Name: 脳蛍光染色および免疫染色を強化するための ショウジョウバエ 頭部の直接凍結切片 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: 学ぶショウジョウバエ脳組織処理法。切断、固定、凍結切片、蛍光・免疫染色、イメージングの簡易プロトコルで、複雑な解剖を不要にし、神経構造の可視化と定量的解析を効率的に実現します。

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<ol><li>Fabbri-Destro, M., Rizzolatti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirror+neurons+and+mirror+systems+in+monkeys+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Mirror neurons and mirror systems in monkeys and humans.</a> Physiology. 23, 171-179 (2008).</li>
<li>Faust, T. E., Gunner, G., Schafer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+governing+activity-dependent+synaptic+pruning+in+the+developing+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms governing activity-dependent synaptic pruning in the developing mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 22, 657-673 (2021).</li>
<li>Roozendaal, B., McEwen, B. S., Chattarji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress%2C+memory+and+the+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress, memory and the amygdala.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 423-433 (2009).</li>
<li>Arber, S., Costa, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Networking+brainstem+and+basal+ganglia+circuits+for+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Networking brainstem and basal ganglia circuits for movement.</a> Nat Rev Neurosci. 23, 342-360 (2022).</li>
<li>GBD 2019 Dementia Forecasting Collaborators. Estimation of the global prevalence of dementia in 2019 and forecasted prevalence in 2050: an analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lancet+Public+Health%22">Lancet Public Health</a>. 7, e105-e125 (2022).</li>
<li>Huang, Y., Li, Y., Pan, H., Han, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+neurological+disorders+in+204+countries+and+territories+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of neurological disorders in 204 countries and territories worldwide.</a> J Glob Health. 13, 04160(2023).</li>
<li>Crick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+dogma+of+molecular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Central dogma of molecular biology.</a> Nature. 227, 561-563 (1970).</li>
<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9, 235-244 (2016).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+Fly%3A+A+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the Fly: A primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201, 815-842 (2015).</li>
<li>Larkin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FlyBase%3A+updates+to+the+Drosophila+melanogaster+knowledge+base%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">FlyBase: updates to the Drosophila melanogaster knowledge base.</a> Nucleic Acids Res. 49, D899-D907 (2021).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> Int J Mol Sci. 10, 407-440 (2009).</li>
<li>Winding, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connectome+of+an+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The connectome of an insect brain.</a> Science. 379, eadd9330(2023).</li>
<li>Bargiello, T. A., Jackson, F. R., Young, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+circadian+behavioural+rhythms+by+gene+transfer+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Restoration of circadian behavioural rhythms by gene transfer in Drosophila.</a> Nature. 312, 752-754 (1984).</li>
<li>Zehring, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-element+transformation+with+period+locus+DNA+restores+rhythmicity+to+mutant%2C+arrhythmic+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">P-element transformation with period locus DNA restores rhythmicity to mutant, arrhythmic Drosophila melanogaster.</a> Cell. 39, 369-376 (1984).</li>
<li>Huang, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discoveries+of+molecular+mechanisms+for+the+circadian+rhythm%3A+The+2017+Nobel+Prize+in+Physiology+or+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+J%22%5BJournal%5D)">The discoveries of molecular mechanisms for the circadian rhythm: The 2017 Nobel Prize in Physiology or Medicine.</a> Biomed J. 41, 5-8 (2018).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4, 429-434 (2012).</li>
<li>Ong, S. E., Foster, L. J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric-based+approaches+in+quantitative+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric-based approaches in quantitative proteomics.</a> Methods. 29, 124-130 (2003).</li>
<li>Behnke, J. A., Ye, C., Moberg, K. H., Zheng, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+detect+neurodegeneration+in+Drosophila+melanogaster+whole-brain+mounts+using+advanced+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to detect neurodegeneration in Drosophila melanogaster whole-brain mounts using advanced microscopy.</a> STAR Protoc. 2, 100689(2021).</li>
<li>Moraes, R. C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E+induces+lipid+accumulation+through+Dgat2+that+is+prevented+with+time-restricted+feeding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E induces lipid accumulation through Dgat2 that is prevented with time-restricted feeding in Drosophila.</a> Genes. 15 (11), 1376(2024).</li>
<li>Roth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reduces+neuronal+mutant+huntingtin+aggregation+and+ameliorates+locomotor+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reduces neuronal mutant huntingtin aggregation and ameliorates locomotor performance in Drosophila.</a> Front Aging Neurosci. 15, 1223911(2023).</li>
<li>Currier, T. A., Pang, M. M., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+processing+in+the+fly%2C+from+photoreceptors+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Visual processing in the fly, from photoreceptors to behavior.</a> Genetics. 224, (2023).</li>
<li>McKellar, C. E., Siwanowicz, I., Dickson, B. J., Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+motor+neurons+of+every+muscle+for+fly+proboscis+reaching%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Controlling motor neurons of every muscle for fly proboscis reaching.</a> Elife. 9, (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 uL ピペット</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL ピペットチップ</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Buffered Saline</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 ヤギ抗マウス二次抗体</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>アンチロールガラス</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>ApoE マウス一次抗体</td><td>Santa Cruz</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>遠心チューブ 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>チャージスライド</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>クライオセクショニング モールド</td><td>フィッシャー</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td>CM 3050 S</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット ブレード</td><td>C.L. スターキー</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>蒸留水</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ドライアイス</td><td>???</td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>ファインフォーセプス</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>フライパッド</td><td>トライテックリサーチ</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr> 硬化<tr><td>封入剤 Dapi</td><td>ベクタシールド</td><td>H-1800</td><td></td></tr><tr><td>キムワイプ</td><td>キムテック</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>ナイルレッド&nbsp;</td><td>シグマ</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>最適な切断温度コンパウンド</td><td>フィ</td><td>ッシャー4585</td><td></td></tr>オー<tr><td>ビタルシェーカー</td><td>オーハウス</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド20%</td><td>電子顕微鏡科学</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>カミソリの刃</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>春はさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>フィ</td><td>ッシャーS5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

