Name: 下流のタンパク質分析のための結 核菌 からの細胞壁および細胞膜タンパク質の分離と分画 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: 学ぶMycobacterium tuberculosisの細胞壁・細胞膜タンパク質分離法。等電点電気泳動と分子量分離により、プロテオミクス・免疫学的アッセイに直接使用可能な画分を調製する技術を解説する。

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<ol><li>Seshadri, C., Turner, M. T., Lewinsohn, D. M., Moody, D. B., Van Rhijn, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoproteins+are+major+targets+of+the+polyclonal+human+T+cell+response+to+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lipoproteins are major targets of the polyclonal human T cell response to Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 190 (1), 278-284 (2013).</li>
<li>Kunnath-Velayudhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+antibody+responses+to+the+Mycobacterium+tuberculosis+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Dynamic antibody responses to the Mycobacterium tuberculosis proteome.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (33), 14703-14708 (2010).</li>
<li>Drage, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TLR2+and+its+co-receptors+determine+responses+of+macrophages+and+dendritic+cells+to+lipoproteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">TLR2 and its co-receptors determine responses of macrophages and dendritic cells to lipoproteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Cell Immunol. 258 (1), 29-37 (2009).</li>
<li>Wallin, E., von Heijne, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+analysis+of+integral+membrane+proteins+from+eubacterial%2C+archaean%2C+and+eukaryotic+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Genome-wide analysis of integral membrane proteins from eubacterial, archaean, and eukaryotic organisms.</a> Protein Sci. 7, 1029-1038 (1998).</li>
<li>Almeida, J. G., Preto, A. J., Koukos, P. I., Bonvin, A. M. J. J., Moreira, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+proteins+structures%3A+A+review+on+computational+modeling+tools%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Membrane proteins structures: A review on computational modeling tools.</a> Biochim Biophys Acta Biomembr. 1859 (10), 2021-2039 (2017).</li>
<li>Finkelstein, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structures+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structures of membrane proteins.</a> Nature. 511 ((Suppl 7509)), 21(2014).</li>
<li>Smith, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+the+purification+of+membrane+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Strategies for the purification of membrane proteins.</a> Methods Mol Biol. 1485, 389-400 (2017).</li>
<li>Von Jagow, G., Link, T., Schager, H. Purification Strategies for Membrane Proteins. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVon+Jagow%2C+G+%22A+Practical+Guide+to+Membrane+Protein+Purification%22">A Practical Guide to Membrane Protein Purification</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1994).</li>
<li>Raja, A., Uma Devi, K. R., Ramalingam, B., Brennan, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoglobulin+G%2C+A%2C+and+M+responses+in+serum+and+circulating+immune+complexes+elicited+by+the+16-kilodalton+antigen+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Diagn+Lab+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunoglobulin G, A, and M responses in serum and circulating immune complexes elicited by the 16-kilodalton antigen of Mycobacterium tuberculosis.</a> Clin Diagn Lab Immunol. 9 (2), 308-312 (2002).</li>
<li>Covert, B. A., Spencer, J. S., Orme, I. M., Belisle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+proteomics+in+defining+the+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">The application of proteomics in defining the T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis.</a> Proteomics. 1 (4), 574-586 (2001).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunoproteomic+identification+of+human+T+cell+antigens+of+Mycobacterium+tuberculosis+that+differentiate+healthy+contacts+from+tuberculosis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Immunoproteomic identification of human T cell antigens of Mycobacterium tuberculosis that differentiate healthy contacts from tuberculosis patients.</a> Mol Cell Proteomics. 9 (3), 538-549 (2010).</li>
<li>Sinha, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenic+membrane-associated+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis+revealed+by+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Immunogenic membrane-associated proteins of Mycobacterium tuberculosis revealed by proteomics.</a> Microbiology. 151 (7), 2411-2419 (2005).</li>
<li>Deenadayalan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Integrated+approach+for+proteomic+and+immunological+analysis+of+cell+wall+and+cell+membrane+proteins+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Res+Arch%22%5BJournal%5D)">An Integrated approach for proteomic and immunological analysis of cell wall and cell membrane proteins of Mycobacterium tuberculosis.</a> Med Res Arch. 11 (11), (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>7H9ブロス&nbsp;</td><td>ヒメディア&nbsp;</td><td>M198</td><td></td></tr><tr><td>40% バイオライト 3/10 アンフォライト&nbsp;</td><td>バイオラッド</td><td>1631113</td><td></td></tr><tr><td>BCAタンパク質アッセイ&nbsp;</td><td>メルク</td><td>BCA1</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Lyte 5/7 アンフォライト&nbsp;</td><td>バイオラッド</td><td>1631152</td><td></td></tr><tr><td>遠心濃縮器 3 kDa</td><td>メルク</td><td>Z629456</td><td></td></tr><tr><td>デジトニン。</td><td>メルク</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>ドナーゼ</td><td>メルク</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>DTTの</td><td>メルク</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>EDTAの</td><td>メルク</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>エグタ</td><td>メルク</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>メルク</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>ロイペプチン</td><td>メルク</td><td>E18</td><td></td></tr><tr><td>ペプスタチンA</td><td>メルク</td><td>P5318</td><td></td></tr><tr><td>PMSF</td><td>メルク</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>ルナーゼ</td><td>メルク</td><td>10109134001</td><td></td></tr><tr><td>ロトフォー&nbsp;</td><td>バイオラッド</td><td>170-2986</td><td>&nbsp;等電点集束(IEF)装置</td></tr><tr><td>ソニケーター</td><td>Vibra-Cell、ソニックス</td><td>VC750</td><td></td></tr><tr><td>TLCKの</td><td>メルク</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>TPCKの</td><td>メルク</td><td>4376</td><td></td></tr><tr><td>尿素</td><td>メルク</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>全ゲル溶出装置&nbsp;</td><td>バイオラッド</td><td>1651250</td><td></td></tr></tbody></table>

