Name: 免疫蛍光法による哺乳類細胞の核ブレブとDNA漏出の検出 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-17T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: 学ぶ免疫蛍光法による核ブレブとDNA漏出の検出手法。HeLa細胞を用いてラミノパチーとDNA修復不全の関連を可視化し、Hutchinson-Gilfordプロゲリア症候群の病態理解に貢献する。

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<ol><li>Navarro, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+ZMPSTE24+%28FACE1%29+mutations+in+patients+affected+with+restrictive+dermopathy+or+related+progeroid+syndromes+and+mutation+update%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">New ZMPSTE24 (FACE1) mutations in patients affected with restrictive dermopathy or related progeroid syndromes and mutation update.</a> Eur J Hum Genet. 22 (8), 1002-1011 (2014).</li>
<li>Dittmer, T. A., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lamin+protein+family%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">The lamin protein family.</a> Genome Biol. 12 (222), 1-16 (2011).</li>
<li>Gruenbaum, Y., Margalit, A., Goldman, R. D., Shumaker, D. K., Wilson, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuclear+lamina+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The nuclear lamina comes of age.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 6, 21-31 (2005).</li>
<li>Navarro, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+A+and+ZMPSTE24+%28FACE-1%29+defects+cause+nuclear+disorganization+and+identify+restrictive+dermopathy+as+a+lethal+neonatal+laminopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Lamin A and ZMPSTE24 (FACE-1) defects cause nuclear disorganization and identify restrictive dermopathy as a lethal neonatal laminopathy.</a> Hum Mol Genet. 13 (20), 2493-2503 (2004).</li>
<li>Barrowman, J., Wiley, P. A., Hudon-Miller, S. E., Hrycyna, C. A., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ZMPSTE24+disease+mutations%3A+Residual+proteolytic+activity+correlates+with+disease+severity%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Human ZMPSTE24 disease mutations: Residual proteolytic activity correlates with disease severity.</a> Hum Mol Genet. 21 (18), 4084-4093 (2012).</li>
<li>Richards, S., Muter, J., Ritchie, P., Lattanzi, G., Hutchison, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+accumulation+of+un-repairable+DNA+damage+in+laminopathy+progeria+fibroblasts+is+caused+by+ROS+generation+and+is+prevented+by+treatment+with+N-acetyl+cysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">The accumulation of un-repairable DNA damage in laminopathy progeria fibroblasts is caused by ROS generation and is prevented by treatment with N-acetyl cysteine.</a> Hum Mol Genet. 20 (20), 3997-4004 (2011).</li>
<li>Davies, B. S., Fong, L. G., Yang, S. H., Coffinier, C., Young, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+post-translational+processing+of+prelamin+A+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Genomics+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">The post-translational processing of prelamin A and disease.</a> Annu Rev Genomics Hum Genet. 10, 153-174 (2009).</li>
<li>Barrowman, J., Hamblet, C., George, C. M., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+prelamin+A+biogenesis+reveals+the+nucleus+to+be+a+CaaX+processing+compartment%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Analysis of prelamin A biogenesis reveals the nucleus to be a CaaX processing compartment.</a> Mol Biol Cell. 19, 5398-5408 (2008).</li>
<li>Young, S., Meta, M., Yang, S. H., Fong, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prelamin+A+farnesylation+and+progeroid+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Prelamin A farnesylation and progeroid syndromes.</a> J Biol Chem. 281 (52), 39741-39745 (2006).</li>
<li>Houthaeve, G., Robijns, J., Braeckmans, K., De Vos, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bypassing+border+control%3A+Nuclear+envelope+rupture+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol%22%5BJournal%5D)">Bypassing border control: Nuclear envelope rupture in disease.</a> Physiol. 33 (1), 39-49 (2017).</li>
<li>Schreiber, K. H., Kennedy, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+lamins+go+bad%3A+Nuclear+structure+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">When lamins go bad: Nuclear structure and disease.</a> Cell. 152 (6), 1365-1375 (2013).</li>
<li>Fong, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterozygosity+for+Lmna+deficiency+eliminates+the+progeria-like+phenotypes+in+Zmpste24-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Heterozygosity for Lmna deficiency eliminates the progeria-like phenotypes in Zmpste24-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (52), 18111-18116 (2004).</li>
