Name: ラットのための直接迷走神経注射プロトコル (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T14:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: 学ぶラットの迷走神経への直接注射法。外科的露出とガラスシリンジを用いた標的薬物送達プロトコルで、自律神経系疾患の前臨床研究における遺伝子治療の可能性を向上させます。

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<ol><li>Fischer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+injection+into+the+dorsal+root+ganglion%3A+Technical%2C+behavioral%2C+and+histological+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct injection into the dorsal root ganglion: Technical, behavioral, and histological observations.</a> J Neurosci Methods. 199 (1), 43-55 (2011).</li>
<li>O'donnell, M., Fontaine, A., Caldwell, J., Weir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+dorsal+root+ganglia+%28drg%29+injection+in+mice+for+analysis+of+adeno-associated+viral+%28AAV%29+gene+transfer+to+peripheral+somatosensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Direct dorsal root ganglia (drg) injection in mice for analysis of adeno-associated viral (AAV) gene transfer to peripheral somatosensory neurons.</a> J Neurosci Methods. 411, 110268(2024).</li>
<li>Puljak, L., Kojundzic, S. L., Hogan, Q. H., Sapunar, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+pharmacological+agents+into+rat+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of pharmacological agents into rat dorsal root ganglion.</a> J Neurosci Methods. 177 (2), 397-402 (2009).</li>
<li>Rueter, L. E., Kohlhaas, K. L., Curzon, P., Surowy, C. S., Meyer, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+and+central+sites+of+action+for+a-85380+in+the+spinal+nerve+ligation+model+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripheral and central sites of action for a-85380 in the spinal nerve ligation model of neuropathic pain.</a> Pain. 103 (3), 269-276 (2003).</li>
<li>Ulusoy, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-to-neuron+alpha-synuclein+propagation+in+vivo+is+independent+of+neuronal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol+Commun%22%5BJournal%5D)">Neuron-to-neuron alpha-synuclein propagation in vivo is independent of neuronal injury.</a> Acta Neuropathol Commun. 3, 13(2015).</li>
<li>Helwig, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+propagation+of+transduced+alpha-synuclein+involves+non-fibrillar+protein+species+and+is+enhanced+in+alpha-synuclein+null+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Brain propagation of transduced alpha-synuclein involves non-fibrillar protein species and is enhanced in alpha-synuclein null mice.</a> Brain. 139 (Pt 3), 856-870 (2016).</li>
<li>Chiang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+suprachoroidal-to-optic-nerve+%28scone%29+drug+delivery+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Development of a novel suprachoroidal-to-optic-nerve (scone) drug delivery system.</a> Drug Deliv. 31 (1), 2379369(2024).</li>
