Name: エバポレイト光散乱検出器と組み合わせた液体クロマトグラフィーによる脂質ナノ粒子RNA送達系の4成分の決定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: 学ぶ HPLC-ELSD法による脂質ナノ粒子4成分の定量分析技術。RNA送達系のLNP成分分離と高感度検出を実現し、低コストで優れた線形範囲を提供する画期的な生化学的手法です。

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<ol><li>Zong, Y., Lin, Y., Wei, T., Cheng, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+nanoparticle+%28LNP%29+enables+mRNA+delivery+for+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Mater%22%5BJournal%5D)">Lipid nanoparticle (LNP) enables mRNA delivery for cancer therapy.</a> Adv Mater. 35 (51), e2303261(2023).</li>
<li>Vlatko, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-immunotherapy+application+of+LNP-mRNA%3A+Maximizing+efficacy+and+safety%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Non-immunotherapy application of LNP-mRNA: Maximizing efficacy and safety.</a> Biomedicines. 9 (5), 530(2021).</li>
<li>Eygeris, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemistry+of+lipid+nanoparticles+for+RNA+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Acc+Chem+Res%22%5BJournal%5D)">Chemistry of lipid nanoparticles for RNA delivery.</a> Acc Chem Res. 55 (1), 2-12 (2021).</li>
<li>Sun, D., Lu, Z. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+function+of+cationic+and+ionizable+lipids+for+nucleic+acid+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Structure and function of cationic and ionizable lipids for nucleic acid delivery.</a> Pharm Res. 40 (1), 27-46 (2023).</li>
<li>Rebecca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+nanoparticle+formulations+for+enhanced+co-delivery+of+siRNA+and+mRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Lipid nanoparticle formulations for enhanced co-delivery of siRNA and mRNA.</a> Nano Lett. 18 (6), 3814-3822 (2018).</li>
<li>Maugeri, M., Nawaz, M., Papadimitriou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linkage+between+endosomal+escape+of+LNP-mRNA+and+loading+into+EVs+for+transport+to+other+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Linkage between endosomal escape of LNP-mRNA and loading into EVs for transport to other cells.</a> Nat Commun. 10, 4333(2019).</li>
<li>Renee, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+PEGylation+on+LNP+based+mRNA+delivery+to+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of PEGylation on LNP based mRNA delivery to the eye.</a> PLoS One. 15 (10), e0241006(2020).</li>
<li>Benedicto, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+phospholipid+chemistry+for+improved+lipid+nanoparticle+%28LNP%29+delivery+of+messenger+RNA+%28mRNA%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of phospholipid chemistry for improved lipid nanoparticle (LNP) delivery of messenger RNA (mRNA).</a> Biomater Sci. 10 (2), 549-559 (2022).</li>
<li>Kamanzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+visualization+of+lipid+nanoparticle+fusion+as+a+function+of+formulation+and+process+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Quantitative visualization of lipid nanoparticle fusion as a function of formulation and process parameters.</a> ACS Nano. 18 (28), 18191-18201 (2024).</li>
<li>Melissa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+lipid+nanoparticles+for+the+delivery+of+nebulized+therapeutic+mRNA+to+the+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Optimization of lipid nanoparticles for the delivery of nebulized therapeutic mRNA to the lungs.</a> Nat Biomed Eng. 5 (9), 1059-1068 (2021).</li>
<li>Packer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mechanism+for+the+loss+of+mRNA+activity+in+lipid+nanoparticle+delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A novel mechanism for the loss of mRNA activity in lipid nanoparticle delivery systems.</a> Nat Commun. 12 (1), 6777(2021).</li>
<li>Snyder, L. R., Kirkland, J. J., Dolan, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSnyder%2C+LR+%22Introduction+to+Modern+Liquid+Chromatography%22">Introduction to Modern Liquid Chromatography</a>. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ. (2010).</li>
<li>Zhang, L. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+mRNA-LNP+components+of+two+globally+marketed+COVID-19+vaccines+on+efficacy+and+stability%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Vaccines%22%5BJournal%5D)">Effect of mRNA-LNP components of two globally marketed COVID-19 vaccines on efficacy and stability.</a> NPJ Vaccines. 8 (1), 156(2023).</li>
<li>Zhang, Y., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+comparison+of+different+ELSD+detectors+in+pharmaceutical+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Methods%22%5BJournal%5D)">Performance comparison of different ELSD detectors in pharmaceutical analysis.</a> Anal Methods. 7 (12), 4800-4807 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>酢酸</td><td>ANPELラボラトリーテクノロジーズ(上海)Inc.</td><td>CAEQ-4-000319-0050</td><td></td></tr><tr><td>バランス</td>島<td>津製作所(上海)グローバルラボ消耗品</td>有限公司 <td>AP135W</td><td></td></tr><tr><td>コラム</td> 島津製作所<td>(上海)グローバルラボ消耗品有限公司</td><td>シムネックス WP C4(380-01235-74)</td><td></td></tr><tr><td>ELSD</td><td>島津製作所(中国)有限公司</td><td>ELSD-LT III(228-65900-46)</td><td></td></tr><tr><td>LabSolutionsソフトウェア</td> 島<td>津製作所(中国)有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>島津製作</td>所<td>LC (China) CO.,Ltd</td><td>LC40D XR</td><td></td></tr><tr><td>メタノール</td><td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc.</td><td>CAEQ-4-003302-4000</td><td></td></tr><tr><td>ピペット-100&micro;L</td><td>島津製作所(上海)グローバルラボ消耗品有限公司</td><td>00-NAR-100</td><td></td></tr><tr><td>ピペット-1000 & マイクロ;L</td><td>島津製作所(上海)Global Laboratory Consumables Co.,Ltd</td><td>00-NAR-1000</td><td></td></tr><tr><td>TEA</td><td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc.</td><td>CAEQ-4-012190-0250</td><td></td></tr><tr><td>超純水システム</td><td>ミリポア</td><td>ZIQ7000T0C</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックスミキサー</td><td>ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc.</td><td>VM-Bの</td><td></td></tr></tbody></table>

