Name: 高効率プラスミド構築のための In vivo アセンブリの利用 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: 学ぶ in vivo アセンブリによる高効率プラスミド構築法。細菌のDNA修復酵素を利用し、特殊な酵素を必要とせず最大99%のクローニング効率を達成。抗生物質耐性菌の遺伝子操作研究に有用です。

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<ol><li>Bertero, A., Brown, S., Vallier, L. Methods of cloning. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBertero%2C+A+%22Basic+Science+Methods+for+Clinical+Researchers%22">Basic Science Methods for Clinical Researchers</a>. Chapter 2, Academic Press. 19-39 (2017).</li>
<li>Garcia-Nafria, J., Watson, J. F., Greger, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IVA+cloning%3A+A+single-tube+universal+cloning+system+exploiting+bacterial+in+vivo+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">IVA cloning: A single-tube universal cloning system exploiting bacterial in vivo assembly.</a> Sci Rep. 6, 27459(2016).</li>
<li>Bubeck, P., Winkler, M., Bautsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+cloning+by+homologous+recombination+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid cloning by homologous recombination in vivo.</a> Nucleic Acids Res. 21 (15), 3601-3602 (1993).</li>
<li>Avilan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assembling+multiple+fragments%3A+the+Gibson+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Assembling multiple fragments: the Gibson assembly.</a> Methods Mol Biol. 2633, 45-53 (2023).</li>
<li>Stukenberg, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Marburg+Collection%3A+A+Golden+Gate+DNA+assembly+framework+for+synthetic+biology+applications+in+Vibrio+natriegens%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">The Marburg Collection: A Golden Gate DNA assembly framework for synthetic biology applications in Vibrio natriegens.</a> ACS Synth Biol. 10 (8), 1904-1919 (2021).</li>
<li>Sambrook, J., Fritsch, E. F., Maniatis, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+cloning%3A+a+laboratory+manual%22">Molecular cloning: a laboratory manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1989).</li>
<li>Engler, C., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Golden+Gate+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Golden Gate cloning.</a> Methods Mol Biol. 1116, 119-131 (2014).</li>
<li>Ma, H., Kunes, S., Schatz, P. J., Botstein, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasmid+construction+by+homologous+recombination+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Plasmid construction by homologous recombination in yeast.</a> Gene. 58 (2-3), 201-216 (1987).</li>
<li>Cao, P., Wang, L., Zhou, G., Wang, Y., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+assembly+of+multiple+DNA+fragments+through+direct+transformation+of+PCR+products+into+E.+coli+and+Lactobacillus%5BTitle%5D)+AND+%22Plasmid%22%5BJournal%5D)">Rapid assembly of multiple DNA fragments through direct transformation of PCR products into E. coli and Lactobacillus.</a> Plasmid. 76, 40-46 (2014).</li>
<li>Conley, E. C., Saunders, V. A., Saunders, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+and+rearrangement+of+plasmid+DNA+during+transformation+of+Escherichia+coli+with+linear+plasmid+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Deletion and rearrangement of plasmid DNA during transformation of Escherichia coli with linear plasmid molecules.</a> Nucleic Acids Res. 14 (22), 8905-8917 (1986).</li>
<li>Conley, E. C., Saunders, V. A., Jackson, V., Saunders, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+intramolecular+recyclization+and+deletion+formation+following+transformation+of+Escherichia+coli+with+linearized+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanism of intramolecular recyclization and deletion formation following transformation of Escherichia coli with linearized plasmid DNA.</a> Nucleic Acids Res. 14 (22), 8919-8932 (1986).</li>
<li>Sung, W. L., Zahab, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-specific+recombination+directed+by+single-stranded+crossover+linkers%3A+specific+deletion+of+the+amino-terminal+region+of+the+beta-galactosidase+gene+in+pUC+plasmids%5BTitle%5D)+AND+%22DNA%22%5BJournal%5D)">Site-specific recombination directed by single-stranded crossover linkers: specific deletion of the amino-terminal region of the beta-galactosidase gene in pUC plasmids.</a> DNA. 6 (4), 373-379 (1987).</li>