脳蛍光染色および免疫染色を強化するための ショウジョウバエ 頭部の直接凍結切片

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

上述の方法により、成虫のハエの脳の蛍光イメージングを、面倒な解剖なしに確実に行うことができます。 図1に簡単に示すように、この方法は簡単で、すべての試料、機器、材料がすぐに入手できる場合は迅速に実行できます。あるいは、OCT金型段階で-80°Cの保管を使用することで、試料を何週間も後で使用するために保管することができます。研究者は、簡単な解剖および埋め込み技術を学ぶために長いトレーニングを受ける必要がないため、この方法は非常に利用しやすくなっています。
この方法を用いて実施された蛍光顕微鏡法の例を図2A-Dに示すことができます。抗体タグ(ApoE)と蛍光染色(ナイルレッド)の両方の発現は明確に定義されています。さらに、脳組織の高い完全性も見ることができます。画像は、デコンボリューションなどの一般的な画...

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

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神経科学

このビデオでは、グリア細胞のシングルセルイメージングのためのトランスジェニックショウジョウバエ脳の免疫蛍光染色を実演しています。脳は、グリア特異的な組換え酵素システムの制御下で、抗原性エピトープのさまざまな組み合わせと融合した膜標的タンパク質を発現します。単離および固定された脳は、抗原エピトープに特異的な一次抗体で染色され、続いて蛍光色素標識二次抗体で染色されます。この標識により、さまざまな脳領域にわたる異なるグリア細胞亜集団の同時イメージングが可能になります。...

グリア細胞のシングルセルイメージングのためのショウジョウバエ脳の免疫蛍光染色

免疫染色は、組織内の特定の細胞タイプやタンパク質を可視化するための効果的な技術です。超音波処理を利用することにより、ここに記載されているプロトコルは、免疫染色の前に後期胚および幼虫からショウジョウバエ・メラノガスター組織を解剖する必要性を軽減する。私たちは、ホルムアルデヒド固定全マウント幼虫の免疫染色のための効率的な方法を提供します。...

後期胚および幼虫の超音波処理により促進免疫蛍光染色<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;組織<em&gt;その場で</em

大人ショウジョウバエの脳は神経回路、高次脳機能、および複雑な疾患を研究するための貴重なシステムです。小さなハエの頭から全脳組織を分析するための効率的な方法は、脳ベースの研究を促進します。ここでは、よく保存された形態を有する成人の脳の簡単な、ワンステップ解剖プロトコルを記述します。...

大人のホールマウントの準備のためのシンプルなワンステップ解剖プロトコル<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;ブレインズ

このプロトコルは、郭清と大人のショウジョウバエの染色について説明します脳の組織。具体的には、このプロトコルでは、神経の開発の多くの側面の基礎となる原則を明らかに正確に使用することができます例の神経細胞サブセットとしてショウジョウバエのきのこ体と光受容ニューロンの使用を強調表示します。...

郭清ときのこ体の免疫蛍光染色と大人のショウジョウバエ脳光受容器ニューロン

細胞は異なる形態を表示し、様々 な彼らの隣人との相互作用を確立します。このプロトコルでは、単一細胞の形態を明らかにする、老舗の Gal4/UA...

多色 FlpOut 技術の高分解能単一細胞の形態とショウジョウバエにおけるグリア細胞の細胞間相互作用の研究への応用

蛋白質の集合とのショウジョウバエモデルの中枢神経系におけるオートファジーのフラックスの蛍光イメージングによる細胞生物学的研究から定量的なデータを抽出する単純なと適応のワークフローを開発しました。神経変性疾患。...

ImageJ を用いた蛍光タグ付きタンパク質の公平な分析によるショウジョウバエの神経変性の定量細胞生物学

免疫組織化学、西部の分析、および RNA 抽出のための組織の処理のためのプロトコル、ショウジョウバエ蛹網膜を解剖するための手術方法を提案する.

免疫組織化学、西部の分析、および RNA の隔離のためのショウジョウバエ蛹網膜の解剖

Expansion-Assisted Iterative Fluorescence In Situ Hybridization(EASI-FISH)は、拡大顕微鏡法と蛍光in...

Expansion-assisted iterative Fluorescence In Situ Hybridizationを用いたInsact Drosophila Brainにおける遺伝子発現のマルチプレックス検出

ショウジョウバエの心臓切片作製および蛍光イメージングプロトコルは、心臓の構造と病状の研究を簡素化します。このアプローチには、従来の解剖に必要な技術的専門知識をバイパスして、簡単な切片作成、染色、およびイメージングが含まれます。これにより、アクセシビリティが向上し、ショウジョウバエは、より広範な科学コミュニティ内で心臓関連研究のモデルとしてより広く利用できるようになります。...

クライオ切片による ショウジョウバエ の心臓蛍光染色のための新規で効率的な方法

このプロトコルは、非放射性の関係...

二重蛍光その場で</em新鮮な脳切片における>ハイブリダイゼーション

学ぶショウジョウバエ脳組織処理法。切断、固定、凍結切片、蛍光・免疫染色、イメージングの簡易プロトコルで、複雑な解剖を不要にし、神経構造の可視化と定量的解析を効率的に実現します。

脳蛍光染色および免疫染色を強化するためのショウジョウバエ頭部の直接凍結切片

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脳蛍光染色および免疫染色を強化するための ショウジョウバエ 頭部の直接凍結切片

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