Name: CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネ ッタイシマカ のゲノム編集 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: 学ぶ CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネッタイシマカのゲノム編集法。ノックアウト・ノックイン系統の作製、QFトランスアクティベーター挿入による遺伝子発現制御、蛍光マーカーGFPやG-CaMP6を用いた組織特異的標識と神経活動レポーター解析の手法を解説します。

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<ol><li>Anzalone, A. V., Koblan, L. W., Liu, D. R. Genome editing with CRISPR-Cas nucleases, base editors, transposases and prime editors. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAnzalone%2C+AV+%22Nat+Biotechnol%22">Nat Biotechnol</a>. 38 (7), 824-844 (2020).</li>
<li>Garneau, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR%2FCas+bacterial+immune+system+cleaves+bacteriophage+and+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CRISPR/Cas bacterial immune system cleaves bacteriophage and plasmid DNA.</a> Nature. 468 (7320), 67-71 (2010).</li>
<li>Jinek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+programmable+dual-RNA-guided+DNA+endonuclease+in+adaptive+bacterial+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity.</a> Science. 337 (6096), 816-821 (2012).</li>
<li>Shen, H., Li, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+double-strand+break+repairs+and+their+application+in+plant+DNA+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">DNA double-strand break repairs and their application in plant DNA integration.</a> Genes (Basel). 13 (2), 322(2022).</li>
<li>Vinauger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+host+learning+in+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of host learning in Aedes aegypti mosquitoes.</a> Curr Biol. 28 (3), 333-344.e8 (2018).</li>
<li>Li, M., Bui, M., Yang, T., Bowman, C. S., White, B. J., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Germline+Cas9+expression+yields+highly+efficient+genome+engineering+in+a+major+worldwide+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Germline Cas9 expression yields highly efficient genome engineering in a major worldwide disease vector.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (49), E10540-E10549 (2017).</li>
<li>Chaverra-Rodriguez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+CRISPR-Cas9+ribonucleoprotein+into+arthropod+ovaries+for+heritable+germline+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of CRISPR-Cas9 ribonucleoprotein into arthropod ovaries for heritable germline gene editing.</a> Nat Commun. 9 (1), 3008(2018).</li>
<li>Rouyar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+line+for+characterizing+GABA-receptor+expression+to+study+the+neural+basis+of+olfaction+in+the+yellow-fever+mosquito%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic line for characterizing GABA-receptor expression to study the neural basis of olfaction in the yellow-fever mosquito.</a> Front Physiol. 15, 1381164(2024).</li>
<li>Ang, J. X. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+homology-based+DNA+repair+in+mosquitoes%3A+Impact+of+sequence+heterology+and+donor+template+source%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Considerations for homology-based DNA repair in mosquitoes: Impact of sequence heterology and donor template source.</a> PLoS Genet. 18 (2), e1010060(2022).</li>
<li>Zhang, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+precise+knockin+with+a+double+cut+HDR+donor+after+CRISPR%2FCas9-mediated+double-stranded+DNA+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient precise knockin with a double cut HDR donor after CRISPR/Cas9-mediated double-stranded DNA cleavage.</a> Genome Biol. 18 (1), 35(2017).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technological+advances+in+mosquito+olfaction+neurogenetics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Technological advances in mosquito olfaction neurogenetics.</a> Trends Genet. 39 (2), 154-166 (2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+sex+determination+to+suppress+mosquito+populations%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Targeting sex determination to suppress mosquito populations.</a> eLife. 12, RP90199(2024).</li>