<li>Mandecki, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oligonucleotide-directed+double-strand+break+repair+in+plasmids+of+Escherichia+coli%3A+a+method+for+site-specific+mutagenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Oligonucleotide-directed double-strand break repair in plasmids of Escherichia coli: a method for site-specific mutagenesis.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 83 (19), 7177-7181 (1986).</li>
<li>Jones, D. H., Howard, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+method+for+recombination+and+site-specific+mutagenesis+by+placing+homologous+ends+on+DNA+using+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">A rapid method for recombination and site-specific mutagenesis by placing homologous ends on DNA using polymerase chain reaction.</a> Biotechniques. 10 (1), 62-66 (1991).</li>
<li>Kostylev, M., Otwell, A. E., Richardson, R. E., Suzuki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+should+be+simple%3A+Escherichia+coli+DH5alpha-mediated+assembly+of+multiple+DNA+fragments+with+short+end+homologies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Cloning should be simple: Escherichia coli DH5alpha-mediated assembly of multiple DNA fragments with short end homologies.</a> PLoS One. 10 (9), e0137466(2015).</li>
<li>Chen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+plasmid+cloning+with+a+universal+MCS+design+and+bacterial+in+vivo+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Simplified plasmid cloning with a universal MCS design and bacterial in vivo assembly.</a> BMC Biotechnol. 21 (1), 24(2021).</li>
<li>Braun, H. G., Kanwal, N., Rivera Lopez, L. F., Thomassin, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+plasmid+series+for+rapid+sub-cloning+and+use+in+various+Enterobacteriaceae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biosci+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Generation of a plasmid series for rapid sub-cloning and use in various Enterobacteriaceae.</a> J Biosci Bioeng. 138 (6), 478-487 (2024).</li>
<li>Kibbe, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OligoCalc%3A+an+online+oligonucleotide+properties+calculator%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">OligoCalc: an online oligonucleotide properties calculator.</a> Nucleic Acids Res. 35 (Web Server issue), W43-W46 (2007).</li>
<li>Wallace, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybridization+of+synthetic+oligodeoxyribonucleotides+to+phi+chi+174+DNA%3A+the+effect+of+single+base+pair+mismatch%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Hybridization of synthetic oligodeoxyribonucleotides to phi chi 174 DNA: the effect of single base pair mismatch.</a> Nucleic Acids Res. 6 (11), 3543-3557 (1979).</li>
<li>Bzymek, M., Lovett, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instability+of+repetitive+DNA+sequences%3A+The+role+of+replication+in+multiple+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Instability of repetitive DNA sequences: The role of replication in multiple mechanisms.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98 (15), 8319-8325 (2001).</li>
<li>Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. -Y., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agarose+gel+electrophoresis+for+the+separation+of+DNA+fragments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments.</a> J Vis Exp. (62), e3923(2012).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inoue+method+for+preparation+and+transformation+of+competent+E.+coli%3A+%26%2334%3Bultra-competent%26%2334%3B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">The inoue method for preparation and transformation of competent E. coli: &#34;ultra-competent&#34; cells.</a> CSH Protoc. 2006 (1), (2006).</li>
<li>Froger, A., Hall, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+plasmid+DNA+into+E.+coli+using+the+heat+shock+method%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transformation of plasmid DNA into E. coli using the heat shock method.</a> J Vis Exp. (6), e253(2007).</li>
<li>Fürste, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning+of+the+plasmid+RP4+primase+region+in+a+multi-host-range+tacP+expression+vector%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning of the plasmid RP4 primase region in a multi-host-range tacP expression vector.</a> Gene. 48 (1), 119-131 (1986).</li>
