Name: 行動観察のためのゼブラフィッシュ幼生への揮発性麻酔薬の投与 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 55 s
Description: 学ぶゼブラフィッシュ幼生への揮発性麻酔薬投与法。シリコンシートと96ウェルプレートを用いた密閉チャンバーで、行動実験を低コストで実施できます。Danio rerioを用いた麻酔薬理学研究に適用可能です。

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<ol><li>Wasilczuk, A. Z., Maier, K. L., Kelz, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+as+a+model+organism+for+assessing+anesthetic+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">The mouse as a model organism for assessing anesthetic sensitivity.</a> Methods Enzymol. 602, 211-228 (2018).</li>
<li>Shortal, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+brain+target-controlled+infusion+of+propofol+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and validation of brain target-controlled infusion of propofol in mice.</a> PLoS One. 13, 1-14 (2018).</li>
<li>Halbach, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yolk+sac+of+zebrafish+embryos+as+backpack+for+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Yolk sac of zebrafish embryos as backpack for chemicals.</a> Environ Sci Technol. 54 (16), 10159-10169 (2020).</li>
<li>Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vertebrate+model+to+reveal+neural+substrates+underlying+the+transitions+between+conscious+and+unconscious+states%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states.</a> Sci Rep. 10, 1-10 (2020).</li>
<li>Stetter, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+anesthesia+in+amphibians%3A+Comparison+of+five+application+methods%5BTitle%5D)+AND+%22In+American+Association+of+Zoo+Veterinarians%22%5BJournal%5D)">Isoflurane anesthesia in amphibians: Comparison of five application methods.</a> In American Association of Zoo Veterinarians. , Puerto Vallarta, Mexico. 255-257 (1996).</li>
<li>Woll, K. A., Eckenhoff, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+to+identify+anesthetic+ligands+using+Xenopus+laevis+tadpoles%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening to identify anesthetic ligands using Xenopus laevis tadpoles.</a> Methods Enzymol. 602, 177-187 (2018).</li>
<li>Meyer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zur+Theorie+der+Alkoholnarkose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Exp+Pathol+Pharmakol%22%5BJournal%5D)">Zur Theorie der Alkoholnarkose.</a> Arch Exp Pathol Pharmakol. 46, 338-346 (1901).</li>
<li>Downes, H., Courogen, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+effects+of+anesthetics+in+tadpole+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Contrasting effects of anesthetics in tadpole bioassays.</a> J Pharmacol Exp Ther. 278, 284-296 (1996).</li>
<li>Kalueff, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+comprehensive+catalog+of+zebrafish+behavior+1.0+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond.</a> Zebrafish. 10, 70-86 (2013).</li>
<li>Abramova, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+pregnanolone+glutamate+and+its+metabolites+on+GABAA+and+NMDA+receptors+and+zebrafish+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Effects of pregnanolone glutamate and its metabolites on GABAA and NMDA receptors and zebrafish behavior.</a> ACS Chem Neurosci. 14, 1870-1883 (2023).</li>
<li>Germann, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+behavioral+effects+of+GABAergic+low-and+high-efficacy+neuroactive+steroids+in+the+zebrafish+larvae+assay%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Comparison of behavioral effects of GABAergic low-and high-efficacy neuroactive steroids in the zebrafish larvae assay.</a> ACS Chem Neurosci. 15, 909-915 (2024).</li>