<li>Pendas, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+prelamin+A+processing+and+muscular+and+adipocyte+alterations+in+Zmpste24+metalloproteinase-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Defective prelamin A processing and muscular and adipocyte alterations in Zmpste24 metalloproteinase-deficient mice.</a> Nat Genet. 31, 94-99 (2002).</li>
<li>Goldman, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accumulation+of+mutant+lamin+A+causes+progressive+changes+in+nuclear+architecture+in+Hutchinson-Gilford+progeria+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Accumulation of mutant lamin A causes progressive changes in nuclear architecture in Hutchinson-Gilford progeria syndrome.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101, 8963-8968 (2004).</li>
<li>Eriksson, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+de+novo+point+mutations+in+lamin+A+cause+Hutchinson%E2%80%93Gilford+progeria+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Recurrent de novo point mutations in lamin A cause Hutchinson–Gilford progeria syndrome.</a> Nature. 423, 293-298 (2003).</li>
<li>Young, S. G., Fong, L. G., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thematic+review+series%3A+Lipid+post-translational+modifications.+Prelamin+A%2C+Zmpste24%2C+misshapen+cell+nuclei%2C+and+progeria%E2%80%94new+evidence+suggesting+that+protein+farnesylation+could+be+important+for+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Thematic review series: Lipid post-translational modifications. Prelamin A, Zmpste24, misshapen cell nuclei, and progeria—new evidence suggesting that protein farnesylation could be important for disease pathogenesis.</a> J Lipid Res. 46 (12), 2531-2558 (2005).</li>
<li>Worman, H. J., Michaelis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prelamin+A+and+ZMPSTE24+in+premature+and+physiological+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleus%22%5BJournal%5D)">Prelamin A and ZMPSTE24 in premature and physiological aging.</a> Nucleus. 14 (1), 1-17 (2023).</li>
<li>Pande, S., Ghosh, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+proteostasis+imbalance+in+laminopathy-associated+premature+aging+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Nuclear proteostasis imbalance in laminopathy-associated premature aging diseases.</a> FASEB J. 37 (8), 1025-1035 (2023).</li>
<li>Odell, I. D., Cook, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence techniques.</a> J Invest Dermatol. 133 (4), 1-12 (2013).</li>
<li>Kumar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+and+enzyme+immunomicroscopy+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunoassay+Immunochem%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence and enzyme immunomicroscopy methods.</a> J Immunoassay Immunochem. 21 (2-3), 235-253 (2000).</li>
<li>Tjaden, A., Giessmann, R. T., Knapp, S., Schroder, M., Muller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-content+live-cell+multiplex+screen+for+chemogenomic+compound+annotation+based+on+nuclear+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">High-content live-cell multiplex screen for chemogenomic compound annotation based on nuclear morphology.</a> STAR Protoc. 3 (101791), 1-15 (2022).</li>
<li>Gunn, A. L., Yashchenko, A. I., Dubrulle, J., Johnson, J., Hatch, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-content+screen+reveals+new+regulators+of+nuclear+membrane+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A high-content screen reveals new regulators of nuclear membrane stability.</a> Sci Rep. 14, 6013(2024).</li>
<li>Yu, L., Liu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytosolic+DNA+sensing+by+cGAS%3A+Regulation%2C+function%2C+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytosolic DNA sensing by cGAS: Regulation, function, and human diseases.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 6 (170), 1-14 (2021).</li>
<li>Odinammadu, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+farnesyl+transferase+inhibitor+%28FTI%29+lonafarnib+improves+nuclear+morphology+in+ZMPSTE24-deficient+fibroblasts+from+patients+with+the+progeroid+disorder+MAD-B%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleus%22%5BJournal%5D)">The farnesyl transferase inhibitor (FTI) lonafarnib improves nuclear morphology in ZMPSTE24-deficient fibroblasts from patients with the progeroid disorder MAD-B.</a> Nucleus. 14 (1), 1-14 (2023).</li>
</ol>