<li>Bäumler, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+new+iron+regulated+locus+of+Salmonella+typhi%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Identification of a new iron regulated locus of Salmonella typhi.</a> Gene. 183 (1-2), 207-213 (1996).</li>
<li>Godiska, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linear+plasmid+vector+for+cloning+of+repetitive+or+unstable+sequences+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Linear plasmid vector for cloning of repetitive or unstable sequences in Escherichia coli.</a> Nucleic Acids Res. 38 (6), e88(2010).</li>
<li>Watson, J. F., Garcia-Nafria, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+DNA+assembly+using+common+laboratory+bacteria%3A+A+re-emerging+tool+to+simplify+molecular+cloning%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">In vivo DNA assembly using common laboratory bacteria: A re-emerging tool to simplify molecular cloning.</a> J Biol Chem. 294 (42), 15271-15281 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 kb Plus DNA ladder</td><td>FroggaBio</td><td>DM015-R500</td><td>DNA 分子量マーカー</td></tr><tr><td>AccuReady M シングルチャンネル 0.5-10 &micro;L</td><td>Bulldog Bio</td><td>BPP020</td><td>液体移送用ピペット</td></tr><tr><td>AccuReady M シングルチャンネルピペットキット</td><td>Bulldog Bio</td><td>BPK100</td><td>液体移送用ピペット</td></tr><tr><td>寒天</td><td>バイオショップカナダ</td><td>AGR003.1</td><td>増殖培地用固化剤</td></tr><tr><td>アガロー</td>ス<td>バイオベーシック</td><td>D0012</td><td>DNA電気泳動用アガロースゲルを作る</td></tr><tr><td>バイオメトラ TOne&nbsp;</td><td>Analytikjena</td><td>846-2-070-301</td> ガラス培養管用<td>サーモサイクラー</td></tr><tr><td>キャップ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-957-91</td><td>ガラス培養管用再利用可能なキャップ</td></tr><tr><td>DNAプライマー</td><td>統合DNA技術</td><td>N/A</td><td>PCR反応でテンプレートDNAを結合し、増幅する</td></tr><tr><td>DpnI&nbsp;</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>R0176S</td><td>PCR増幅後のメチル化テンプレートDNAの切断</td></tr><tr><td>EcoRI</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>R3101L</td><td>制限酵素、適切な緩衝液が付属しています</td></tr><tr><td>エッペンドルフマイクロチューブ 1.5 mL</td><td>Sarstedt</td><td>72.690.300</td><td>マイクロチューブ、1.5 mL、円錐形ベース、PP、フラットキャップ付き、成形目盛り、つや消しの書き込みスペース</td></tr><tr><td>臭化エチジウム フィ</td><td>ッシャーサイエンティフィック</td><td>AAL0748203</td><td>DNA可視化/インターカレーション剤、毒性</td></tr><tr><td>EZ-10 スピンカラムプラスミドDNA Miniprep Kit</td><td>Biobasic</td><td>BS614</td><td>一晩の細菌培養からプラスミドDNAを分離</td></tr><tr><td>GelDoc Go-Gelシステム</td><td>Bio-Rad</td><td>12009077</td><td>Imaging DNA gels</td></tr><tr><td>ガラス培養チューブ</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-925E</td><td>ガラス培養チューブ</td></tr><tr><td>myGel&nbsp;ミニ電気泳動システム</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>Z742288</td><td>ゲル電気泳動に使用されるシステム</td></tr><tr><td>NanoDrop One</td><td>サーモフィッシャー</td><td>ND-ONE-W</td><td>DNA濃度の測定</td></tr><tr><td>PCRシーケンシングのためのクリーンアップ</td><td>バイオベーシック</td><td>BT5100</td><td>PCR製品の精製&nbsp;</td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>Sarstedt</td><td>82.1473.011</td><td>ペトリ皿 92 x 16 mm, PS, 透明, 換気カム付き</td></tr><tr><td>ピペットチップ, 1000 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.305</td><td>ピペットチップ(100-1000用) & マイクロ;L</td></tr><tr><td>ピペットチップ、2.5 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3010.265</td>ピ<td>ペットチップ(最大2.5μ用);L</td></tr><tr><td>ピペットチップ、20 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3020.200</td>ピ<td>ペットチップ(最大20個用) & マイクロ;L</td></tr><tr><td>ピペットチップ、200 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3030.020</td>ピ<td>ペットチップ(1-200用) & マイクロ;L</td></tr><tr><td>塩 (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-10</td><td>細菌増殖培地の成分 (10 g/L)</td></tr><tr><td>フラットキャップ付き 0.2 mL PCR チューブ単品</td><td>FroggaBio</td><td>TF-1000</td><td>PCR チューブ</td></tr><tr><td>トリプトン (細菌学)</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP402.5</td><td>細菌増殖培地の成分 (10 g/L)</td></tr><tr><td>VeriFi DNA ポリメラーゼ</td><td>PCR バイオシステム</td><td>PB10.42-01</td><td>高忠実度のポリメラーゼ、Mg2+およびdNTPsを含むPCR緩衝液は</td></tr>purchase<tr><td>Xba I</td><td>New England Biolabs</td><td>R0145S</td><td>制限酵素で提供され、適切な緩衝液酵母</td></tr><tr><td>抽出物</td><td>BioShop Canada</td><td>YEX401.205</td><td>細菌増殖培地の成分(5 g / L)</td></tr></tbody></table>が付属しています