<li>Hoyt, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photomotor+responses+in+zebrafish+and+electrophysiology+reveal+varying+interactions+of+anesthetics+targeting+distinct+sites+on+gamma-aminobutyric+acid+type+A+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Photomotor responses in zebrafish and electrophysiology reveal varying interactions of anesthetics targeting distinct sites on gamma-aminobutyric acid type A receptors.</a> Anesthesiology. 137, 568(2022).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+locomotor+activities+of+zebrafish+larvae+under+the+influence+of+various+neuroactive+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">Characterization of the locomotor activities of zebrafish larvae under the influence of various neuroactive drugs.</a> Annals Trans Med. 6, 173(2018).</li>
<li>McCarroll, M. N., Gendelev, L., Kinser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavioural+profiling+identifies+GABA+and+serotonin+receptor+ligands+related+to+sedation+and+paradoxical+excitation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavioural profiling identifies GABA and serotonin receptor ligands related to sedation and paradoxical excitation.</a> Nat Commun. 10, 4078(2019).</li>
<li>Plasencia, D. M., Rodgers, L. H., Knighton, A. R., Eckenhoff, R. G., White, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonism+of+propofol+anesthesia+by+alkyl-fluorobenzene+derivatives%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antagonism of propofol anesthesia by alkyl-fluorobenzene derivatives.</a> Sci Rep. 14, 15943(2024).</li>
<li>Dash, S. N., Lipika, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flight+for+fish+in+drug+discovery%3A+A+review+of+zebrafish-based+screening+of+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Lett%22%5BJournal%5D)">Flight for fish in drug discovery: A review of zebrafish-based screening of molecules.</a> Biology Lett. 19, 20220541(2023).</li>
<li>Nelson, J. C., Michael, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+behavior+as+a+gateway+to+nervous+system+assembly+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Zebrafish behavior as a gateway to nervous system assembly and plasticity.</a> Development. 149, 177998(2022).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sevoflurane+postconditioning+ameliorates+cerebral+hypoxia%2Freoxygenation+injury+in+zebrafish+involving+the+Akt%2FGSK-3%CE%B2+pathway+activation+and+the+microtubule-associated+protein+2+promotion%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Sevoflurane postconditioning ameliorates cerebral hypoxia/reoxygenation injury in zebrafish involving the Akt/GSK-3β pathway activation and the microtubule-associated protein 2 promotion.</a> Biomed Pharmacother. 175, 116693(2024).</li>
<li>Abdallah, S. J., Thomas, B. S., Jonz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquatic+surface+respiration+and+swimming+behaviour+in+adult+and+developing+zebrafish+exposed+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Aquatic surface respiration and swimming behaviour in adult and developing zebrafish exposed to hypoxia.</a> J Exp Biol. 218, 1777-1786 (2015).</li>