<li>Ferrari, L. F., Cunha, F. Q., Parada, C. A., Ferreira, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+to+perform+direct+intraganglionar+injections+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel technique to perform direct intraganglionar injections in rats.</a> J Neurosci Methods. 159 (2), 236-243 (2007).</li>
<li>Yuan, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+injection+of+lumbar+dorsal+root+ganglia+under+direct+vision%3A+Relevant+anatomy%2C+protocol%2C+and+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Rapid injection of lumbar dorsal root ganglia under direct vision: Relevant anatomy, protocol, and behaviors.</a> Front. Neurol. 14, 1138933(2023).</li>
<li>Mason, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+AAV+serotypes+for+gene+delivery+to+dorsal+root+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Comparison of AAV serotypes for gene delivery to dorsal root ganglion neurons.</a> Mol Ther. 18 (4), 715-724 (2010).</li>
<li>Arjomandnejad, M., Dasgupta, I., Flotte, T. R., Keeler, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+recombinant+adeno-associated+virus+%28AAV%29+vectors+for+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22BioDrugs%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of recombinant adeno-associated virus (AAV) vectors for gene transfer.</a> BioDrugs. 37 (3), 311-329 (2023).</li>
<li>Ertl, H. C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+and+toxicity+of+AAV+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity and toxicity of AAV gene therapy.</a> Front Immunol. 13, 975803(2022).</li>
<li>Wayman, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+permanent+distal+middle+cerebral+with+common+carotid+artery+occlusion+in+aged+rats+to+study+cortical+ischemia+with+sustained+disability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing permanent distal middle cerebral with common carotid artery occlusion in aged rats to study cortical ischemia with sustained disability.</a> J Vis Exp. (108), e53106(2016).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD&nbsp;ツベルクリンシリンジ、取り外し可能な25 G x 5/8インチ。針</td><td>ベクトン、ディッキンソン アンド カンパニー</td><td>SKU:309626</td><td>湾曲した針で接続して迷走神経を引っ張り、注射時に保持するために使用されます。</td></tr><tr><td>0.5% ブピバカイン塩酸塩注射</td><td>Hospira</td><td>NDC 0409-1162-19</td><td>局所組織を麻酔するために使用される局所麻酔薬。</td></tr><tr><td>100 mL 0.9% 塩化ナトリウム 灌漑 USP</td><td>ステリケア ソリューション</td><td>アイテム #6240</td><td>ラットと組織の水分補給に使用される生理食塩水。</td></tr><tr><td>20 ブラント、レトラクターチップ、7.5 mm</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5018</td><td>手術時に組織を引き離して保持するために使用されます。</td></tr><tr><td>3 mL BD-Luer-Lok シリンジ、滅菌、シングルユース&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>SKU # 309657</td><td>ラットに生理食塩水を注入し、生理食塩水をポリエチレンチューブに充填するために使用されます。