Name: ヒト腎尿細管上皮細胞初代培養の単分子膜および三次元条件での培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: 学ぶ ヒト腎尿細管上皮細胞の初代培養と三次元培養の確立方法。シガトキシンによる細胞傷害効果の研究モデルとして、単分子膜および管状構造形成のプロトコルを解説します。

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<ol><li>Rivas, M., Chinen, I., Miliwebsky, E., Masana, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+factors+for+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli-associated+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Risk factors for Shiga toxin-producing Escherichia coli-associated human diseases.</a> Microbiol Spectr. 2 (5), (2014).</li>
<li>Gianantonio, C. A., Vitacco, M., Mendilaharzu, F., Gallo, G. E., Sojo, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hemolytic-uremic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">The hemolytic-uremic syndrome.</a> Nephron. 11 (2), 174-192 (1973).</li>
<li>Alconcher, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolytic+uremic+syndrome+associated+with+Shiga+toxin-producing+Escherichia+coli+infection+in+Argentina%3A+update+of+serotypes+and+genotypes+and+their+relationship+with+severity+of+the+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Hemolytic uremic syndrome associated with Shiga toxin-producing Escherichia coli infection in Argentina: update of serotypes and genotypes and their relationship with severity of the disease.</a> Pediatr Nephrol. 36 (9), 2811-2817 (2021).</li>
<li>Alconcher, L. F., Lucarelli, L. I., Bronfen, S., Meni Battaglia, L., Balestracci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+evolution+of+kidney+function+in+patients+with+STEC-hemolytic+uremic+syndrome+followed+for+more+than+15+years%3A+unexpected+changes%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Dynamic evolution of kidney function in patients with STEC-hemolytic uremic syndrome followed for more than 15 years: unexpected changes.</a> Pediatr Nephrol. 40 (1), 143-150 (2025).</li>
<li>Monteverde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+decrease+in+the+incidence+of+Shiga+toxin-related+hemolytic+uremic+syndrome+as+a+cause+of+kidney+transplantation+at+an+Argentine+Referral+Center%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Transplant%22%5BJournal%5D)">A decrease in the incidence of Shiga toxin-related hemolytic uremic syndrome as a cause of kidney transplantation at an Argentine Referral Center.</a> Pediatr Transplant. 27 (4), e14489(2023).</li>
<li>Sandvig, K., van Deurs, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+ricin+and+Shiga+toxin+into+cells%3A+molecular+mechanisms+and+medical+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Entry of ricin and Shiga toxin into cells: molecular mechanisms and medical perspectives.</a> EMBO J. 19 (22), 5943-5950 (2000).</li>
<li>Obrig, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+Shiga+toxin+mechanisms+of+action+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli Shiga toxin mechanisms of action in renal disease.</a> Toxins (Basel). 2 (12), 2769-2794 (2010).</li>
<li>Karpman, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+renal+cortical+cells+in+the+hemolytic-uremic+syndrome%3A+in+vivo+and+in+vitro+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of renal cortical cells in the hemolytic-uremic syndrome: in vivo and in vitro studies.</a> Infect Immun. 66 (2), 636-644 (1998).</li>
<li>Pistone Creydt, v, Silberstein, C., Zotta, E., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+effect+of+Shiga+toxin-2+holotoxin+and+its+B+subunit+on+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic effect of Shiga toxin-2 holotoxin and its B subunit on human renal tubular epithelial cells.</a> Microbes Infect. 8, 410-419 (2006).</li>
<li>Silberstein, C., Pistone Creydt, V., Gerhardt, E., Nuñez, P., Ibarra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+water+absorption+in+human+proximal+tubular+epithelial+cells+in+response+to+Shiga+toxin-2%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of water absorption in human proximal tubular epithelial cells in response to Shiga toxin-2.</a> Pediatr Nephrol. 23, 1981-1990 (2008).</li>
<li>Márquez, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Escherichia+coli+subtilase+cytotoxin+and+Shiga+toxin+2+on+primary+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Effects of Escherichia coli subtilase cytotoxin and Shiga toxin 2 on primary cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> PLoS One. 9, e87022(2014).</li>