<li>Zhan, Y., Alonso San Alberto, D., Rusch, C., Riffell, J. A., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elimination+of+vision-guided+target+attraction+in+Aedes+aegypti+using+CRISPR%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biol%22%5BJournal%5D)">Elimination of vision-guided target attraction in Aedes aegypti using CRISPR.</a> Current Biol. 31 (18), 4180-4187.e6 (2021).</li>
<li>Greppi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosquito+heat+seeking+is+driven+by+an+ancestral+cooling+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mosquito heat seeking is driven by an ancestral cooling receptor.</a> Science. 367 (6478), 681-684 (2020).</li>
<li>Potter, C. J., Tasic, B., Russler, E. V., Liang, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Q+system%3A+a+repressible+binary+system+for+transgene+expression%2C+lineage+tracing%2C+and+mosaic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The Q system: a repressible binary system for transgene expression, lineage tracing, and mosaic analysis.</a> Cell. 141 (3), 536-548 (2010).</li>
<li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+and+expanded+Q-system+reagents+for+genetic+manipulations%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Improved and expanded Q-system reagents for genetic manipulations.</a> Nat Methods. 12 (3), 5 p following 222 219-222 (2015).</li>
<li>Labun, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CHOPCHOP+v3%3A+expanding+the+CRISPR+web+toolbox+beyond+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CHOPCHOP v3: expanding the CRISPR web toolbox beyond genome editing.</a> Nucleic Acids Res. 47 (W1), W171-W174 (2019).</li>
<li>Concordet, J. -P., Haeussler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPOR%3A+intuitive+guide+selection+for+CRISPR%2FCas9+genome+editing+experiments+and+screens%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">CRISPOR: intuitive guide selection for CRISPR/Cas9 genome editing experiments and screens.</a> Nucleic Acids Res. 46 (W1), W242-W245 (2018).</li>
<li>Williams, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+fitness+costs+in+transgenic+Aedes+aegypti+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Quantifying fitness costs in transgenic Aedes aegypti mosquitoes.</a> J Vis Exp. , e65136(2023).</li>
<li>Bassett, A. R., Tibbit, C., Ponting, C. P., Liu, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+targeted+mutagenesis+of+Drosophila+with+the+CRISPR%2FCas9+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Highly efficient targeted mutagenesis of Drosophila with the CRISPR/Cas9 system.</a> Cell Rep. 4 (1), 220-228 (2013).</li>
<li>Coutinho-Abreu, I. V., Zhu, K. Y., Ramalho-Ortigao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenesis+and+paratransgenesis+to+control+insect-borne+diseases%3A+current+status+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol+Int%22%5BJournal%5D)">Transgenesis and paratransgenesis to control insect-borne diseases: current status and future challenges.</a> Parasitol Int. 59 (1), 1-8 (2010).</li>
<li>Christian, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+DNA+double-strand+breaks+with+TAL+effector+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Targeting DNA double-strand breaks with TAL effector nucleases.</a> Genetics. 186 (2), 757-761 (2010).</li>
<li>Kim, Y. G., Cha, J., Chandrasegaran, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid+restriction+enzymes%3A+zinc+finger+fusions+to+Fok+I+cleavage+domain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hybrid restriction enzymes: zinc finger fusions to Fok I cleavage domain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93 (3), 1156-1160 (1996).</li>
<li>DeGennaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((orco+mutant+mosquitoes+lose+strong+preference+for+humans+and+are+not+repelled+by+volatile+DEET%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">orco mutant mosquitoes lose strong preference for humans and are not repelled by volatile DEET.</a> Nature. 498 (7455), 487-491 (2013).</li>
