上顎第二大臼歯のナイロン結紮による進行性歯周炎のマウスモデル

私たちの研究の範囲は、結紮誘発性歯周炎のマウスモデルを使用する歯周炎を助長する細胞的および分子的要因を研究することです。

最近の研究により、炎症の重要性が確立されています。腸内細菌叢の異常と全身性疾患は、歯周炎の発症の決定要因です。

歯周病学で最近使用されている技術には、動物モデル、さまざまな分子に注目するもの、プロテオミクス配列決定、フローサイトメトリー、組織学などが含まれます。

現在の実験上の課題は、全身性疾患と歯周炎の相互作用を理解することに関連しています。

結紮性歯周炎のマウスモデルを使用して、炎症誘発性サイトカイン A および S が妊娠中の歯周炎の発症に関与していることを実証します。

[ナレーター]まず、麻酔をかけたマウスを作業台の上に上を向いて、頭をオペレーターに向けます。緊張せずに各脚をそっと引っ張り、マイクロポアテープで固定して、突然の不随意運動を防ぎます。マウスの体温を維持するために、毛布またはガーゼでマウスを覆います。歯列矯正用ゴムの一端を上切歯の周りに置き、もう一方の端を張力をかけずに上ホルダーに固定します。次に、下切歯の周りに2番目の歯列矯正ゴムを配置し、輪ゴムを使用して下切歯に固定します。次に、頬セパレーターを挿入し、舌を慎重に片側に動かして視認性を高めます。顕微鏡を配置して、最も低い倍率の対物レンズを使用して上臼歯を視覚化します。位置が特定されると、倍率を上げて、オペレーターの快適性と集中力を最適化します。画像が鮮明になったら、最大かつ近位の大臼歯 M1、次の大臼歯 M2、および最小の遠位大臼歯 M3 を特定します。結紮糸の配置には、幅広の縫合糸に比べて機械的損傷が少ないため、6-0 ナイロン縫合糸を使用してください。組織鉗子を使用して、6-0ナイロン縫合糸の遠位先端を持ち、M2の遠位にある口蓋側から乳頭の基部に置きます。歯間口蓋腔の基部に軽い圧力を加えて、頬面に向かって進めます。縫合糸が交差したら、歯間空間を通って頬側に向かって引っ張ります。次に、縫合糸の先端を頬側からM2の近心面の歯間領域の基部に置きます。そっと押して歯間腔を横切り、頬側腔を通って口蓋に戻します。6-0ナイロン縫合糸をそっと引っ張ります。M2の周りに調整された組織鉗子で先端を持ち、3つの簡単な結び目を使用して縫合糸を固定します。次に、細いはさみで縫合糸を切ります。マウスを解放するには、まず下切歯の周りのゴムを取り外し、次に頬のセパレーターを取り外します。次に、上切歯の周りのゴムと脚のマイクロポアテープを取り外します。次に、マウスを作業台から取り外し、舌を片側に保ち、気道を開いた状態に保ち、詰まりを防ぎます。マウスをガーゼまたは布で包み、上向きに置きます。動物を暖かく保ち、布やガーゼで覆い、完全に目覚めるまで観察してください。マウスが正常にまばたきできるようになるまで、各目にヒプロメロースを1滴塗布します。その後、通常のケージに戻します。合字の永続性を確認するには、マウスを取ります。頭と体をしっかりと持ち、組織鉗子を使って口を開けます。ランプライトの下で、M2の周りの6-0ナイロン縫合糸を観察します。組織学によるバイオフィルム形成の確認のために、30日後に安楽死させた動物から上顎を採取します。組織を0.9%塩化ナトリウム溶液で洗浄し、標識された微量遠心チューブに入れます。サンプルを4%パラホルムアルデヒド溶液に2時間固定し、攪拌します。次に、固定されたサンプルを水道水で2時間洗浄します。次に、サンプルを pH 7.3 で 20 日間 4% EDTA の 20 容量で脱灰し、4 日ごとに EDTA を変更します。次に、サンプルをパラフィンに埋め込みます。M2領域から5マイクロメートルの切片を切り取り、ヘマトキシリンとエオシンで染色します。光学顕微鏡で染色切片を観察して、溝上皮、歯肉および歯周線維、高さ、および歯槽稜の完全性の変化を記述します。デジタル編集プログラムを使用して、セメントエナメル質接合部と骨稜の最高点の間の距離を決定することにより、付着損失を測定します。組織測定分析後、マンホイットニー U 検定を使用して対照群と歯周治療群のデータを分析します。歯周炎は、対照群とは対照的に、30日目までにマウスの組織喪失、炎症、出血、および歯肉縁の歯周ポケット形成を誘発します。 組織学的分析により、PT グループでは、歯周ポケットの存在、繊維の剥離、および上皮の頂端移動を伴う重大な構造的損傷が確認されました。頬側と口蓋側の歯肉と骨の細胞核の喪失も見られました。対照的に、CTLグループは健康な組織型を示しました。定量分析により、PT グループでは、頬側が約 209 マイクロメートル、口蓋側が約 254 マイクロメートルで、付着喪失が大幅に増加していることが明らかになりました。