高効率プラスミド構築のための in vivo アセンブリの利用

Use of In Vivo Assembly for High-efficiency Plasmid Construction

この原稿では、IVAの使用例として、提供されたIVAワークフローに従って、プラスミドpSU19のマルチクローニング部位にmCherryオープンリーディングフレームを再クローニングし、pSU19mCherryと同一のプラスミドを生成しました（図3)17。IVAに適したプライマーは、プロトコールのステップ1.1および1.2に基づいて設計されました。次に、プラスミド単離キットを使用してpSU19およびpSU18mCherryを単離し、これはそれぞれプラスミド骨格を増幅し、DNAを挿入するためのPCR反応のテンプレートとして機能しました(プロトコルステップ2.1)。pSU19プラスミド骨格をPCR増幅し(プライマーペア:pSU19_F:TAGGGTACCGAGCTCGAATTCおよびpSU19_R CCCGGGGATCCTCTAGAGTC)、mCherryオープンリーディングフレームをpSU18mCherryからPCR増幅しました(プライマーペアmCherry_F:ctctagaggatccccggggATGGTATCAAAAGGAGGA...

高効率プラスミド構築のための In vivo アセンブリの利用

In vivo assembly (IVA) is a molecular cloning method that uses intrinsic enzymes present in bacteria that promote intermolecular recombination of DNA ...

use-of-in-vivo-assembly-for-high-efficiency-plasmid-construction

Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

既製のアクセプター株、と呼ばれる着陸パッド株に興味のある外来DNAを統合するための迅速かつ効率的な方法が記載されている。メソッドは、ΦC31インテグラーゼの結合と表現を通して、与えられた菌株の人工着陸パッドの座にDNAカセットの部位特異的に統合することができます。...

サイト固有の細菌染色体工学：ΦC31インテグラーゼを介したカセット取引所（IMCE）

出典:Tomás、 JM、 et al。細菌の運動性における細菌グリコシルトランスフェラーゼの役割を解明するためのヌル変異体の生成 J. Vis. 経験。(2022)。このビデオは、 大腸菌...

細菌宿主における自殺プラスミドの増幅

遺伝子ターゲティング方法論は、ノックアウト、ノックイン、タグ付き対立遺伝子を持つトランスジェニックマウスを生成するために使用することができます。...

サブクローニングプラス挿入（SPI） - ジーンターゲティングベクターの迅速な構築のための新しい遺伝子改変方法

カスタムプラスミドの合成は、手間と時間がかかります。このプロトコルでは、ギブソンアセンブリクローニングを使用して、カスタムDNAクローニング手順の作業と期間を短縮する方法について説明します。記載されているプロトコルは、従来のカットアンドペーストDNAクローニングと同様のコストで、哺乳類の発現のための信頼性の高いタグ付きタンパク質コンストラクトも生成します。...

ギブソンアセンブリを使用して、ヒト伸長因子1αプロモーターの制御下でFLAGタグ化タンパク質を発現するプラスミドベクターの作製

ジンクフィンガードメインは、本質的に細胞透過性及び広範囲の哺乳類細胞型へのタンパク質の送達を媒介することができる。ここでは、細胞内タンパク質の送達のためのジンクフィンガーの技術を実施するための詳細なステップバイステップのプロトコルが提供される。...

細胞透過性のCysを用いて哺乳動物細胞への直接タンパク質送達<sub&gt; 2</sub&gt; -His<sub&gt; 2</sub&gt;ジンクフィンガードメイン

ここでは、同義語DNA配列への制限酵素部位の挿入および機能的プラスミド回収に基づくプロトコルであるプラスミド回収および制限酵素部位挿入（CAPRRESI）によるキメラアセンブリを提示する。このプロトコールは、タンパク質コード遺伝子を融合するための迅速かつ低コストの方法である。...

CAPRRESI：プラスミド回収および制限酵素部位挿入によるキメラアセンブリ

ウイロイド足場や植物に興味の RNA を含むキメラ RNA の共発現による大腸菌の組換え RNA の大量に生産するためのプロトコルを提案するここでは、tRNA...

エシェリヒア属大腸菌のウイロイド派生システムを使用して円形の足場に組換え Rna の大量生産

このプロトコルの目的は、ゴールデンゲートクローニングに基づくモジュラークローニングシステムを使用して、マルチ遺伝子構造を組み立てるための詳細なステップバイステップガイドを提供することです。また、当社の経験に基づいて最適なアセンブリを確保するための重要な手順に関する推奨事項も示します。...

モジュラーゴールデンゲートクローニングを用いた多遺伝子構造の迅速な組み立て

この記事では、モジュラークローニング(MoClo)をポリシストロンオペロンクローニングにどのように適応させることができるかを示すステップバイステップのプロトコルを紹介します。...

In-Cloning ツールキットを使用したモジュラークローニング (MoClo) によるポリシストロニックオペロンの標準化されたモジュラーアセンブリ

本研究では、染色体配列が既に知られている場合や興味がない場合のプラスミドのナノ孔シーケンシングのワークフローを記述しています。初期のプラスミドDNA濃縮ステップは、最適なプラスミド配列深度を確保し、フローセルあたりのシーケンス可能なサンプル数を最大化します。...

ナノ孔シーケンシングを用いたロングリードプラズミドシーケンシングおよびアセンブリ ワークフロー

学ぶ in vivo アセンブリによる高効率プラスミド構築法。細菌のDNA修復酵素を利用し、特殊な酵素を必要とせず最大99%のクローニング効率を達成。抗生物質耐性菌の遺伝子操作研究に有用です。

高効率プラスミド構築のための In vivo アセンブリの利用

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