<li>McMeniman, C. J., Corfas, R. A., Matthews, B. J., Ritchie, S. A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+integration+of+carbon+dioxide+and+other+sensory+cues+drives+mosquito+attraction+to+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal integration of carbon dioxide and other sensory cues drives mosquito attraction to humans.</a> Cell. 156 (5), 1060-1071 (2014).</li>
<li>Lobo, N. F., Clayton, J. R., Fraser, M. J., Kafatos, F. C., Collins, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+efficiency+germ-line+transformation+of+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High efficiency germ-line transformation of mosquitoes.</a> Nat Protoc. 1 (3), 1312-1317 (2006).</li>
<li>Kistler, K. E., Vosshall, L. B., Matthews, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+engineering+with+CRISPR-Cas9+in+the+mosquito+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Genome engineering with CRISPR-Cas9 in the mosquito Aedes aegypti.</a> Cell Rep. 11 (1), 51-60 (2015).</li>
<li>Handler, A. M., Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2nd+Transformation+of+the+Caribbean+fruit+fly%2C+Anastrephasuspensa%2C+with+a+piggyBac+vector+marked+with+polyubiquitin-regulated+GFP%5BTitle%5D)+AND+%22Insect+Biochem+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">2nd Transformation of the Caribbean fruit fly, Anastrephasuspensa, with a piggyBac vector marked with polyubiquitin-regulated GFP.</a> Insect Biochem Mol Biol. 31 (2), 199-205 (2001).</li>
<li>Harrell, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarrell%2C+RA+%222nd+Mosquito+embryo+microinjection+under+halocarbon+oil+or+in+aqueous+solution%22">2nd Mosquito embryo microinjection under halocarbon oil or in aqueous solution</a>. 2024 (7), Cold Spring Harb Protoc. (2024).</li>
<li>Sun, R., Raban, R., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+mutant+strains+with+transgenic+Cas9%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generating mutant strains with transgenic Cas9.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 671-678 (2023).</li>
<li>Giraldo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+neurogenetic+toolkit+to+decode+olfaction+in+the+African+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An expanded neurogenetic toolkit to decode olfaction in the African malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Cell Rep Methods. 4 (2), 100714(2024).</li>
<li>Liu, G., Lin, Q., Jin, S., Gao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CRISPR-Cas+toolbox+and+gene+editing+technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">The CRISPR-Cas toolbox and gene editing technologies.</a> Mol Cell. 82 (2), 333-347 (2022).</li>
<li>Chu, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+the+efficiency+of+homology-directed+repair+for+CRISPR-Cas9-induced+precise+gene+editing+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Increasing the efficiency of homology-directed repair for CRISPR-Cas9-induced precise gene editing in mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 33 (5), 543-548 (2015).</li>
<li>Laursen, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humidity+sensors+that+alert+mosquitoes+to+nearby+hosts+and+egg-laying+sites%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Humidity sensors that alert mosquitoes to nearby hosts and egg-laying sites.</a> Neuron. 111 (6), 874-887.e8 (2023).</li>
<li>Weng, S. -C., Antoshechkin, I., Marois, E., Akbari, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+sex+separation+by+exploiting+differential+alternative+splicing+of+a+dominant+marker+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Efficient sex separation by exploiting differential alternative splicing of a dominant marker in Aedes aegypti.</a> PLoS Genet. 19 (11), e1011065(2023).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+confinable+gene+drive+system+in+the+human+disease+vector%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Development of a confinable gene drive system in the human disease vector.</a> eLife. 9, e51701(2020).</li>