<li>Targ, A. G., Yasuda, N., Eger, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solubility+of+I-653%2C+sevoflurane%2C+isoflurane%2C+and+halothane+in+plastics+and+rubber+composing+a+conventional+anesthetic+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Solubility of I-653, sevoflurane, isoflurane, and halothane in plastics and rubber composing a conventional anesthetic circuit.</a> Anesth Analg. 69, 218-225 (1989).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug-selective+Anesthetic+insensitivity+of+zebrafish+lacking+%CE%B3-aminobutyric+acid+Type+A+receptor+%CE%B23+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Drug-selective Anesthetic insensitivity of zebrafish lacking γ-aminobutyric acid Type A receptor β3 subunits.</a> Anesthesiology. 131, 1276-1291 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96ウェルガラスマイクロプレート</td><td>ジンサー北米</td><td>3600500</td><td>「これらのガラスマイクロプレートは、特殊な高純度で耐熱性のあるホウケイ酸ガラスで作られており、表面は酸研磨されています。プレートは、標準のSBSマイクロプレートフットプリント(85 x 127 mm)で長方形です。これらのガラスリアクターマイクロプレートは、主に化学用途で使用するために設計されており、530°Cまでの温度に耐性があります。C. オートクレーブ滅菌できます。均質なガラスシートから機械加工され、井戸間で一貫した温度(標準0.2°C以内)を提供する均一な形状と形状が特徴です。」</td></tr><tr><td>2.0 mL 透明、大きな開口部、9 mm スレッドバイアル&nbsp;</td><td>ケムグラスライフサイエンス</td><td>CV-1150-1232</td><td>「開口部が 40% 大きくなったこれらのバイアルは、ロボットアームのオートサンプラーで動作するように特別に設計されています。また、バイアルのネックに限られた容量のインサートを正確に中央に配置する独自のステップバイアル設計も組み込まれています。"</td></tr><tr><td>3M両面テープ9490LE</td><td>アッヴィ社</td><td>24WG90</td><td>「3M ラミネート接着剤 300LSE を使用した 3M 両面テープ 9490LE は、ポリプロピレンや粉体塗装塗料などの多くの低表面エネルギープラスチックを含む、ほとんどの表面に高い接着強度を提供します。アクリル系接着剤は、機械部品に通常使用される油で軽く汚染された表面にも優れた接着力を発揮します。3M両面テープ9490LEは、片面に3Mラミネート接着剤300MPの追加機能を提供し、さまざまなフォームや布地素材(6インチ x 5ヤード)に優れた接着強度を提供します。</td></tr><tr><td>DanioVision観測室</td><td>ノルドゥス</td><td>DVOC-0041</td><td>「DanioVisionは、マルチウェルプレートでのゼブラフィッシュ幼虫のハイスループットテスト用に設計された完全なシステムです。これには、観察室と有名なビデオ追跡ソフトウェア EthoVision XT が含まれています。」</td></tr><tr><td>DanioVision温度制御ユニット</td><td>ノルドゥス</td><td>DVTCU-0011</td><td>「DanioVision温度制御ユニットはフロースルーシステムです。水は、選択した温度でウェルプレートの下に均等に流れます。温度はウェルプレート全体で同じです。」</td></tr><tr><td>Ethovision XT16ソフトウェア</td><td>ノルドゥス</td><td>NSE-EV-ベース</td><td>「EthoVision XTは、Noldusが商標登録したあらゆる動物の行動、動き、活動を追跡および分析する、最も広く適用されているビデオ追跡ソフトウェアです。」</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>ピラマル救命救急</td><td>NDC # 66794-017-10</td><td>吸入用液体、不燃性の非爆発性吸入麻酔薬で、イソフルラン100mLを配合。制御された室温20&ordmで保管;25&ordmに;C</td></tr><tr><td>スコッチウェルド瞬間接着剤プライマーAC79クリア</td><td>3メートル</td><td>「62-3916-0860-1 (品番) C2103N (ロット)」</td><td>「3M Scotch-Weld Instant Adhesive Primer AC79 は、EPDM、シリコーン、その他のゴムなど、接着が困難な低表面エネルギー エラストマーに使用するように設計されています。表面処理と塗布は簡単で、接着剤プライマーは速乾性があるため、作業を迅速に進めることができます。」</td></tr><tr><td>厚さ0.5mmのシリコンシート</td><td>さまざまなサプライヤー</td><td>該当なし</td><td>半透明のシリコンシートは複数のサプライヤーから購入しました</td></tr><tr><td>スピードボール ポップイン ハード ラバー ブレイヤー プラスチック フレーム付き、4 インチ"</td><td>速球</td><td>793728</td><td>「スピードボール ポップイン ハード ブレイヤーには、簡単に掃除できるようにスナップアウトするローラーが付いています。プラスチック製の一体型フレーム、取り外し可能な4インチ幅のローラー付き。純天然ゴムを使用し、研磨仕上げを施しています。硬質ゴム製のブレイヤーは幅 4 インチで、頑丈なプラスチック フレームで接着剤の塗布に最適です。」</td></tr><tr><td>SureSTART 9 mm スクリュー キャップ、レベル 2 ハイスループット アプリケーション、タイプ: AVCS スクリュー キャップ ブラック PP、ホワイト シリコン/レッド PTFE セプタム 1.0 mm</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>6ASC9ST1B</td><td>「Thermo Scientific SureSTART 9 mm スクリューキャップは、開口部が 9 mm のスクリューバイアルで使用してください。パフォーマンスレベル2のキャップは、yルーチンのGC-MSおよびLC-MS分析において、低ブリーディング、堅牢性、および結果の再現性を保証するために製造およびテストされています。オートサンプラーの針の問題を軽減するように設計された、さまざまな硬度値の万能シリコン/PTFEセプタムを備えたポリプロピレンキャップからお選びください。当社のAVCSキャップには、バイアルを閉じる際の最適なシール圧縮を保証するAdvanced Vial Closure Systemテクノロジーが組み込まれています。」</td></tr><tr><td>ウルタンセボフルラン</td><td>アッヴィ社</td><td>NDC # 0074-4456-04</td><td>吸入用揮発性液体は、250 mL のセボフルランを含む琥珀色のボトルに包装されています。制御された室温15&ordmで保管;30&ordmまで;C</td></tr><tr><td>ウィートン液体シンチレーションバイアル、バイアルに取り付けられたキャップ、ガラス、金属箔/パルプ、24-400、20 mL&nbsp;</td><td>DWKライフサイエンス</td><td>986561</td><td>タイプ I ホウケイ酸ガラス管、PET、または HDPE から変換された 20 mL シンチレーションバイアル。キャップ付きでご利用いただけます。</td></tr></tbody></table>