下流のタンパク質分析のための結 核菌 からの細胞壁および細胞膜タンパク質の分離と分画

Separation and Fractionation of Cell Wall and Cell Membrane Proteins from Mycobacterium tuberculosis for Downstream Protein Analysis

高速超遠心分離による細胞壁および細胞膜タンパク質の単離 細胞壁および膜タンパク質は、プロトコルに概説されているように、超遠心分離を介して全細胞ライセートから単離されました。結 核菌 の分離された細胞内画分-細胞壁、細胞膜、および細胞質ゾルタンパク質プロファイルのSDS-PAGE分析を 図1に示します。
分取液相等電点集束による細胞壁タンパク質の分離 
結核菌細胞壁タンパク質は、プロトコルに記載されているようにIEFバッファーを使用して可溶化した。可溶化したタンパク質は、等電点に基づいて20の画分に分離されました。図2は、IEFで分離された細胞壁画分のpHプロファイルを示しています。タンパク質プロファイルを示すこれらの画分のSDS-PAGE分析を図3に示します。
<p class="j...

Mycobacterium cell wall and membrane proteins, which play a central role in tuberculosis pathogenesis, were successfully separated using preparative ...

separation-fractionation-cell-wall-cell-membrane-proteins-from

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

出典: Gupta、S.、Marcela Rodriguez、G.鉄限定抗酸菌によって産生される細胞外小胞の単離と特性評価。 J. Vis. 経験。 (2019年)このビデオは、宿主環境を模倣した鉄制限条件下で培養された 結核菌 からの細胞外小胞(EV)の段階的な単離を示しています。EV...

結核菌からのシデロフォア含有細胞外小胞の単離

このビデオでは、ミコール酸の薄層クロマトグラフィーベースの分離を実演しています。この手法は、マイコバクテリアの細胞壁に存在するさまざまなミコール酸(長鎖脂質)を、その極性に基づいて分離します。...