<li>Dalla Benetta, E., et al. Engineered Antiviral Sensor Targets Infected Mosquitoes. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDalla+Benetta%2C+E+%22The+CRISPR+journal%22">The CRISPR journal</a>. 6 (6), 543-556 (2023).</li>
<li>Li, H. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-Type+lectins+link+immunological+and+reproductive+processes+in+Aedes+aegypti%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">C-Type lectins link immunological and reproductive processes in Aedes aegypti.</a> iScience. 23 (9), 101486(2020).</li>
<li>van Oers, M. M., Vlak, J. M., Voorma, H. O., Thomas, A. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+3%27+untranslated+region+of+baculovirus+p10+mRNA+in+high-level+expression+of+foreign+genes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Role of the 3' untranslated region of baculovirus p10 mRNA in high-level expression of foreign genes.</a> J Gen Virol. 80 (Pt 8), 2253-2262 (1999).</li>
<li>Salem, T. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+SV40+polyA+on+gene+expression+of+baculovirus+expression+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">The influence of SV40 polyA on gene expression of baculovirus expression vector systems.</a> PloS One. 10 (12), e0145019(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Cas9反応バッファーPNA</td><td>Bio&nbsp;</td><td>CB01</td><td></td></tr><tr><td>ベンチリング ソフトウェア</td><td>ベンチリング</td><td>N/A</td><td>www.benchling.com</td></tr><tr><td>Cas9 希釈バッファー</td><td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CB03</td><td></td></tr><tr><td>Cas9</td>タンパク質<td>PNA Bio&nbsp;</td><td>CP01-50</td><td></td></tr><tr><td>DH5&α 大腸菌 コンピテント セル</td><td>ニューイングランド バイオラボ</td><td>C2987</td><td></td></tr><tr><td>両面粘着テープ</td><td>スコッチ パーマネント</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>ショウジョウバエ バイアル</td><td>ジェネシー サイエンティフィック&nbsp;</td><td>32-109</td><td></td></tr><tr><td>ろ紙&nbsp;</td><td>GEヘルスケアライフサイエンス&nbsp;</td><td>1450-042</td><td></td></tr><tr><td>魚の餌&nbsp;</td><td>テトラ</td><td>B00025Z6YI</td><td>金魚フレーク&nbsp;</td></tr><tr><td>フラッグス</td><td>ジェネシーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>AS273</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td>ライ<td>カマイクロシステムズ&nbsp;</td><td>&nbsp;M165 FC</td><td></td></tr><tr><td>遺伝子フラグメント</td>統合<td>DNAテクノロジー</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>gRNA</td><td>Synthego</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ハロカーボンオイル700&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8898</td><td></td></tr><tr><td>射出顕微鏡</td><td>Leica Microsystems&nbsp;</td><td>DM2000</td><td></td></tr><tr><td>JM109 &nbsp;大腸菌コンピテントセル&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>T3005</td><td></td></tr><tr><td>マイクロインジェクター</td><td>Eppendorf</td><td></td><td>FemtoJet 4x&nbsp;</td></tr><tr><td>フェムトチップを充填するためのマイクロローダーチップ&nbsp;</td><td>エッペンドルフ</td><td>E5242956003</td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター&nbsp;</td><td>エッペンドルフ</td><td></td><td>トランスファーマン 4r&nbsp;</td></tr><tr><td>マイクロピペットプーラー&nbsp;</td><td>サッター機器&nbsp;</td><td>P-2000</td><td></td></tr>顕<tr><td>微鏡カバーガラス&nbsp;</td><td>フィッシャーブランド&nbsp;</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド&nbsp;</td><td>Eisco</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>マウスの血液 (給餌に使用される生きたマウス)</td><td>カリフォルニア大学</td><td>IACUC、動物使用プロトコル #S17187</td><td>蚊の血液供給に使用されます。詳細は動物倫理プロトコルに準拠</td></tr>しています <tr><td>NEB Q5 ハイフィデリティ DNA ポリメラーゼ&nbsp;</td><td>ニューイングランド バイオラボ</td><td>M0491S</td><td></td></tr><tr><td>PCR 精製キット</td><td>Qiagen</td><td>28004</td><td></td></tr><tr><td>プラスミド ミニプレップ キット&nbsp;</td><td>Zymo Research</td><td>D4036</td><td></td></tr><tr><td>クォーツ フィラメント&nbsp;</td><td>Sutter Instruments</td><td>QF100-70-10</td><td></td></tr><tr><td>転写クリーンアップキット</td><td>Fisher Scientific</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>超純水&nbsp;</td><td>ライフテクノロジーズ</td><td>10977-023</td><td></td></tr></tbody></table>

