Name: 全血からの低密度および正常密度好中球の単離と特性評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: 学ぶ 密度勾配遠心と磁気分離を用いて、ヒト末梢血から低密度好中球と正常密度好中球を高純度に分離する方法。このプロトコルは好中球ヘテロジェネイティの研究と疾患機構の解明に貢献します。

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<ol><li>Tracchi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+neutrophil+lifespan+in+patients+with+congestive+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Increased neutrophil lifespan in patients with congestive heart failure.</a> Eur J Heart Fail. 11 (4), 378-385 (2009).</li>
<li>Ballesteros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+neutrophil+fates+by+tissue+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of neutrophil fates by tissue environments.</a> Cell. 183 (5), 1282-1297.e18 (2020).</li>
<li>Mckenna, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophils%3A+Need+for+standardized+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophils: Need for standardized nomenclature.</a> Front Immunol. 12, 602963(2021).</li>
<li>Hacbarth, E., Kajdacsy-Balla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+neutrophils+in+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%2C+rheumatoid+arthritis%2C+and+acute+rheumatic+fever%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low density neutrophils in patients with systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and acute rheumatic fever.</a> Arthritis Rheumatol. 29 (11), 1334-1342 (1986).</li>
<li>Hardisty, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+purity+isolation+of+low+density+neutrophils+casts+doubt+on+their+exceptionality+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">High purity isolation of low density neutrophils casts doubt on their exceptionality in health and disease.</a> Front Immunol. 12, 625922(2021).</li>
<li>Scapini, P., Marini, O., Tecchio, C., Cassatella, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neutrophils+in+the+saga+of+cellular+heterogeneity%3A+Insights+and+open+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: Insights and open questions.</a> Immunol Rev. 273 (1), 48-60 (2016).</li>
<li>Ssemaganda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neutrophil+subsets+in+healthy+human+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of neutrophil subsets in healthy human pregnancies.</a> PLoS One. 9 (2), e85696(2014).</li>
<li>Tay, S. H., Celhar, T., Fairhurst, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (10), 1587-1595 (2020).</li>
<li>Hassani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+origin+of+low-density+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">On the origin of low-density neutrophils.</a> J Leukoc Biol. 107 (5), 809-818 (2020).</li>
<li>Cowland, J. B., Borregaard, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+neutrophil+precursors+from+bone+marrow+for+biochemical+and+transcriptional+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation of neutrophil precursors from bone marrow for biochemical and transcriptional analysis.</a> J Immunol Methods. 232 (1-2), 191-200 (1999).</li>
<li>Blanco-Camarillo, C., Aleman, O. R., Rosales, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+neutrophils+in+healthy+individuals+display+a+mature+primed+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low-density neutrophils in healthy individuals display a mature primed phenotype.</a> Front Immunol. 12, 672520(2021).</li>
<li>Park, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+display+immature+cells+with+enhanced+NET+formation+in+people+living+with+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes display immature cells with enhanced NET formation in people living with HIV.</a> Sci Rep. 13 (1), 13282(2023).</li>
<li>Denny, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+distinct+subset+of+proinflammatory+neutrophils+isolated+from+patients+with+systemic+lupus+erythematosus+induces+vascular+damage+and+synthesizes+type+I+IFNs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A distinct subset of proinflammatory neutrophils isolated from patients with systemic lupus erythematosus induces vascular damage and synthesizes type I IFNs.</a> J Immunol. 184 (6), 3284-3297 (2010).</li>
