Name: 緑膿菌における運動表現型を観察するためのハイスループット法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 23 s
Description: 学ぼう、Pseudomonas aeruginosaの運動表現型をハイスループット法で解析する手法。トランスポゾン変異体ライブラリーを用いて群泳運動とひも運動をゲノム規模で評価し、バイオフィルム形成や病原性に関わる遺伝子を同定します。

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<ol><li>Burrows, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudomonas+aeruginosa+twitching+motility%3A+type+IV+pili+in+action%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Pseudomonas aeruginosa twitching motility: type IV pili in action.</a> Annu Rev Microbiol. 66, 493-520 (2012).</li>
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<li>Toutain, C. M., Zegans, M. E., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+two+flagellar+stators+and+their+role+in+the+motility+of+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Evidence for two flagellar stators and their role in the motility of Pseudomonas aeruginosa.</a> J Bacteriol. 187 (2), 771-777 (2005).</li>
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<li>Rasmussen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+screening+assay+for+inhibitors+of+bacterial+motility+identifies+a+novel+inhibitor+of+the+Na%2B-driven+flagellar+motor+and+virulence+gene+expression+in+Vibrio+cholerae%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">A high-throughput screening assay for inhibitors of bacterial motility identifies a novel inhibitor of the Na+-driven flagellar motor and virulence gene expression in Vibrio cholerae.</a> Antimicrob Agents Chemother. 55 (9), 4134-4143 (2011).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96枚のウェルプレート&nbsp;&nbsp;</td><td>コーニング&nbsp;&nbsp;</td><td>3701&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>アガー&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;&nbsp;</td><td>BP1423-2&nbsp;</td><td>群れ運動率はそれぞれ0.5%、痙攣運動率1%の最終濃度です。</td></tr><tr><td>カサミノ酸とnbsp;&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;&nbsp;</td><td>223050&nbsp;</td><td>20%のストックを水に浸して準備します。フィルターは0.22 & muで滅菌します。mをろ過し、4 & Cで保存。最終濃度は M9 最低培地中 0.5%。</td></tr><tr><td>クリスタルバイオレット&nbsp;</td><td>バイオベーシック&nbsp;&nbsp;</td><td>CB0331</td><td>1%の溶液を水に淹れて準備します。&nbsp;</td></tr><tr><td>D-グルコース&nbsp;&nbsp;</td><td>バイオベーシック&nbsp;&nbsp;</td><td>GB0219&nbsp;</td><td>20%(1.1 M)のストックを水に浸して自滅菌します。最終濃度はM9最小培地中0.2%。nbsp;</td></tr><tr><td>フィルトロプル S 0.2&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>83.1826.001</td><td></td></tr><tr><td>ゲンタマイシン硫酸塩&nbsp;&nbsp;</td><td>バイオベーシック&nbsp;&nbsp;</td><td>GB0217&nbsp;</td><td>30 mg/mlのストックを水に淹れて準備します。フィルターは0.22 & muで滅菌します。Mフィルターを使い、4度で保存します。C & ndash;最終濃度はプレート15および微量で、g/mL...&nbsp;&nbsp;</td></tr><tr><td>接種ループと針の導入など;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>22363597</td><td></td></tr><tr><td>M9 ミニマルソルト、5X&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>248510</td><td>100万杯のストックを水に浸して、オートクレーブで滅菌します。最終濃度はM9最小培地中の1 mM。および注::&nbsp;</td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム(MgSO4)およびnbsp;&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>M63-500</td><td>&nbsp;1 M mgSO4のストックを水に淹れて準備します。フィルターは0.22 & muで滅菌します。Mフィルターをして常温で保存します。最終濃度&nbsp;</td></tr><tr><td>PA14 トランスポゾン挿入変異体ライブラリ&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td>Liberatiら、2006年(参考文献29参照)</td><td>全コレクションに59枚の96ウェル版が収蔵されています。各井戸にはLBに25%グリセロールを含む単一の変異体が含まれています。</td></tr><tr><td>ペトリ皿 92×16mm&nbsp;</td><td>Sarstedt&nbsp;</td><td>82.1473.001</td><td></td></tr><tr><td>フェノブース+&nbsp;</td><td>シンガー・インストゥルメンツ&nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/solution/phenobooth/specification/&nbsp;</td><td>11.3gの粉末を200mLの精製水に溶かします。オートクレーブ温度121度&デグ;Cは15分、nbsp;</td></tr><tr><td>プラスチック製注射器 10 mL&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>14955459</td><td></td></tr><tr><td>ローター+&nbsp;&nbsp;&nbsp;</td><td>シンガー・インストゥルメンツ&nbsp;</td><td>https://www.singerinstruments.com/resource/rotor-had/&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>短いピンリパッド 384密度&nbsp;</td><td>シンガー・インストゥルメンツ&nbsp;&nbsp;</td><td>REP-004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ショートピンリパッド 96密度&nbsp;&nbsp;</td><td>シンガー・インストゥルメンツ&nbsp;&nbsp;</td><td>REP-002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム(NaCl)&nbsp;&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>BP358-212&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>スプリング式96ピンレプリケーター</td><td>EnzyScreen&nbsp;&nbsp;</td><td>CR1000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>手術用ブレード ステンレス No. 25&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>08-918-5F</td><td></td></tr><tr><td>トリプトン&nbsp;</td><td>オキソイド&nbsp;&nbsp;</td><td>LP0042B&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ユニウェルプレート</td><td>シンガー・インストゥルメンツ&nbsp;&nbsp;</td><td>プラスプレート:PLU-003&nbsp;&nbsp;</td><td>プレート寸法:54 &34時間以上;38 cm - 内壁がなく、内部寸法が大きくなっています。nbsp;</td></tr><tr><td>ユニウェルプレート</td><td>VWR</td><td>単一ウェル組織培養プレート:75780-348</td><td>プラスプレートと同じ寸法です。</td></tr><tr><td>酵母抽出物など;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック&nbsp;</td><td>248510&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

