Name: マウス脳脊髄サンプルの抽出および組織透明化調製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: 学ぶマウス脳脊髄サンプルの抽出と組織透明化調製法。蛍光信号を保持したまま全脳・脊髄を可視化し、神経構造の詳細なマッピングと神経免疫相互作用の研究に貢献します。

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<ol><li>Ueda, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+clearing+and+its+applications+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tissue clearing and its applications in neuroscience.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (2), 61-79 (2020).</li>
<li>Tainaka, K., Kuno, A., Kubota, S. I., Murakami, T., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+principles+in+tissue+clearing+and+staining+protocols+for+whole-body+cell+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical principles in tissue clearing and staining protocols for whole-body cell profiling.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 32, 713-741 (2016).</li>
<li>Susaki, E. A., Ueda, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-body+and+whole-organ+clearing+and+imaging+techniques+with+single-cell+resolution%3A+Toward+organism-level+systems+biology+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Whole-body and whole-organ clearing and imaging techniques with single-cell resolution: Toward organism-level systems biology in mammals.</a> Cell Chem Biol. 23 (1), 137-157 (2016).</li>
<li>Wu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+nociceptor+neurons+in+the+spleen+promotes+germinal+center+responses+and+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Innervation of nociceptor neurons in the spleen promotes germinal center responses and humoral immunity.</a> Cell. 187 (12), 2935-2951.e19 (2024).</li>
<li>Liu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+innervations+modulate+the+lung+innate+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic innervations modulate the lung innate immune responses.</a> Sci Adv. 6 (20), eaay1497(2020).</li>
<li>Qi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDISCO%3A+Advanced+solvent-based+clearing+method+for+imaging+whole+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">FDISCO: Advanced solvent-based clearing method for imaging whole organs.</a> Sci Adv. 5 (1), eaau8355(2019).</li>
<li>Bagnoli, S., Terzibasi Tozzini, E., Cellerino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-Brain+clearing+and+immunofluorescence+in+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Whole-Brain clearing and immunofluorescence in Nothobranchius furzeri.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2023 (9), 698-704 (2023).</li>
<li>Lu, T., Shinozaki, M., Nagoshi, N., Nakamura, M., Okano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+imaging+of+supraspinal+inputs+to+the+thoracic+and+lumbar+spinal+cord+mapped+by+retrograde+tracing+and+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">3D imaging of supraspinal inputs to the thoracic and lumbar spinal cord mapped by retrograde tracing and light-sheet microscopy.</a> J Neurochem. 162 (4), 352-370 (2022).</li>
<li>Saritas, T., Puelles, V. G., Su, X. T., Ellison, D. H., Kramann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+clearing+and+imaging+of+immunolabeled+kidney+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optical clearing and imaging of immunolabeled kidney tissue.</a> J Vis Exp. (149), e60002(2019).</li>
<li>Song, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+mapping+of+single+neurons+by+calibrated+3D+reconstruction+of+brain+slices+reveals+topographic+projection+in+mouse+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise mapping of single neurons by calibrated 3D reconstruction of brain slices reveals topographic projection in mouse visual cortex.</a> Cell Rep. 31 (8), 107682(2020).</li>
<li>Fournel, R., Veruki, M. L., Hartveit, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Digital+reconstruction+and+quantitative+morphometric+analysis+of+bipolar+cells+in+live+rat+retinal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Digital reconstruction and quantitative morphometric analysis of bipolar cells in live rat retinal slices.</a> J Comp Neurol. 530 (10), 1700-1728 (2022).</li>
