Name: 単球マクロファージアッセイを用いた赤血球抗体の意義の予測 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: 学ぶ単球マクロファージアッセイによる赤血球抗体意義の予測法。M1およびM2マクロファージを用いた貪食能の評価と、従来の単球単層アッセイとの比較により、輸血安全性向上に貢献する臨床的応用可能性を示す。

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<ol><li>Tong, T. N., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+monocyte+monolayer+assay+to+evaluate+Fc%CE%B3+receptor-mediated+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Use of a monocyte monolayer assay to evaluate Fcγ receptor-mediated phagocytosis.</a> J Vis Exp. (119), e55039(2017).</li>
<li>Tong, T. N., Cen, S., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+monocyte+monolayer+assay%3A+Past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Transfus+Med+Rev%22%5BJournal%5D)">The monocyte monolayer assay: Past, present and future.</a> Transfus Med Rev. 33 (1), 24-28 (2019).</li>
<li>Frias Boligan, K., Sandhu, G., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+evaluate+the+potential+clinical+significance+of+antibodies+to+red+blood+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc%22%5BJournal%5D)">Methods to evaluate the potential clinical significance of antibodies to red blood cells.</a> Curr Protoc. 2 (8), e504(2022).</li>
<li>Lemay, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+first+case+of+severe+acute+hemolytic+transfusion+reaction+caused+by+anti-Sc2%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The first case of severe acute hemolytic transfusion reaction caused by anti-Sc2.</a> Transfusion. 58 (11), 2506-2512 (2018).</li>
<li>Tong, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+utility+of+a+monocyte+monolayer+assay+in+the+assessment+of+intravenous+immunoglobulin-associated+hemolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The utility of a monocyte monolayer assay in the assessment of intravenous immunoglobulin-associated hemolysis.</a> Transfusion. 60 (12), 3010-3018 (2020).</li>
<li>Srivastava, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SCAR%3A+the+high-prevalence+antigen+013.008+in+the+Scianna+blood+group+system%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">SCAR: the high-prevalence antigen 013.008 in the Scianna blood group system.</a> Transfusion. 61 (1), 246-254 (2021).</li>
<li>Branch, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentially+clinically+significant+anti-Dib+identified+by+monocyte+monolayer+assay+before+transfusion%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Potentially clinically significant anti-Dib identified by monocyte monolayer assay before transfusion.</a> Transfusion. 61 (1), 331-332 (2021).</li>
<li>Italiani, P., Boraschi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+monocytes+to+M1%2FM2+macrophages%3A+Phenotypical+vs.+functional+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">From monocytes to M1/M2 macrophages: Phenotypical vs. functional differentiation.</a> Front Immunol. 5, 514(2014).</li>
<li>Mills, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M1+and+M2+macrophages%3A+Oracles+of+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">M1 and M2 macrophages: Oracles of health and disease.</a> Crit Rev Immunol. 32 (6), 463-488 (2012).</li>
<li>Atri, C., Guerfali, F. Z., Laouini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+human+macrophage+polarization+in+inflammation+during+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Role of human macrophage polarization in inflammation during infectious diseases.</a> Int J Mol Sci. 19 (6), 1801(2018).</li>