核ラミナは、核膜の下にあるフィラメントのネットワークであり、ラミンと呼ばれるタンパク質で構成されています。核ラミナは、核の構造、核孔の位置決め、遺伝子発現制御、クロマチン組織化、DNA複製、およびDNA修復において重要な役割を果たします1,2,3。ラミンタンパク質の発現に関与する遺伝子の突然変異は、ラミノパチー3と呼ばれる遺伝性疾患を引き起こします。
拘束性皮膚症(RD)は、主に ZMPSTE24 遺伝子4に早期終結コドンを生じさせる複合ヘテロ接合体変異によって引き起こされ、メタロプロテアーゼZMPSTE24の欠如につながる重度のラミノパチー障害です。このラミノパチーは、子宮内発育遅延、皮膚の引き締まり、硬直、口が小さい、髪の毛が薄い、骨の石灰化障害1を特徴としています。RD患者は通常、肺機能不全のため、生後1週間を過ぎて生きられません1。非定型ハッチンソン・ギルフォード早老症症候群(AT-HGPS)および下顎骨異形成B型(MAD-B)として知られる他の2つのラミノパシー障害は、ZMPSTE24発現の低下を伴い、寿命の短縮と関連しており、早期老化障害との類似性を示しています5。これらのラミノパチーで影響を受けるZMPSTE24プロテアーゼは、核ラミナの重要な成分であるラミンAの翻訳後修飾に不可欠です。ZMPSTE24欠乏症は、プレラミンA2として知られる不完全に処理されたファルネシル化形態のラミンAの蓄積をもたらします。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67719/67719fig1.jpg"> 
図1:通常のラミンA処理とラミンA処理 RD細胞。正常細胞におけるラミンAプロセッシング経路(左)とRDまたはZMPSTE欠損細胞におけるラミンAプロセッシングの変化(右)。ファルネシル基(Fa)基とメチル基(Me基)が示されています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67719/67719fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
図1に見られるように、通常のラミンAプロセシングでは、C末端付近のシステイン残基にファルネシル(脂質)基が結合し、続いて3つのC末端アミノ酸3,6がタンパク質分解的に切断されます。その後、システイン残基はメチル化されます。これら2つの修飾により、プレラミンAを内核膜2に標的とすることができる。次に、ZMPSTE24、最後の15個のC末端アミノ酸がファルネシル基およびメチル基とともに除去されて成熟ラミンAタンパク質が生成され、これが核ラミナ6,7,8に送達される切断反応を行います。RD、AT-HGPS、およびMAD-Bでは、ZMPSTE24メタロプロテイナーゼが不足しているか、完全に機能していないため、処理の最終ステップが効果的に行われません8,9。これにより、プレラミンAが蓄積し、プレラミンAは永久にファルネシル化およびメチル化されたままになります9。これらの後者のグループにより、プレラミンAは、図1に示すように、成熟したラミンAが最終的に存在するはずの核ラミナに局在するのではなく、内側の核膜に付着します。したがって、ZMPSTE欠損症は、核構造10,11,12,13,14,15とともに、さまざまな核機能に深刻な影響を及ぼします。これらの核構造の変化には、核のブレブや核の破裂さえ含まれ、その結果、DNAが細胞質に漏れたり、細胞質が核に侵入したりする可能性があります。異常形状の核は、プレラミンAプロセッシング16,17の欠陥によって引き起こされる他の多くの表現型とともに、確かにラミノパシー障害の特徴です。核ラミナの欠損は、核タンパク質の品質管理や核質中のDNA修復タンパク質の誤局在化など、多くの有害な影響をもたらし、その結果、核機能に多数の欠陥が生じる18。ラミノパチーのこれらの特徴を特定および監視するのに役立つ簡単な技術を持つことが重要です ラミノパチーの表現型を改善することを目的とした治療アプローチの開発に関する研究を促進します。ラミノパチーのマウスでは、核ブレブの消失がラミノパチーの表現型の一般化された消失と相関することが示されています16。ヒト細胞の核完全性のモニタリングを可能にする技術は、疾患の表現型を排除したり、大幅に改善したりするための潜在的な治療法の研究を強化する可能性があります。
間接免疫蛍光法(IF)は、一次非標識抗体と、一次抗体を認識する蛍光色素標識二次抗体の両方を使用して目的の標的を検出する高感度で広く使用されている技術です19。IF法は、特定の細胞内成分や構造を可視化するための強力な手段を提供します。また、複数の二次抗体分子が一次抗体と相互作用し、シグナル19の増幅をもたらすことも可能である。間接IFは、比較的小さな二次抗体のセットで複数の一次抗体を検出できる汎用性の高い手法であり、二次抗体は一次抗体のFcドメインに対して産生され、これは分子種19内で保存されています。
この記事では、二本鎖DNA(dsDNA)に対する抗体(dsDNA)とラミンB1を使用してDNAと核ラミナをそれぞれ検出し、ZMPSTE24欠損細胞の核ブレブとDNA漏出を評価する間接的(IF)方法について説明します。このアプローチの有用性を実証するために、この手順をノックアウトされたZMPSTE24発現を持つHeLa細胞株と、ZMPSTE24を発現するHeLa細胞株に適用し、2つの細胞株の結果を比較しました。