<li>Ui Mhaonaigh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+density+granulocytes+in+anca+vasculitis+are+heterogenous+and+hypo-responsive+to+anti-myeloperoxidase+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Low density granulocytes in anca vasculitis are heterogenous and hypo-responsive to anti-myeloperoxidase antibodies.</a> Front Immunol. 10, 2603(2019).</li>
<li>Mosca, T., Forte, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficiency+and+impact+on+the+activity+of+blood+neutrophils+isolated+by+Percoll%2C+Ficoll+and+spontaneous+sedimentation+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Invest%22%5BJournal%5D)">Comparative efficiency and impact on the activity of blood neutrophils isolated by Percoll, Ficoll and spontaneous sedimentation methods.</a> Immunol Invest. 45 (1), 29-37 (2016).</li>
<li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+apoptotic+neutrophils+and+macrophages+and+impaired+macrophage+phagocytic+clearance+of+apoptotic+neutrophils+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Increased apoptotic neutrophils and macrophages and impaired macrophage phagocytic clearance of apoptotic neutrophils in systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 48 (10), 2888-2897 (2003).</li>
<li>Connelly, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+methods+for+the+accurate+characterization+of+whole+blood+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optimization of methods for the accurate characterization of whole blood neutrophils.</a> Sci Rep. 12 (1), 3667(2022).</li>
<li>Carmona-Rivera, C., Kaplan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+granulocytes+in+systemic+autoimmunity+and+autoinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Low-density granulocytes in systemic autoimmunity and autoinflammation.</a> Immunol Rev. 314 (1), 313-325 (2023).</li>
<li>Yennemadi, A. S., Keane, J., Leisching, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+bioenergetic+changes+in+systemic+lupus+erythematosus+immune+cell+subsets%3A+Contributions+to+pathogenesis+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial bioenergetic changes in systemic lupus erythematosus immune cell subsets: Contributions to pathogenesis and clinical applications.</a> Lupus. 32 (5), 603-611 (2023).</li>
<li>Futoh, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+low-density+granulocytes+after+colorectal+cancer+surgery+in+predicting+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22BJS+Open%22%5BJournal%5D)">Peripheral low-density granulocytes after colorectal cancer surgery in predicting recurrence.</a> BJS Open. 7 (1), zrac154(2023).</li>
<li>Dwivedi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+of+dysfunctional+neutrophils+with+a+defect+in+arginase-1+release+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Emergence of dysfunctional neutrophils with a defect in arginase-1 release in severe COVID-19.</a> JCI Insight. 9 (17), e171659(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>14 mL ポリプロピレン丸底チューブ (17 x 100 mm)</td><td>Corning Science</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>APC 抗ヒト CD14 (63D3)</td><td>BioLegend</td><td>367118</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Violet 421 抗ヒト CD10 (25 テスト)</td><td>BioLegend</td><td>312217</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline</td><td>Sigma</td><td>D8537-1L</td><td></td></tr><tr><td>EasyEights EasySep マグネット</td><td>StemCell Technologies</td><td>#18103</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Buffer (cell separation buffer)</td><td>StemCell Technologies</td><td>#20144</td><td></td></tr><tr><td>EasySep Direct Human Neutrophil Isolation Kit</td><td>StemCell Technologies</td><td>#19666</td><td></td></tr><tr><td>FcR Blocking Reagent, human</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-059-901</td><td></td></tr><tr><td>FITC anti-human CD16 (3G8)</td><td>BioLegend</td><td>302005</td><td></td></tr><tr><td>OneComp eBeads Compensation Beads</td><td>イーバイオサイエンス株式会社</td><td>01-1111-42</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 抗ヒト CD86 (BU63)</td><td>BioLegend</td><td>374209</td><td></td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 抗ヒト CD15 (SSEA-1)</td><td>BioLegend</td><td>323037</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水錠&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td></td></tr><tr><td>ゾンビ NIR 固定可能生存キット</td><td>BioLegend</td><td>423105</td><td></td></tr></tbody></table>