行動観察のためのゼブラフィッシュ幼生への揮発性麻酔薬の投与

Administration of Volatile Anesthetics to Zebrafish Larvae for Behavioral Observation

従来のオープンウェル観察との比較 接着剤のシーリングが自発的な動きに影響を与えるかどうかを評価するために、オープンウェルとシーリングウェルのコントロールを比較しました。 図 2A に見られるように、この記事で説明した実験で使用した標準的な ~30 分間、これらのグループ間で運動に統計的に有意な差は観察されませんでした。他の実験パラダイムがより長い実験曝露を必要とする可能性があることを認識して、2時間の時間経過が実行され、2時間のマークまで動きに統計的な差がないことが示されました( 図2Bを参照)。実験時間が長くなると、動きの差がさらに大きくなる可能性があります。以前の研究では、低酸素症が遊泳行動19に及ぼす悪影響が定量化されており、最終的には実験結果の完全性が損なわれています。したがって、低酸素症および/またはCO2 産生が、オープンウェルコントロールと比較してSMのこの偏差の最も可能性の高い原因であると仮定さ...

This study describes a unique method for administering volatile anesthetics, such as isoflurane and sevoflurane, to larval zebrafish during behavioral ...

administration-volatile-anesthetics-to-zebrafish-larvae-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

我々は、成体ゼブラフィッシュに腹腔内注射を示しています。我々はMicro4コントローラとUltraMicroPump...

アダルトゼブラフィッシュへの腹腔内注射

出典: Morsch, M.,  et.al., 従来のUVレーザー共焦点顕微鏡法による細胞ストレスと死のトリガー. J. Vis. Exp. (2017)...

共焦点顕微鏡を用いたゼブラフィッシュ幼生における選択的単一ニューロンレーザーアブレーション

出典:Schramm, P. et al.頭蓋骨および皮膚の除去による覚醒したゼブラフィッシュの幼虫および幼魚の完全活性脳組織のin vivoイメージング。J. Vis. Exp. (2021)このビデオは、プルキンエ細胞の蛍光タンパク質を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュ幼生の小脳ニューロンのin...

ゼブラフィッシュ幼生の脳のin vivoイメージングによる小脳ニューロンの可視化

ゼブラフィッシュ幼生前脳における細胞外電場電位を記録するためのシンプルな方法が記載されている。方法は、堅牢を提供...

ゼブラフィッシュ幼生における前脳電気生理学的記録

我々の研究室では、7日齢のゼブラフィッシュの幼虫で、いくつかの異なる挙動の検出に有用な新規なハイスループット自動化されたイメージングシステムを開発しました。幼虫は、環境毒素又は薬剤に曝露された後にシステムが動作の微妙な変化を検出するために用いることができる。...

ゼブラフィッシュ幼生における自動化ハイスループット行動分析

個々の細胞に指向性ストレスや死を引き起こすための標的操作は、達成するのが比較的困難でした。ここでは、細胞培養および生きた動物の個々の細胞を選択的にストレスを与えて死滅させるための単一細胞分解能アブレーションアプローチについて、標準的な共焦点UVレーザーに基づいて説明します。...

従来のUVレーザー共焦点顕微鏡を用いて細胞ストレスと死のトリガ

ここでは、生きた麻酔を受けた成人ゼブラフィッシュの心電図を記録し、解釈するための、信頼性の高い、最小限に侵襲的で費用対効果の高い方法を提示する。...

成体ゼブラフィッシュの生体内心電図検査

この記事では、長時間経過共焦点顕微鏡用に脆弱なゼブラフィッシュ胚を取り付ける方法について説明する。この低コストの方法は、任意の反転顕微鏡でイメージングするための通常のガラス底顕微鏡用皿を使用して簡単に行うことができます。取り付けは、異なる濃度でアガロースの層で行われる。...

ゼブラフィッシュ胚全体の延長タイムラプス共焦点顕微鏡法の層状取り付け法

レーザーアブレーションは、生物系の再生を研究するための広く応用できる技術です。提示されたプロトコルは、ゼブラフィッシュ横線で神経間細胞を再生するレーザーアブレーションとその後のタイムラプスイメージングのための標準的なレーザー走査共焦点顕微鏡の使用を記述する。...

ゼブラフィッシュインターニューロマスト細胞における共焦点顕微鏡ベースレーザーアブレーションと再生アッセイ

ここでは、幼虫および若年期までの生体内でゼブラフィッシュ胚性脳を画像化する方法を提示する。この微侵襲的な手順は、電気生理学的アプローチから適応され、成熟したニューロンの細胞および細胞内の詳細へのアクセスを提供し、脳機能および薬物介入を特徴付けるための光遺伝学および神経薬理学的研究と組み合わせることができる。...

目覚めしたゼブラフィッシュ幼虫と頭蓋骨と皮膚除去による若年組織の完全に活性な脳組織のインビボイメージング

ここでは、共焦点顕微鏡を用いて、GCaMPカルシウム指標を発現するトランスジェニックゼブラフィッシュの脳領域における神経活動を調べるための詳細なプロトコルを紹介します。...

インビボ 部分的に拘束されたゼブラフィッシュ幼魚における感覚刺激により誘発される神経活動の共焦点蛍光イメージング

学ぶゼブラフィッシュ幼生への揮発性麻酔薬投与法。シリコンシートと96ウェルプレートを用いた密閉チャンバーで、行動実験を低コストで実施できます。Danio rerioを用いた麻酔薬理学研究に適用可能です。

行動観察のためのゼブラフィッシュ幼生への揮発性麻酔薬の投与

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