<table><tbody><tr><td>22 mm角ガラスカバースリップ</td><td>Propper Manufacturing Company</td><td>M8710</td><td>標準的な顕微鏡スライドに固定できるものであれば、任意のサイズまたは形状を使用できます。&nbsp;</td></tr><tr><td>36.5% ホルムアルデヒド</td><td>Σ アルドリッチ</td><td>F8775</td><td>固定試薬&nbsp;</td></tr><tr><td>75 cm 2 フラスコ</td><td>Corning</td><td>430725U</td><td>細胞培養用&nbsp;</td></tr><tr><td>ウシ血清アルビナム(BSA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>9048-46-8</td><td>抗体希釈バッファー&nbsp;</td></tr><tr><td>1 g/L グルコース、L-グルタミン、ピルビン酸ナトリウムを含む DMEM</td><td>Corning</td><td>10-014-CV</td><td>細胞培養用。</td></tr><tr><td>エタノール(200プルーフ)</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td>マウント前のサンプルの脱水用で、希釈して複数の濃度にします。&nbsp;</td></tr><tr><td>EVOS FL デジタル倒立蛍光顕微鏡</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-563-460</td><td>イメージング.&nbsp;</td></tr><tr><td>フィッシュゼラチン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>G7041</td><td>抗体希釈バッファー。</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td>光退色防止用封入剤&nbsp;</td></tr><tr><td>パラフィルム (4 in)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-374-12</td><td>使用するカバーガラスが収まる限り、任意のサイズで代用できます。&nbsp;</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td>細胞培養用&nbsp;</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>組織培養と溶液のために実験室で製造され、滅菌されています。</td></tr><tr><td>プレミアムウシ胎児血清(FBS)</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>細胞培養用&nbsp;</td></tr><tr><td>スーパーフロストプレミアム顕微鏡スライド</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-544-7</td><td>標準的な顕微鏡スライドなら何でも使用できます。&nbsp;</td></tr><tr><td>組織培養処理済み 6ウェル平底プレート</td><td>Falcon</td><td>353046</td><td>細胞培養用&nbsp;</td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>A16046。AP</td><td>洗濯用。</td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA (0.5%)</td><td>Gibco</td><td>15-400-054</td><td>細胞培養用&nbsp;</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Scientific</td><td>9005-64-5</td><td>細胞浸透試薬.&nbsp;</td></tr></tbody></table>

免疫蛍光法による哺乳類細胞の核ブレブとdna漏出の検出

Detection of Nuclear Blebbing and DNA Leakage in Mammalian Cells by Immunofluorescence

本研究では、二本鎖DNA(dsDNA)と併せて核ラミナを可視化するIF法を紹介します。IFが実行されると、キャプチャされた画像に核ブレブの兆候やDNA漏洩の兆候がないか調べることができます。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67719/67719fig2.jpg"> 
図2:HeLa CT細胞およびZMPSTE24 KO細胞における核ブレブ。ブレッブされた核の頻度を決定するために使用される両方の細胞株の代表的な画像。(A)赤色(Alexa Fluor 594標識二次体)を使用して、細胞の核ラミナ(Lamin B1)を視覚化しました。ブレブを示さない核の...