全血からの低密度および正常密度好中球の単離と特性評価

The Isolation and Characterization of Low- and Normal- Density Neutrophils from Whole Blood

密度勾配媒体上に全好中球がうまく層状になることは、 図1Bで観察できます。2 つの異なるバンドを取得する必要があります。グラジエントの混合が発生した場合、またはチューブごとに層状になる好中球の総数が多い場合(約5-6×106より大きい)、バンドは拡散して見え(図1C)、2つの好中球サブタイプが混合するリスクが大幅に増加します。後者を避けるために、密度勾配チューブごとに最大5〜6個×10個6 個の全好中球を重ねることをお勧めします。健康な人ではLDNの数が非常に少ないため、下流の研究では達成できないという報告がありますが、この方法では、健康な参加者からのLDN(平均3.28 × 106 細胞/mL)とNDN(平均10.64 × 106 細胞/mL)の両方の良好な収量と純度が示されています(図2)。
LDNの平均単離純度は...

Emerging research shows that the circulating neutrophil population in humans consists of diverse subtypes and should not be studied as a single ...

the-isolation-characterization-low-normal-density-neutrophils-from

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Immunology and Infection

免疫学と感染症

好中球は炎症性免疫応答のサイトに到着する最初のセルの一つです、そしてその機能とメカニズムをin...

好中球単離プロトコル

このビデオでは、術後のヒト患者の腹膜洗浄液から低密度好中球(LDN)を分離する手順を説明します。このようにして得られたLDNは、腫瘍の成長と進行におけるLDNの役割を理解するために、さらなる下流実験で使用することができます。...

腹膜低密度好中球単離:磁気活性化細胞選別法による腹膜洗浄液からの低密度好中球取得技術

このビデオでは、不連続なショ糖勾配遠心分離により、担がんマウスの血液から細胞傷害性の高密度好中球と低密度好中球を分離する方法を示します。...

担腫瘍性マウス血液からの細胞傷害性好中球の単離

このビデオは、好中球とバイオフィルムの相互作用を研究するためのin...

好中球とバイオフィルムの相互作用を研究するためのIn vitroアッセイ

好中球は、侵入する微生物に対する宿主防御だけでなく、腫瘍細胞の免疫監視にも重要な役割を果たしています。ここでは、抗腫瘍特性を持つ好中球の単離に関連する技術と、in vitroおよびin...

抗腫瘍特性を有する好中球の単離とキャラクタリゼーション

好中球は最も豊富な種類の白血球です。ここでは、密度勾配分離法によるヒト血液からの好中球の単離と、顆粒球経路に沿ったヒト前骨髄球(HL60)細胞の分化について説明します。抗リンパ腫薬に対するリンパ腫細胞の感受性に対するそれらの役割をテストするため。...

治療薬にリンパ腫細胞の感度での役割を決定するために、好中球の単離と解析

新しいプロトコルを特定し人間由来の微粒子を特徴付けるとおりマウス好中球。これらのプロトコルは遠心、フローサイトメトリーとイムノブロット微粒子コンテンツを分析する手法を活用し、細胞機能のさまざまなセル型から派生した微粒子の役割を研究する使用できます。...

分離と機能研究の好中球由来の微粒子のキャラクタリゼーション

このプロトコルは、蛍光抗体法により三次元共焦点顕微鏡による ex vivo ネット形成の半自動定量化のための高感度・高スループット好中球細胞外トラップ (ネット)...

高スループット アッセイを行い好中球細胞外トラップ形成の定量化

全血、バフィーコート、または白血病膜からの好中球の分離方法を詳述し、良好な収率、高純度、および最小限の細胞活性化を達成する。我々は、精製の勾配、赤血球(RBC)沈殿、RBC溶菌を利用して、高品質/純度好中球製剤を得る。...

全血とバフィーコートからのヒト好中球の分離

この研究では、ラットの骨髄から豊富な好中球細胞外トラップ(NET)を単離するための2つの技術について概説しています。1 つの方法は、市販の好中球分離キットと密度勾配遠心分離を組み合わせたもので、もう 1...

同等の容量を持つラット骨髄好中球を単離するためのユニークなアプローチ

低密度好中球の効率的な精製のための迅速な磁気マイクロビーズ法

学ぶ 密度勾配遠心と磁気分離を用いて、ヒト末梢血から低密度好中球と正常密度好中球を高純度に分離する方法。このプロトコルは好中球ヘテロジェネイティの研究と疾患機構の解明に貢献します。

全血からの低密度および正常密度好中球の単離と特性評価

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