</td></tr><tr><td>AK-Fluor10%</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-253-10</td><td>神経内に見えるフルオレセイン色素。射出忠実度を追跡するために使用されます。</td></tr><tr><td>動物用体重計</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>SCL 4000</td><td>ラットの体重測定に使用されます。</td></tr><tr><td>アンセル ENCORE ペリー スタイル 42 PF 手術用手袋</td><td>アンセル</td><td>ASTM D3577</td><td>滅菌手袋は、外科医による手術時に使用されます。</td></tr><tr><td>人工涙液軟膏 3.5g</td><td>Pivetal</td><td>NDC 46066-753-55</td><td>目の過度の乾燥を防ぐために eyses に使用されます。</td></tr><tr><td>ベビーミクスター止血剤&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>13013-14</td>緊急<td>時に止血に使用します。25 G x 5/8 インチの針を曲げるためにも使用されます。</td></tr><tr><td>BD Intramedic PE チューブ</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>14-170-12A</td><td>ハミルトン針および NanoFil 針と接続するための注射セットアップ システムで使用されます。また、注入混合物も保持します。</td></tr><tr><td>BD Precison Glide Needle, 25 G x 5/8"</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>ラットに生理食塩水を注入したり、湾曲した針を作るために使用します。</td></tr><tr><td>BD Precison グライドニードル、27 G x & frac12;「</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#301629</td><td>BD 皮内チューブに滅菌生理食塩水を充填するために使用されます。</td></tr>ベン<tr><td>チマーク Accuris "次ページ」可変容量ピペット マイクロ スターター セット 4 つのピペットが含まれています: 10/20/200/1000 &L、プラススタンド</td><td>MilliporeSigma</td><td>BMSP7700S1</td><td>滅菌溶液をピペット</td></tr>で使用する。<tr><td>ベタジン、ポビジンヨウ素 10%&nbsp;</td><td>正直な</td><td>67618015017</td><td>手術部位の消毒に使用されます。</td></tr><tr><td>カルプロフェン注射液 50 mg/mL</td><td>Covtrus (6451506845)</td><td>SKU 591149</td> 提供の場合<td>、テキサス大学サウスウェスタン医療センターの動物資源センターが提供する 5 mg/kg の用量率で希釈したカルプロフェンを使用しました。</td></tr><tr><td>湾曲した針(カスタムメイド)</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>REF#305122</td><td>BD PrecisionGlide 25 G x 5/8 "の針は、止血剤の助けを借りて90度に湾曲しています。針の先端は鈍くします。使用前に滅菌する必要があります。迷走神経を引っ掛けて、分離・注入時に保持するために使用されます。</td></tr>解剖<tr><td>顕微鏡Motic</td><td>&nbsp;</td><td>SMZ-171-BLED(ライト付き双眼鏡)</td><td>迷走神経分離時、注射時の解剖学的領域の拡大、注射漏れのチェックに使用します。</td></tr>ド<tr><td>レープシート&nbsp;</td><td>Dynarex</td><td>Reorder#8122</td><td>滅菌後のドレープとして使用します。</td></tr><tr><td>Dukal コットン チップ アプリケーター、非滅菌</td><td>Dukal</td><td>アイテム 9003</td><td>組織の分離を鈍らせるために使用され、使用前に滅菌する必要があります。</td></tr><tr><td>Dumont #7 - ファイン鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11274-20</td><td>左迷走神経を総頸動脈から分離するために使用されます。湾曲しているので使いやすいです。</td></tr><tr><td>Ethicon PDS II 未染色モノフィラメント縫合糸 - 縫合糸、4/0 18 PDS II CLR MONO PS</td><td>Ethicon</td><td>VA - Z682G</td><td>創傷の縫合に使用されます。</td></tr><tr><td>エチロンナイロン縫合糸ブラックモノフィラメント</td><td>Ethicon</td><td>1856G</td><td>非吸収性縫合糸を使用する場合、創傷の縫合に使用されます。また、ネズミの歯を引っ掛けて鼻を鼻円錐の内側に固定するためにも使用されます。</td></tr><tr><td>ファイン鉗子 - 鏡面仕上げ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11412-11</td><td>総頸動脈からの迷走神経の分離時に使用します。これはストレートです。</td></tr><tr><td>ファインハサミ - シャープ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14060-09</td>は<td>、組織を切断するためのものです。</td></tr><tr><td>ハミルトン洗浄液</td>ハ<td>ミルトン</td><td>HT18311</td><td>使用後にハミルトンを洗浄するために使用されます。