免疫蛍光法による哺乳類細胞の核ブレブとDNA漏出の検出

The nuclear lamina is a network of filaments underlying the nuclear membrane, composed of lamins and lamin-associated proteins. It plays critical roles in ...

detection-nuclear-blebbing-dna-leakage-mammalian-cells

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

生きた細胞内の個々のDNA分子を観察する方法が記載されている。技術は目的のDNAに組み換え結合部位に蛍光標識lacリプレッサータンパク質の結合に基づいています。この方法は、時間をかけて生きている細胞内の多くの組換えDNAをたどるように適応させることができる。...

蛍光顕微鏡法による、複数世代にわたってライブ哺乳類細胞におけるプラスミドの複製を監視

この動画では、照射した細胞核の二本鎖DNA切断部位におけるDNA修復タンパク質γH2AXと53BP1の局在を可視化する免疫蛍光法について解説します。...

免疫蛍光法によるDNA修復タンパク質相互作用の可視化

このビデオでは、ヒト単核細胞のDNA二本鎖切断部位に局在する特定のDNA損傷応答タンパク質を検出する免疫蛍光顕微鏡法について説明します。タンパク質は特定の一次抗体によって認識され、その抗体は蛍光色素でタグ付けされた二次抗体に結合し、顕微鏡での可視化中に蛍光を発するため、タンパク質を細胞核内の明確な蛍光病巣として可視化することができます。...

DNA二本鎖切断の分析のための免疫蛍光顕微鏡

この論文は、蛍光標識ナノ粒子のエンドサイトーシス後の細胞内遺伝子発現を直接生細胞内で検出することを可能にする新しい技術について説明しています。この方法は、細胞の操作を必要とせず、標的遺伝子または種に関して制限されない。...

蛍光標識ナノ粒子を用いたマウス、ヒトおよびブタ起源のライブ細胞の細胞内遺伝子発現の検出

ここでは、 in situ Proximity Ligation Assay（PLA）を使用して、遺伝毒性ストレスに曝された懸濁細胞培養におけるATMとp53との間の直接タンパク質 - タンパク質相互作用の検出および可視化を実証する。...

近接ライゲーションアッセイを用いた懸濁細胞培養におけるDNA損傷誘発タンパク質複合体の検出と可視化

レーザー microirradiation は、細胞の DNA 修復の研究のための便利なツールです。様々 な DNA 損傷を誘発する UVA レーザーの使用のための方法論的アプローチが表示されます。正常な細胞周期; を維持するローカルの microirradiation...

タンパク質-タンパク質相互作用や DNA 損傷速度論を研究する共焦点の顕微鏡検査の技術を高度な

DNA 損傷を誘発するおよび選択したサブ核領域の DNA 修理蛋白質の応答を監視するための共焦点レーザー蛍光顕微鏡とレーザ...

マイクロ レーザーの単一の試験と哺乳類細胞における二重鎖切断修復のためのアプリケーション

住セルイメージ投射は、固定細胞イメージングだけで達成可能ではない単一セルまたは全体人口の豊富な情報を提供します。ここでは、下記の抗有糸分裂薬パクリタ キセルで治療細胞運命決定を評価する生細胞イメージング...

長期的な住セルイメージ投射細胞の運命をパクリタ キセルに応答を評価するために

蛍光顕微鏡を用いた過渡的長期的な二本鎖 DNA 切断の DNA 修復プロセスの特性

ホウ素中性子捕捉療法(BNCT)に用いられる中性子混合ビームによる放射線誘発DNA損傷応答は完全には確立されていない。このプロトコルは、中性子混合ビームを照射した後のヒト大腸癌細胞株における免疫蛍光染色による修復タンパク質の放射線誘発病巣(RIF)を検出するためのステップバイステップの手順を提供する。...

ヒト大腸癌細胞におけるDNA損傷および修復病巣の免疫蛍光イメージング

本プロトコールでは、細胞周期のS/G2期におけるDNA二本鎖末端切除を免疫蛍光ベースの方法を用いて可視化する方法を実証する。...

BrdU-DNA標識と細胞周期判別イメージングを用いたグローバルDNA二本鎖末端切除の評価

学ぶ免疫蛍光法による核ブレブとDNA漏出の検出手法。HeLa細胞を用いてラミノパチーとDNA修復不全の関連を可視化し、Hutchinson-Gilfordプロゲリア症候群の病態理解に貢献する。

免疫蛍光法による哺乳類細胞の核ブレブとDNA漏出の検出

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