<li>Bertani, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classification+of+M1%2FM2-polarized+human+macrophages+by+label-free+hyperspectral+reflectance+confocal+microscopy+and+multivariate+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Classification of M1/M2-polarized human macrophages by label-free hyperspectral reflectance confocal microscopy and multivariate analysis.</a> Sci Rep. 7, 8965(2017).</li>
<li>Murray, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+polarization%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophage polarization.</a> Annu Rev Physiol. 79, 541-566 (2017).</li>
<li>Cohn, C., Delaney, M., Johnson, S. T., Katz, L. M., Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCohn%2C+C+%22Technical+Manual%22">Technical Manual</a>. , 21st Ed, American Association for the Advancement of Blood and Biotherapeutics. Maryland, USA. (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1X PBS、pH 7.4、Ca2+/Mg2+</td><td>Wisent Bioproductsなし&nbsp;</td><td>311-425-CL4</td><td>度または室温で保管&nbsp;</td></tr><tr><td>AccutaseTM</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>7920</td><td>細胞剥離液</td></tr><tr><td>ACK溶解バッファー&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>07850、07800</td><td>4度で保存</td></tr><tr><td>反ヒトグロブリン</td><td>NOVACLONE、Immunocor.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>NOVACLONE ANTI-IGG for IAT試験&nbsp;</td></tr><tr><td>抗Rh(D)(WinRho.SDF CDN)</td><td>Saol Therapeutics&nbsp;</td><td>1003092</td><td>Rh免疫グロビンの任意の商用供給源で十分です&nbsp;</td></tr><tr><td>セルスクレーパー</td><td>UofT Medstore</td><td>83.395</td><td>セル剥離&nbsp;</td></tr><tr><td>セルストレーナー 70uM ナイロン</td><td>ファルコン</td><td>352350</td><td>細胞フィルター&nbsp;</td></tr><tr><td>チャンバースライドヌンク。Lab-TekTM II カバー付 RSスライドガラス 滅菌済み&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td></td><td>MMA用の154534チャンバースライド&nbsp;</td></tr><tr><td>カバースリップ&nbsp;</td><td>VWR</td><td>48393-081</td><td>24 x 50 mm</td></tr><tr><td>Cytiva Ficoll Paque Plus、密度1.077 g / L</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>17-1440-03</td><td>全血からのPBMCSの分離;密度勾配培地</td></tr><tr><td>Elvanol Mounting Medium</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dulbecco'Ca2+/Mg2+、15%(w/v)ポリビニル樹脂、30%(v/v)グリセリンを含まないPBS(D-PBS)。</td></tr><tr><td>新鮮な全血(ACDチューブ)またはバフィーコート</td><td>カナダの血液サービス</td><td></td>最大<td>36時間室温で休むことができます&nbsp;</td></tr><tr><td>ヒト組換えGM-CSF</td><td>幹細胞技術&nbsp;</td><td>78015.1</td><td>M1マクロファージの分極のためのサイトカイン</td></tr><tr>ヒト<td>組換えIFN-γ</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78020</td><td>M1マクロファージの分極サイトカイン</td></tr>ヒト<tr><td>組換えIL-4</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>78045.1</td><td>M2マクロファージの分極のためのサイトカイン</td></tr>ヒト<tr><td>組換えM-CSF</td><td>幹細胞技術&nbsp;</td><td>78057.1</td><td>M2マクロファージの分極用サイトカイン</td></tr><tr><td>ID-CellStab</td><td>Bio-Rad</td><td>005650 05740</td><td>RBC細胞の保存/安定化溶液&nbsp;</td></tr><tr><td>アイソレーション・ミディアム&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>PBS Ca2+ and Mg2+ free + FBS 2% + 1mM EDTA</td></tr><tr><td>Lipopolysaaracide (LPS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L3024-5MG</td><td>M1マクロファージの分極用サイトカイン</td></tr><tr><td>メタノール (100%)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>スライドの固定&nbsp;</td></tr><tr><td>単球単離キット STEM-cells EasySep CD16枯渇なしのヒト単球濃縮キット&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies&nbsp;</td><td>19058</td><td>PBMCからの単球の単離</td></tr><tr><td>Poly-D-ysine&nbsp;</td><td>UofTメドストア&nbsp;</td><td>P6407</td><td>セル接着液&nbsp;</td></tr><tr><td>Rh(D)陽性R2R2 RBCs</td><td>Canadian Blood Services</td><td>N / A</td><td>また、商業的に利用可能な</td></tr><tr><td>RPMI-1640</td><td>Wisent Bioproducts&nbsp;</td><td>350-000-CL</td><td>に10%熱不活化FBS、1 mM GlutaMAXサプリメント、1 mM HEPES、および1%ペニシリン/ストレプトマイシンを添加。4度で保管してください。&nbsp;</td></tr><tr><td>トリパンブルーソリューション&nbsp;</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>15250061</td><td>セルカウンティングソリューション&nbsp;</td></tr></tbody></table>