<li>Lin, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-type-specific+and+projection-specific+brain-wide+reconstruction+of+single+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell-type-specific and projection-specific brain-wide reconstruction of single neurons.</a> Nat Methods. 15 (12), 1033-1036 (2018).</li>
<li>Peng, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+histological+assessment+of+prostate+specimens+in+the+three-dimensional+space+by+hydrophilic+tissue+clearing+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Rapid histological assessment of prostate specimens in the three-dimensional space by hydrophilic tissue clearing and confocal microscopy.</a> J Histochem Cytochem. 70 (8), 597-608 (2022).</li>
<li>Singhal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+histomorphometric+changes+in+tissue+architecture+in+relation+to+alteration+in+fixation+protocol+-+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Diagn+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of histomorphometric changes in tissue architecture in relation to alteration in fixation protocol - An in vitro study.</a> J Clin Diagn Res. 10 (8), ZC28-ZC32 (2016).</li>
<li>Tainaka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+landscape+for+tissue+clearing+based+on+hydrophilic+reagents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Chemical landscape for tissue clearing based on hydrophilic reagents.</a> Cell Rep. 24 (8), 2196-2210.e9 (2018).</li>
<li>Lee, S. H., Son, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+wave%2C+late-stage+neuroinflammation+in+cleared+brains+of+aged+5xFAD+Alzheimer%27s+mice+detected+by+macrolaser+light+sheet+microscopy+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Second wave, late-stage neuroinflammation in cleared brains of aged 5xFAD Alzheimer's mice detected by macrolaser light sheet microscopy imaging.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 242317058(2023).</li>
<li>Zhao, J., Lai, H. M., Qi, Y., He, D., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+status+of+tissue+clearing+and+the+path+forward+in+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Current status of tissue clearing and the path forward in neuroscience.</a> ACS Chem Neurosci. 12 (1), 5-29 (2021).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385 (6713), eadm6869(2024).</li>
<li>Ou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Achieving+optical+transparency+in+live+animals+with+absorbing+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Achieving optical transparency in live animals with absorbing molecules.</a> Science. 385, eadm6869(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1mlシリンジ山</td><td>東Weigaoグループメディカル</td>ポリマー502<td></td><td></td></tr>接<tr><td>着剤</td><td>Deliグループ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BDインスリンシリンジ</td><td>Becton、Dickinsonおよび&nbsp;会社</td><td>328421</td><td></td></tr><tr><td>曲げ歯付き解剖鉗子</td><td>Jinzhong</td><td>JD1050</td><td></td></tr><tr><td>円形スチールクランプ</td><td>Weili</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ</td><td>Jinzhong</td><td>y00030</td><td></td></tr><tr><td>歯で曲げた止血鉗子</td><td>Jinzhong</td><td>J31020</td><td></td></tr><tr><td>歯付きストレート止血鉗子</td><td>Jinzhong</td><td>J31010</td><td></td></tr><tr><td>輸液針 0.7mm</td><td>Kindly Group</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ライトボックススケールライン</td><td>Nuohai ライフサイエン</td>ス <td>NH210901</td><td></td></tr><tr><td>顕微解剖ストレート鉗子</td><td>Jinzhong</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>NobeliumSoftware</td><td>Nuohai Life Science</td><td>スキャンソフトウェア</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH1000</td><td></td></tr><tr><td>蠕動ポンプヘッド</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH-15</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>ヘパリンナトリウム</td><td>Shanghai Pharma</td><td>H31022051</td><td></td></tr><tr><td>STOCK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J 株マウス</td><td>Jackson Laboratory</td><td>007788</td><td></td></tr><tr><td>ストレート歯状解剖鉗子</td><td>Jinzhong</td><td>JD1060</td><td></td></tr><tr><td>組織クリアリングキット (親湿性)</td><td>Nuohai Life Science</td><td>NH-CR-210701</td><td></td></tr><tr><td>組織培養処理機 100mm x 20mm</td><td>NEST</td><td>704001</td><td></td></tr><tr><td>組織はさみ</td><td>Jinzhong</td><td>J21040</td><td></td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>ヴィーナスハサミ</td><td></td><td>Jinzhong YBC010</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス脳脊髄サンプルの抽出および組織透明化調製