エバポレイト光散乱検出器と組み合わせた液体クロマトグラフィーによる脂質ナノ粒子rna送達系の4成分の決定

Determining Four Components in a Lipid Nanoparticle RNA Delivery System by Liquid Chromatography Combined with Evaporative Light Scattering Detector

この分析法によるLNP標準液の分析により、4成分の分離度が1.5を超え、ベースライン分離が実現しました。さらに、 図 1 に示すように、高濃度の標準溶液には残留物は観察されませんでした。検量線は 5 〜 250 μg/mL の濃度範囲内で設定され、相関係数はすべて 0.999 を超え、広い線形範囲と優れた直線性が示されました。検量線を 図2に示します。
この分析法の再現性を調べるために、濃度 10 μg/mL の標準溶液を 6 回繰り返し注入し、分析しました。保持時間の相対標準偏差(RSD)は0.1%未満、ピーク面積のRSDは2%未満であり、高い再現性を示しました。対応するクロマトグラムを 図 3 に示します。
実際のLNPサンプルの分析では、サンプルをメタノールで10倍に希釈して、薬物からのLNPの解離を促進しました。その後、LNP中の4つの成分の...

エバポレイト光散乱検出器と組み合わせた液体クロマトグラフィーによる脂質ナノ粒子RNA送達系の4成分の決定

This article presents a method for the analysis of lipid nanoparticle (LNP) components. LNP, serving as a pivotal vector for RNA-based drugs, primarily ...

determining-four-components-lipid-nanoparticle-rna-delivery-system

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このプロトコルは、同質性の高いサブミクロンサイズの脂質小胞を調製するための押出法を説明します。このメソッドは、リポソーム調製のための制御された窒素の流量と圧力制御システムを使用しています。脂質の準備...