単球マクロファージアッセイを用いた赤血球抗体の意義の予測

Prediction of Red Blood Cell Antibody Significance Using the Monocyte-Macrophage Assay

図1の結果は文献と一致しており、マクロファージのM0状態からその後のM1/M2状態への分極が成功したことを示しています。M1およびM2マクロファージを8日間培養し(成長因子を添加して6日間、分極を2日間)、抗Dまたは抗kオプソニン化赤血球を試験しました(図2)。M2マクロファージは、抗D(コントロール)または抗kのいずれかによってオプソニン化されたRBCを持つM1と比較して、高い食作用指数を示します。この結果は、M-MAを使用して実施された他の予備試験と一致しています(表1を参照)。M2マクロファージは、強力なRBC抗体を用いても、M1マクロファージや単球と比較して食作用が強いです(図2B)。 表1は、臨床的に重要であると考えられる特異性を持つ4つの異なるRBC同種抗体の予備的な結果を示しています。抗原陽性赤血球をオプソニン化するために使用され、MMAの単球に...

Derived from monocytes in the bone marrow, macrophages are large, innate immune cells that play a major role in clearing dead cells, debris, tumor cells, ...

prediction-red-blood-cell-antibody-significance-using-monocyte

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、末梢血の初代単球を利用して、ポリD抗体オプソニン化R2R2赤血球によるFcγ受容体媒介性食作用を評価する単球単層アッセイを紹介しています。...

単球単分子膜におけるFcγ受容体駆動型食作用の研究のためのアッセイ

単球由来のマクロファージは自然免疫系の重要な細胞である。ここでは、使用して簡単に説明する...

不定冠詞<em&gt;インビトロ</emヒトマクロファージの分化と偏光の不均一性を研究するために&gt;モデル

このプロトコルは、真核細胞に対する全細胞MALDI-TOF質量分析の使用を説明しています。ここでは、マクロファージの微小環境に応じた複数の活性化状態を分析することにより、この手法の精度を示します。...

全細胞MALDI-TOF質量分析は、マクロファージ活性化の異なるモードを分析するための正確かつ迅速な方法である

ここでは、赤血球に対する抗体により誘導される補体活性化を測定するための2つのアッセイを記載する。現在のアッセイ以上の主要な利点は、それらの定量的かつ簡単に解釈する性質である。...

赤血球上の抗体誘導性補体活性化の定量的検出のための方法

私たちは、ヒトマクロファージの生成のための簡単​​かつ効率的なプロトコルを提示する。バフィーコートは、二重密度勾配遠心分離によって処理され、単離された単球は、次いで、テフロンコーティングした細胞培養バッグ中でマクロファージに分化される。これは、マクロファージ収量を最大化し、その後の実験のために細胞の回収を容易にします。...

ダブル勾配遠心、テフロンコーティングされた細胞培養バッグ中のマクロファージへの分化によるヒト単球の単離

単球単層アッセイ(MMA)は、哺乳類の末梢全血から得られた単離された初代単球を利用して、Fcγ受容体(FcγR)を介した食作用を評価するin...

Fcγ受容体媒介食作用を評価するために、単球単層アッセイの使用

このプロトコールは、成体マウス中枢神経系におけるマクロファージ亜集団のフローサイトメトリーによる分析を提供し、これらの細胞によって発現される複数のマーカーの研究に有用である。...

フローサイトメトリーによる中枢神経系からのミクログリアおよび単球由来マクロファージの解析

ここで全血フローサイトメトリーによる単球サブセットを特徴付けるためのプロトコルを提案する.これには、サブセットのゲートおよび表面マーカーの発現を評価する方法を概説し、(炎症性) M1 と M2 マーカー (抗炎症)...

全血によって人間の Monocyte のサブセットの解析フローのフローサイトメトリー解析

ここでは、マウスモデルにおける血液単球の化学的活性を定量化し、血液単球に対する栄養、薬理学的および遺伝的介入の影響を評価し、マクロファージ由来の血液単球を特徴付けるプロトコルを提示する。単球化学集性タンパク質-1(MCP-1)装填系地下膜由来ゲルプラグを用いてマウスモデルを用いる。...

生体内における単球血球活性の定量化と血液単球由来マクロファージの特性化

サイトカイン放出アッセイ参照試薬を使用することで、免疫療法モノクローナル抗体の再現性と標準化された in vitro...

モノクローナル抗体の安全性予測のためのサイトカイン放出アッセイの頑健性を確認するための参照試薬の使用

単球とマクロファージは、健康と病気に不可欠な非常に可塑的で再プログラム可能な免疫細胞です。彼らは、特定の分化プログラムと表現型を採用することにより、幅広い刺激を感知し、反応します。私たちは、マクロファージの分極とリプログラミングを研究するためのin-vitroモデルを標準化し、研究に貴重なツールを提供しています。...

In-vitroアッセイのためのヒト単球由来マクロファージのリプログラミングモデル

学ぶ単球マクロファージアッセイによる赤血球抗体意義の予測法。M1およびM2マクロファージを用いた貪食能の評価と、従来の単球単層アッセイとの比較により、輸血安全性向上に貢献する臨床的応用可能性を示す。

単球マクロファージアッセイを用いた赤血球抗体の意義の予測

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