緑膿菌における運動表現型を観察するためのハイスループット法

High-throughput Method for Observing Motility Phenotypes in Pseudomonas aeruginosa

Motility behaviors often play a significant role in the ability of a bacterium to exploit the resources available in its environment. This is particularly ...

high-throughput-method-for-observing-motility-phenotypes-pseudomonas

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このプロトコルは、chemoeffectorsの安定した濃度勾配で細菌の走化性を調べるためのマイクロ流体デバイスの開発を説明します。...

安定した濃度勾配で細菌走化性を定量化するためのマイクロ流体デバイス

出典: Morales-Soto、N. et al.、 細菌表面運動性アッセイの調製、イメージング、および定量化。 J. Vis. 経験。...

細菌の表面運動性を可視化するためのスウォーミングアッセイ

出典: Chu、W.、およびZhuang、X.色反応に基づく細菌の運動性の視覚化。 J. Vis. 経験。...

酸化還元色素添加半固体培地を使用した細菌運動性の可視化

出典: Scheidweiler, D., 他 流体装置と顕微鏡、フローサイトメトリーを組み合わせて、空間スケールを超えた多孔質培地内の微生物輸送を研究すること。 J. Vis.

マイクロ流体装置を用いた細菌の運動性評価

群れの運動性は、物理的および環境的要因の影響を受けます。ここでは、スウォームアッセイの調製とデータ収集に一般的に関連する課題を回避するための2段階のプロトコルとガイドラインについて説明します。巨視的なイメージング技術を使用して、現在の分析技術では提供されない群れの行動に関する詳細な情報を取得します。...

準備、イメージング、および細菌表面運動性アッセイの定量化

本研究では、ナノマイクロ流体フローチャンバーは、視覚化し、機能的にXylella fastidiosa、グレイプバインのピアース病を引き起こす細菌の単収縮運動を特徴づけるために使用しました。...

の役割の攣縮運動の可視化とキャラクタリゼーション<em&gt; PilG</em&gt;で<em&gt; Xylella fastidiosa</em

この記事では、正常に抗菌薬の発見と化合物試験のための新しい強力なツールを提供し、 緑膿菌におけるサイクリックジGMPの細胞レベルを操作するその潜在的能力について小分子の大きなライブラリーをスクリーニングするために設立されたハイスループットアッセイを説明します。...

調節するc-ジ-GMPシグナリングで、小さな分子をスクリーニングするためのハイスループットセットアップの確立<em&gt;緑膿菌</em

多くの細菌は、彼らの環境をナビゲートし、個々と集団の両方として有利な環境を植民地化するために、フラゲラ駆動の運動性を使用しています。ここでは、水泳や群れの運動に寄与する成分/経路を特定するための選択ツールとして運動性を利用する3つの確立された方法の使用を実証しています。...

シリーズで3つの確立された技術を適用することにより 、大腸菌 におけるフラゲラ駆動運動性の調査

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細菌の運動性における細菌の糖転移酵素の役割を解明するためのヌル変異体の生成

ここでは、呈色反応に基づいて細菌の運動性を検出するためのプロトコルを提示します。この方法の主な利点は、評価が容易で精度が高く、特殊な機器を必要としないことです。...

呈色反応に基づく細菌の運動性の可視化

この原稿では、 緑膿菌 と 黄色ブドウ球菌の抗生物質の生存を評価するための包括的なプロトコルを提供し、プラスミドを 緑膿菌 と 黄色ブドウ球菌...

緑 膿菌 および 黄色ブドウ球 菌の不均一な表現型のタイムラプス落射蛍光顕微鏡イメージング

学ぼう、Pseudomonas aeruginosaの運動表現型をハイスループット法で解析する手法。トランスポゾン変異体ライブラリーを用いて群泳運動とひも運動をゲノム規模で評価し、バイオフィルム形成や病原性に関わる遺伝子を同定します。

緑膿菌における運動表現型を観察するためのハイスループット法

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