薄層クロマトグラフィーによるミコール酸バリアントの分離:極性に基づいてマイコバクテリア細胞壁脂質を分離する方法

このビデオでは、結核菌(Mtb)の培養濾液から細菌の細胞外小胞(EV)を精製するためのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)技術を示しています。この手法では、多孔質樹脂充填カラムを使用して、EVの精製画分を取得します。多孔質粒子は、より小さなタンパク質が細孔に侵入するのを選択的に許可し、溶出を遅らせます。同時に、EVはサイズが大きいため、毛穴に入るのが排除され、最初に溶出されます。...

マイコバクテリア細胞外小胞を精製するためのサイズ排除クロマトグラフィー技術

細菌細胞壁はペプチドによって架橋された糖鎖の高分子ネットワークであるペプチドグリカンで構成される。超高性能液体クロマトグラフィーは、ペプチドグリカン組成物の新しい発見に高解像度とスループットを提供します。細胞壁(sacculi)の分離とUPLCによる分析のためのその後の準備のための手順を提示する。...

超高性能液体クロマトグラフィーによる組成解析のための細菌細胞壁の分離と調製

グラム陰性細菌は、2つの空間的に分離された膜を生成する。外膜は、内膜から、ペリプラズムとペプチドグリカン層によって分割される。これらの微生物の二重二重層を単離する能力は、その生理学と病因を理解するために重要であった。...

アシネトバクターバウマンニの技術的調整によるグラム陰性細菌の細胞エンベロープの内膜および外膜分画への分離

広範囲のマイコバクテリアの細胞壁の総脂質含有量を抽出するプロトコルが提示される。さらに、異なる種類のマイコール酸の抽出および分析プロトコルが示されている。これらのマイコバクテリア化合物をモニタリングする薄層クロマトグラフィープロトコルも提供される。...

薄層クロマトグラフィーによるマイコバクテリアの脂質組成の解析

細菌性小胞は病因において重要な役割を果たし、有望なバイオテクノロジーの応用を有する。小胞の不均一性は分析と使用を複雑にします。したがって、小胞の様々なサイズを分離する簡単で再現可能な方法が必要です。ここでは、...

細菌外膜小胞ヘテロジネミティーを分析するサイズ排除クロマトグラフィー

このプロトコールは、サイズ排除クロマトグラフィー、培養上清から 結核菌 群細胞外小胞を富化するための容易で再現性のある技術を記載する。...

結核 菌サイズ排除クロマトグラフィーによる細胞外小胞濃縮

このプロトコルでは、マイコバクテリウム・スメグマティス(Msm)の軸種培養からの天然マイコバクテリア細胞外小胞(mEV)の濃縮と、mCherry(赤色蛍光レポーター)含有組換えMsmEVsの設計と濃縮方法について詳しく説明します。最後に、結核菌のEsxAタンパク質を含むMsmEVを濃縮することで、新しいアプローチを検証します。...

マイコバクテリアの天然および組換え細胞外小胞の濃縮

原核生物には細胞小器官系がありませんが、局所的なタンパク質を持つ細胞内領域があります。細胞内領域の酵素とタンパク質の定量的および定性的分析は、薬物およびワクチンの標的を開発するために重要です。ここでは、Triton...

Triton X-114ベースの分画アプローチを使用した レプトスピラ における細胞内タンパク質の濃縮

このプロトコルは、 結核菌の分泌タンパク質の培養、回収、および濃縮について記述しています。培養ろ液タンパク質(CFP)を定量し、等電点電気泳動により20の画分に分離し、さらに分取SDS-PAGEと電気溶出システムを用いて30の画分に分離します。...

結核菌由来の培養濾液タンパク質(CFP)の分離と分画

学ぶMycobacterium tuberculosisの細胞壁・細胞膜タンパク質分離法。等電点電気泳動と分子量分離により、プロテオミクス・免疫学的アッセイに直接使用可能な画分を調製する技術を解説する。

下流のタンパク質分析のための結核菌からの細胞壁および細胞膜タンパク質の分離と分画

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