crispr-cas9を用いた黄熱病ネ ッタイシマカ のゲノム編集

Genome Editing in the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti using CRISPR-Cas9

HDR相同組換えのためのgRNA媒介遺伝子ターゲティングの設計と検証 目的の遺伝子を正確に標的にするために、いくつかのgRNAを選択し、5'および3'相同性アームを切断部位の近くに配置して、HDRを介した相同組換えを行うことをお勧めします(図1A)。例えば、目的遺伝子の開始コドンの両側を標的とする2つのgRNAを設計し、QF2-Hsp70-OpIE2-ECFP-SV40カセットをマーカーとして、HDR機構を介して1kbの相同性アームを介して標的遺伝子に挿入しました(図1B)。二本鎖切断は、gRNAの切断部位間の短いDNA断片の欠失につながります(図1A)。
gRNAの切断効率と標的遺伝子を切断する能力を、 in vitro</e...

CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネ ッタイシマカ のゲノム編集

The emergence of the clustered, regularly interspersed, short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 technology has revolutionized the genetic engineering ...

genome-editing-yellow-fever-mosquito-aedes-aegypti-using-crispr

Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

このビデオでは、胚マイクロインジェクション技術を通じて、ハマダラカの蚊の胚への遺伝子ドライブ構築物の送達を実演します。この手順により、相同組換えを通じて送達されたDNAコンストラクトを生殖細胞に統合し、形質転換された蚊の集団を生成することができます。...

蚊胚マイクロインジェクション:ハマダラカの胚卵黄に外因性DNAを送達して生殖細胞変異を生成する技術

GlmSを生成する手法について述べる-熱帯熱マラリア原虫CRISPR/Cas9...

作る条件付き変異体の人間のマラリア原虫マラリアに CRISPR/Cas9 遺伝子の編集

このプロトコルは、CRISPR/Cas9遺伝子編集ツールで動作するように最適化された Culex quinquefasciatus...

キュレックス・キンケファシアトゥスにおける効率的な部位特異的変異誘発のための胚微小注入技術

CRISPR/Cas9は、非モデル生物の遺伝子機能を特徴付けるためにますます使用されています。このプロトコルは、注射ミックスの調製から蚊の胚の取得と注入に、および必要な突然変異のために注入された蚊とその子孫を飼育、横断、およびスクリーニングする方法に 、Culex...

CRISPR/Cas9を使用してヌル突然変異を生成するための Culex 蚊の胚の調製と注入

このプロトコルは、胚の採取、注射、昆虫飼育、同定、および目的の突然変異の選択など、砂ハエにおけるCRISPR/Cas9標的突然変異のステップを詳述する。...

CRISPR/Cas9突然変異誘発のためのサンドフライ(フレボトムスパパタシ)胚微小注射

ここでは、CRISPR/Cas9ゲノム編集によって作成された Helicoverpa armigera...

CRISPR/Cas9ゲノム編集 ヘリコベルパ・アルミゲラ (Hübner)の胚マイクロインジェクションとノックアウト変異体の同定

このプロトコルは、φC31システムを使用してアノフェレスマラリア蚊のゲノムにおいて部位特異的修飾を達成する方法を記述している。記載される改変には、attP含有ドッキングラインのゲノムにおけるトランスジェニックカセットの統合および交換の両方が含まれる。...

マラリアのアノフェレスベクターにおける部位特異的φC31媒介集積分とカセット交換

この記事では、CRISPR/Cas9によって誘導されるインデルの迅速な同定と、高解像度の溶融分析を用いた蚊 Aedes aegypti の突然変異線の選択のためのプロトコルについて詳しく説明します。...

モスキートAedes aegyptiにおける高解像度メルト分析を用いたCRISPR/Cas9突然変異誘発に続くインデル検出

この論文は、オリエンタルショウジョウバエBactrocera dorsalisのCRISPR/Cas9突然変異誘発のための段階的なプロトコルを提示します。この標準化されたプロトコルによって提供される詳細な手順は、B.

オリエンタルショウジョウバエバクトセラ背側のCRISPR/Cas9変異誘発のためのプロトコル

本プロトコルでは、 ネッタイシマカ...

トランスジェニック ネッタイシマカ の適応コストの定量化

学ぶ CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネッタイシマカのゲノム編集法。ノックアウト・ノックイン系統の作製、QFトランスアクティベーター挿入による遺伝子発現制御、蛍光マーカーGFPやG-CaMP6を用いた組織特異的標識と神経活動レポーター解析の手法を解説します。

CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネ ッタイシマカ のゲノム編集

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CRISPR-Cas9を用いた黄熱病ネッタイシマカのゲノム編集