Extraction and Tissue Clearing Preparation of Mouse Brain-Spinal Cord Samples

このプロトコルは、STOCK Tg (Thy1-EGFP) MJrs/J系統の雄マウスの脊髄に接続された全脳を成功裏に分離します。また、サンプルを透明にし、蛍光シグナルが完全に保存および捕捉されることを保証し、元の蛍光の完全性を維持する鮮明で詳細な画像を提供します。
図1は無傷の脳脊髄を示しており、このプロトコルで概説されている解剖手順が正確であることを示しています。さらに、組織の透明化は高精度で行われ、複雑な神経構造を視覚化できる透明な標本が生成されました。さらに、 図2 は、蛍光シグナルイメージングを行った脳脊髄サンプルが非常によく保存されており、元の蛍光の完全性を保持した鮮明で詳細な画像を提供していることを示しています。 図3 は、 <strong class="xfi...

Neuroscience research focused on the central nervous system necessitates a thorough understanding of various factors, including cell distribution, ...

extraction-tissue-clearing-preparation-mouse-brain-spinal-cord

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は経心臓的マウスの灌流、脳の除去と切片だけでなく、免疫ペルオキシダーゼ染色、樹脂の埋め込み、および脳切片の切片極薄のためのプロトコルについて説明します。これらの手順が完了すると、免疫染色の材料は、透過型電子顕微鏡による検査のための準備ができています。...

免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備

マウス脳の特定の領域におけるRNA発現プロファイリングには、正確で再現性のある組織採取戦略が必要です。ここでは、冠状断による脳切断と組織コーラーを用いたマイクロダイセクションの両方を併用するプロトコルについて説明します。得られたサンプルから抽出した全RNAの収量と品質により、本手法の有用性が確認されています。...

トータルRNAの単離およびダウンストリーム次世代シーケンシングと遺伝子発現プロファイリングのための離散マウスの脳領域のマイクロダイセクションのための非レーザーキャプチャー顕微鏡のアプローチ

マウス脳皮質から翻訳後のアクティブな、無傷のsynaptoneurosomes（SNS）を準備する方法について説明する。方法は、アクティブなSNの迅速な作成を可能にする不連続パーコール-ショ糖密度勾配を使用しています。...

不連続パーコール-ショ糖密度勾配を用いてマウスの皮質からSynaptoneurosomesの調製

全体マウス器官の多光子顕微鏡は、光学的にイメージを作成する前に臓器をクリアすることにより可能ですが、そうでない場合、すべてのプロトコルは、蛍光タンパク質の蛍光信号を保持します。エタノールベースの​​脱水およびベンジルアルコールを用いて光学クリア方法を使用する場合：安息香酸ベンジルのクリアは、YFPを発現全体のマウスの脳の高解像度多画像を示す。...

YFPを発現クリアマウス脳の多光子顕微鏡

このビデオでは、ダウンストリーム分析のために凍結マウス脳組織切片を準備するための詳細なステップバイステップのプロトコルを示しています。...

ダウンストリーム解析のためのマウス脳の処理

出典:Pekarek, B. T., et.al., CLARITY Tissue Clearingによる無傷のニューロン樹状突起のイメージングと定量化。J. Vis. Exp.

透明化マウス脳における無傷の樹状突起アーバーとスパイン形態の共焦点顕微鏡イメージング

この記事では、高分解能、蛍光標識したマウスの脳の微細脳解剖と、再構築するための完全な実験手順について説明します。説明されたプロトコルは、試料調製及び清算、画像化、データ後処理およびマルチスケール視覚化のための取付片を備えている。...

共焦点光シート顕微鏡全体マウスの脳のミクロンスケールの分解能光トモ

ここでは、脊髄の油圧押し出しと、同じげっ歯類の特定の後根神経節（DRG）の同定と分離のためのプロトコルを提示します。標準的な脊髄分離法と比較して、この方法は大幅に迅速で、組織損傷のリスクを軽減します。...

げっ歯類での後根神経節の脊髄および単離の油圧押出

この論文では、脳、脊髄、髄膜など、中枢神経系内の常在免疫細胞および末梢由来の免疫細胞を調べるための2つの最適化されたプロトコルを紹介します。これらの各プロトコルは、定常状態および炎症状態下でこれらのコンパートメントを占める細胞の機能と組成を確認するのに役立ちます。...

免疫細胞の下流分析のための中枢神経系組織および関連する髄膜の単離

神経樹状形態は、しばしば機能の根底にある。実際、ニューロンの発達に影響を与える多くの疾患プロセスは、形態表現型で現れる。このプロトコルは、無傷の樹状樹状の樹状樹状の樹状樹状の、および関連する脊椎を分析するための簡単で強力な方法を記述します。...

CLARITY組織クリアリングによるインタクトニューロンデンドライトのイメージングと定量化

このプロトコルは、灌流、脳切片、自由浮遊免疫染色、組織実装、イメージングを含むマウス脳組織学的研究のための効率的で再現可能なアプローチを記述する。...

マウス脳のフリーフローティング免疫染色

学ぶマウス脳脊髄サンプルの抽出と組織透明化調製法。蛍光信号を保持したまま全脳・脊髄を可視化し、神経構造の詳細なマッピングと神経免疫相互作用の研究に貢献します。

マウス脳脊髄サンプルの抽出および組織透明化調製

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