</td></tr><tr><td>ハミルトンニードル、27G、スモールハブRNニードル、2インチ、PT3、6/PK</td>ハ<td>ミルトン</td><td>7762-01BD</td><td>Intramedic&tradeの接続に使用されます。PEチューブ。</td></tr><tr><td>ハミルトンシリンジ、710RN&nbsp;</td><td>ハミルトン</td><td>7638-01</td>迷<td>走神経注射時に薬剤を保持するために使用します。</td></tr><tr><td>インスリンシリンジ</td><td>EXEL INT、コンフォートポイント</td><td>REF 26027</td><td>カルプロフェンと局所麻酔薬の注射に使用されます。</td></tr><tr><td>リドカイン 2% 注射</td><td>Covetrus</td><td>Reorder#002468</td><td>ブピバカインと混合して切開部位に注射するために使用されます。</td></tr><tr><td>Luxol Fast Blue MBSN</td><td>Acros Organics</td><td>212170250</td><td>神経内に目に見える染料で、注射混合物が見えるように薬物と混合するために使用されます。</td></tr><tr><td>ガラスビーズ付きマイクロビーズ滅菌器</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>項目番号18090-46</td><td>ラット手術の間に手術器具を滅菌するために使用されます。</td></tr><tr><td>ナノフィル針-NF35BV-2&nbsp;</td><td>ワールドプレシジョンインストゥルメントNC9708956</td><td></td>迷<td>走神経内に薬剤と染料の混合物を注入するために使用されます。</td></tr><tr><td>縫合糸カッター付きOlsen-Hegar針ホルダー</td> 精密<td>科学ツール</td><td>12002-12</td>創傷縫<td>合に使用されます。</td></tr><tr><td>パラフィルム M ラボラッピング フィルム、4 インチ x 125 フィート、1 箱あたり 1 ロール、12 カウント</td><td>Honestmed</td><td>PM#996</td> 分配<td>された 5 uL の薬物色素混合物を><><保持するために使用されます。&nbsp;</td></tr><tr><td>PDI アルコール準備パッド</td><td>Honestmed</td><td>NDC 10819-3914-2</td><td>手術部位の消毒に使用されます。</td></tr><tr><td>プレミアムケア滅菌タイプVIIガーゼスポンジ、8層、2インチx 2インチ</td><td>Dukal</td><td>Item C5119</td>手術<td>時にラットの首の下のクションとして使用されます。</td></tr><tr><td>プレス」n シール クリング フィルム</td><td>手術</td><td></td><td>時にラットをドレープのように覆うために使用されます。</td></tr><tr><td>ラットレトラクターセット</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Surgi 5002</td> 迷<td>走神経を頸動脈から分離しやすいように切開部を開いたままにするために使用されます。</td></tr><tr><td>ライトテンプ・ジュニア</td><td>ケントサイエンティフィックコーポレーション</td><td></td>幅<td>20.3cm×長さ25.4cm(幅8インチ×長さ10インチ)は、ネズミを暖かく保つために使用されます。</td></tr><tr><td>S&(ス&)T鉗子 - SuperGrip Tips</td><td>Fine Science Tools</td><td>00632-11</td><td>縫合時に使用し、組織を損傷することなく保持します。</td></tr><tr><td>S&(ス&)T縫合糸を結ぶ鉗子</td><td>の精密な科学の道具</td><td>00272-13</td>縫<td>合糸を締めるために使用されます。</td></tr><tr><td>メスの刃 #15</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>10015-00</td>首の<td>腹側の皮膚を切開するために使用されます。</td></tr><tr><td>メスのハンドル-#7</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>10007-12</td><td>メスの刃を保持するために使用します。</td></tr><tr><td>シリンジポンプ</td><td>&nbsp;KDサイエンティフィック</td><td>78-81-8052GL&</td><td>nbsp;シリアル #D107034、モデル#LEGATO-180は、プログラムの下で少量の混合物をポンプで送ることができるプログラム可能なポンプです。</td></tr><tr><td>TipOne フィルター チップ リフィル スターター システム</td><td>USA Scientific</td><td>Item #1120-3510</td><td>薬剤と染料の混合物をピペットでピペットで使用する。</td></tr><tr><td>イソフルラン用気化器、漏斗充填</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>Vetflow 1231</td><td>ラットの麻酔に使用されます。</td></tr><tr><td>Vetbond Tissue Adhesives</td><td>3M Science Applied to Life</td><td>ID B00016067</td><td>縫合が完璧でない場合、切り傷部位の組織を密閉するために使用されます。</td></tr><tr><td>Wahl BravMini+ プロフェッショナル コードレス バリカン キット</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>CL7300-キット</td><td>ラットの毛を切るために使用されます。</td></tr></tbody></table>

