという仮説を立てました。したがって、安楽死は、感染後28日、56日、90日、および132日でn=5 M. avium チャレンジマウスのコホートに対して行われました。次の臓器は、耳組織について記載されたのと同じプロトコルで均質化されました:肺、脾臓、ドレナージリンパ節(DLN)、および脳。この挑戦のルートは、時間の経過とともに散発的な播種をもたらし、感染後56日または90日で検査された臓器で可算CFUを示した動物の半数未満でした(表1)。チャレンジ後132日までに、すべてのマウスの脾臓に検出可能な M.アビウム がいました(評価された動物= 5/5)が、この時点までに他の臓器に最小限の細菌(DLNのn = 1/5)またはまったく(肺または脳のn = 0/5)細菌を保有していないように見えました（表1)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig1.jpg"> 
図1:ベベル面を上にした針の向き。 針を挿入する前に、接種物を適切に投与するために、ベベル側が上を向いている必要があります。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67675/67675fig2.jpg"> 
図2:チャレンジ後28日での M.avium による耳組織のコロニー形成。 雌のC57BL/6マウスに、102 CFUの Mycobacterium aviumを耳に投与しました。挑戦された耳(+)は、28日後に挑戦されなかった耳(-)と比較され、示された1つの実験からn=2匹の個々の動物が示され、各動物は異なる色と記号で示されました。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67675/67675fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td rowspan="2">時間(日)</td>
			<td colspan="4">オルガンログ10 CFU</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>肺</td>
			<td>脾臓</td>
			<td>DLNの</td>
			<td>脳</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>28</td>
			<td>3.08、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>2.81、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>ND、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>0.78、0.90、ND、ND、ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>56</td>
			<td>2.30、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>1.53、3.43、ND、ND、ND</td>
			<td>2.78、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>1.20、ND、ND、ND、ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>90</td>
			<td>ND、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>0.60、3.35、3.26、ND、ND</td>
			<td>ND、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>0.60、ND、ND、ND、ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>132</td>
			<td>ND、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>4.03, 3.58, 3.58, 4.03, 3.69</td>
			<td>2.41、ND、ND、ND、ND</td>
			<td>ND、ND、ND、ND、ND</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="5">DLN = リンパ節の排出、ND = 検出されない</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1:チャレンジ後の経時的な耳からの M.アビウム の播種。 肺、脾臓、ドレナージリンパ節(DLN)、および脳は、チャレンジ後の時点ごとにn = 5匹のマウスから採取されました。均質化された組織をプレーティングし、細菌の増殖を評価しました。log10 として提示された臓器CFUは、細菌がカウントされ、検出されなかった(ND)濃度メッキされたどの濃度でもCFUが観察されなかった場合に値を変換しました。1つの実験を代表するタイムコースデータ。

マウスの耳への Mycobacterium avium の皮内接種

In contrast to natural nontuberculous mycobacterial (NTM) exposures or infections whose pathology is founded on a slow-replicating organism, the aerosol ...

intradermal-inoculation-of-mycobacterium-avium-in-the-mouse-ear

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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感染後ブドウ膜炎のモデルとしてのプライミングマイコバクテリアブドウ膜炎(PMU)

免疫適格マウスを気管内に接種するための寒天ビーズ包埋 型マイコバクテリウム膿瘍 の調製

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マウスの耳への Mycobacterium avium の皮内接種

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