ナノサイズの脂質小胞の調製のための一定の圧力制御押出法

ナノ粒子トラッキング解析（NTA）とポリマー遺伝子送達ナノ粒子を評価するためのハイスループットフローサイトメトリーのためのプロトコルが記載されている。国税庁は、ナノ粒子の粒度分布およびプラスミド当たり粒子分布を特徴付けるために利用される。ハイスループットフローサイトメトリーは、遺伝子送達バイオマテリアルのライブラリの定量的なトランスフェクション効率の評価を可能にします。...

ナノ粒子トラッキング分析とハイスループットフローサイトメトリーによる高分子遺伝子デリバリーナノ粒子の評価

&gt;jove_content&lt;この研究では、生体適合性ナノ粒子の超小さな集団を合成する方法と、それらの細胞相互作用を評価するためのいくつかのin vitro方法が説明されました。...

細胞内ターゲティングアプリケーションのための固体脂質ナノ粒子（SLNs）

提示されたプロトコルは、細孔スパンの溶媒を含まない脂質二重層を使用した単一トランスポーターレベルでの膜タンパク質媒介輸送の分析を説明しています。これは、大量生産されたナノポアアレイチップの作成と、高度に並列化されたデータ取得および分析を組み合わせることで達成され、膜タンパク質エフェクタースクリーニングの将来の確立が可能になります。...

単一のタンパク質解像度で高並列ナノ細孔チップシステムにより分析膜輸送プロセス

脂肪滴は、C型肝炎ウイルス（HCV）を含むいくつかの病原体の複製のための重要な器官です。我々は、関連するタンパク質の定量的な質量分析のための脂質滴を単離する方法を記載します。そのようなウイルス感染、環境ストレス、または薬物治療などの条件の様々な環境下で使用することができます。...

定量的質量分析のための脂肪滴の分離

この資料では、脂質被覆 74 nm ナノ粒子の falcarindiol...

ヒト間葉系幹細胞によって Falcarindiol を含む新しい脂質被覆ナノ粒子の取り込み

このプロトコルは、リポソームの作製と、蛍光顕微鏡を用いて表面上に固定化し、個々に画像化する方法について説明します。これにより、集団の単一リポソーム間のサイズおよび組成不均一性の定量が可能になる。...

個々のリポソーム間の組成不均一性を検出するための定量的蛍光顕微鏡ベースの単一リポソームアッセイ

脂質ナノ粒子は、mRNAおよびDNAカプセル化のためのマイクロ流体混合プラットフォームアプローチを用いて開発される。...

マイクロ流体混合プラットフォームを用いた遺伝子導入のための脂質ナノ粒子の作製と特性化

我々は、新しいナノ粒子追跡解析装置を用いて、マウスの骨膜脂肪組織およびヒト血漿から分離された細胞外小胞のサイズ分布および総粒子濃度を推定する方法を示す。...

細胞外小胞の定量とサイズ決定のためのナノ粒子追跡解析

ここでは、ホタルルシフェラーゼをコードするmRNAをカプセル化する脂質ナノ粒子(LNP)を製剤化するためのプロトコルが提示されます。これらのLNPは、in vitro でHepG2細胞で、in vivo...

マイクロ流体混合で調製したmRNA-脂質ナノ粒子のin vitro および in vivo 効率の試験

2ジェットCIJおよび4ジェットマルチインレットボルテックスミキサー(μMIVM)を含む閉じ込め衝突ジェット(CIJ)ミキサー技術を使用して脂質ナノ粒子(LNP)を合成するための詳細なプロトコルが実証されています。CIJミキサーは、再現性のある乱流マイクロミキシング環境を生成し、単分散LNPを生成します。...

閉じ込めインピンギングジェットミキサーにおける乱流による脂質ナノ粒子の合成

学ぶ HPLC-ELSD法による脂質ナノ粒子4成分の定量分析技術。RNA送達系のLNP成分分離と高感度検出を実現し、低コストで優れた線形範囲を提供する画期的な生化学的手法です。

エバポレイト光散乱検出器と組み合わせた液体クロマトグラフィーによる脂質ナノ粒子RNA送達系の4成分の決定

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