ラットのための直接迷走神経注射プロトコル

Direct Vagus Nerve Injection Protocol For Rats

本研究では、6匹の成体ラット(雄3匹、雌3匹)を使用しました。6匹のうち、1匹のラットを複数回注射して、注射部位の周りの色素の拡散を示す失敗注射の状態を示しました図 5A。他のすべてのラットは、 図4B および 図5Bに示すように、滑らかな注射および神経染色を示した。
図1は、注射針とチューブの設定が正しくない場合に、針とチューブの間に色素が漏れた状況を示しています。この実験で使用した1%染料は厚すぎませんが、シールの漏れにより、注射針への染料の通過に失敗しました。この種の問題は、プライミングの過程で簡単に特定できます(ステップ5.2を参照)。この状態を解決するには、針とチューブの間の接続が正しく行われているかどうか...

There is a relative abundance of strategies and methodologies to facilitate drug delivery to the central nervous system. However, drug delivery directly ...

direct-vagus-nerve-injection-protocol-for-rats

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

出典: Sanchez, C. A., et al.ラットへの慢性移植のための末梢神経刺激電極の作製J. Vis.

ラットにおける慢性移植末梢神経カフ電極による迷走神経刺激

このビデオでは、経脊髄直流刺激下でのラット運動ニューロンのin...

ラットの脊髄運動ニューロンの経脊髄直流刺激

出典: Grames, MS, et al.ラットへのアデノ随伴ウイルスの静脈内投与の方法とヒントと中枢神経系形質導入の評価J. Vis.

ラットモデルにおける組換えアデノ随伴ウイルスベクターの静脈内投与

求心性迷走神経シグナル伝達は、腹部と胸部の臓器にある受容体から中枢神経系に重要な情報を伝達します。迷走神経の結節神経節には、迷走神経活動を調節する多くの種類の受容体が含まれています。このプロトコルは、神経化学物質を結節神経節に局所注射する方法を説明しています。...

スプラーグ - ドーリーラットのメソッド節状神経節の注入

迷走神経刺激（VNS）は、行動の範囲を変更するには、前脳にターゲットを絞ったシナプス可塑性を誘導するためのツールと​​して浮上しています。このプロトコルは、恐怖の絶滅メモリの統合を容易にするためにVNSを実装する方法について説明します。...

ツールとしての迷走神経刺激は、絶滅の学習のための関連経路の可塑性を誘導するために

迷走神経刺激は、末梢の炎症を減少させる強力な効果があることが証明されています。ここでは、限られた炎症反応におけるコリン作動性抗炎症メカニズムのさらなる調査を可能にする修正された迷走神経刺激プロトコルを紹介します。...

回復時間の増加とリミテッド炎症反応における迷走神経刺激メカニズムを研究するためにLPSの管理を減少

近赤外蛍光剤や生物学的プローブに組み込まれて染料からの画像データを利用した、ラットの尾静脈注射を検証する方法をご紹介します。尾の前にイメージを作成し、蛍光シグナルの定量化、注入後、注射の品質の評価をしました。...

近く-赤外線-ラベル エージェントとラットの尾静脈注射を検証するための新しいベスト プラクティス

ここでは、脊椎の腰部内腔にカテーテルを移植してラット中枢神経系に薬物を送出する方法について説明する。私たちはアンチセンスオリゴヌクレオチドの送達に焦点を当てていますが、この方法は他の治療モダリティの送達にも適しています。...

ラット中枢神経系におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの子宮内送達

このプロトコルは、同時のトランス脊髄直流刺激を用いたラット腰椎モトニューロンの生体内細胞内記録について説明する。この方法により、膜の特性を測定し、脊髄のアノーダルまたは陰極分極化の前後にモトニューロンのリズミカルな発火を記録することができます。...

生体内でのトランス脊髄直流刺激時の型同定されたラット脊髄モネニューロンの細胞内記録

本プロトコルは、ラットの腹部迷走神経に電極アレイを埋め込むための外科的技術と、埋め込まれたデバイスを使用した慢性電気生理学的検査および刺激の方法を説明する。...

覚醒ラットにおける腹部迷走神経刺激および記録研究のための移植手術

このプロトコルは、経結膜アプローチを使用してラットの視神経にアクセスして注射する独自の技術について説明しています。...

ラット視神経への注射のための経結膜アプローチ

学ぶラットの迷走神経への直接注射法。外科的露出とガラスシリンジを用いた標的薬物送達プロトコルで、自律神経系疾患の前臨床研究における遺伝子治療の可能性を向上させます。

ラットのための直接迷走神経注射プロトコル

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