<li>Márquez, L. B., Araoz, A., Repetto, H. A., Ibarra, F. R., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Shiga+toxin+2+on+cellular+regeneration+mechanisms+in+primary+and+three-dimensional+cultures+of+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Effects of Shiga toxin 2 on cellular regeneration mechanisms in primary and three-dimensional cultures of human renal tubular epithelial cells.</a> Microb Pathog. 99, 87-94 (2016).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eliglustat+prevents+Shiga+toxin+2+cytotoxic+effects+in+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Eliglustat prevents Shiga toxin 2 cytotoxic effects in human renal tubular epithelial cells.</a> Pediatr Res. 91 (5), 1121-1129 (2022).</li>
<li>Sánchez, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estradiol+stimulates+cell+proliferation+through+classic+estrogen+receptors+and+GPER-1+in+human+renal+tubular+epithelial+cell+primary+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Estradiol stimulates cell proliferation through classic estrogen receptors and GPER-1 in human renal tubular epithelial cell primary cultures.</a> Biochem Biophys Res Commun. 512, 170-175 (2019).</li>
<li>Fernandez Miyakawa, M., Zabal, O., Silberstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clostridium+perfringens+epsilon+toxin+is+cytotoxic+for+human+renal+tubular+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Exp+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Clostridium perfringens epsilon toxin is cytotoxic for human renal tubular epithelial cells.</a> Hum Exp Toxicol. 30, 275-282 (2011).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+application+of+transcriptomics+and+ceRNA+hypothesis%3A+ln+cRNA-00742%2FmiR-116+targets+CD74+to+mediate+vanadium-induced+mitochondrial+apoptosis+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hazard+Mater%22%5BJournal%5D)">Cooperative application of transcriptomics and ceRNA hypothesis: ln cRNA-00742/miR-116 targets CD74 to mediate vanadium-induced mitochondrial apoptosis in duck liver.</a> J Hazard Mater. 480, 135904(2024).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copper+toxicity+in+the+liver+of+broiler+chicken%3A+insights+from+metabolomics+and+AMPK-mTOR+mediated+autophagy+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Poult+Sci%22%5BJournal%5D)">Copper toxicity in the liver of broiler chicken: insights from metabolomics and AMPK-mTOR mediated autophagy perspective.</a> Poult Sci. 103 (9), 104011(2024).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Caveolin-1+on+the+molybdenum+and+cadmium+exposure+induces+pulmonary+ferroptosis+and+fibrosis+in+the+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Pollut%22%5BJournal%5D)">Role of Caveolin-1 on the molybdenum and cadmium exposure induces pulmonary ferroptosis and fibrosis in the sheep.</a> Environ Pollut. 334, 122207(2023).</li>
<li>Fujiki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockage+of+Akt+activation+suppresses+cadmium-induced+renal+tubular+cellular+damages+through+aggrephagy+in+HK-2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Blockage of Akt activation suppresses cadmium-induced renal tubular cellular damages through aggrephagy in HK-2 cells.</a> Sci Rep. 14, 14552(2024).</li>
<li>Joun, J. I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antioxidative+effects+of+molybdenum+and+its+association+with+reduced+prevalence+of+hyperuricemia+in+the+adult+population%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Antioxidative effects of molybdenum and its association with reduced prevalence of hyperuricemia in the adult population.</a> PLoS One. 19 (8), e0306025(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>コラゲナーゼI型</td><td>Sigma Merck、米国ミズーリ州セントルイス</td><td>637958</td><td></td></tr><tr><td>内皮細胞増殖サプリメント</td><td>Sigma Merck、米国ミズーリ州セントルイス</td><td>E2759</td><td></td></tr><tr><td>マトリゲル基底膜マトリックス</td><td>BD Biosciences、米国。Sigma Merck、米国ミズーリ州セントルイス</td><td>356234</td><td></td></tr><tr><td>70 & ムー;Mポアメッシュフィルター</td><td>BD Bioscience、マサチューセッツ州、米国</td><td>css010070</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミンを含むRPMI 1640培地&nbsp;</td><td>Sigma Merck、米国ミズーリ州セントルイス</td><td>R8758-500ミリリットル</td><td></td></tr><tr><td>ハンクスのバランス塩溶液&nbsp;Ca2+およびMg2+フリー</td><td>Gibco Invitrogen、ニューヨーク州、米国</td><td>14175046</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA溶液</td><td>Sigma Merck、米国ミズーリ州セントルイス</td><td>T4049</td><td></td></tr></tbody></table>

ヒト腎尿細管上皮細胞初代培養の単分子膜および三次元条件での培養

Development of Human Renal Tubular Epithelial Cell Primary Cultures in Monolayers and Three-Dimensional Conditions

Confluent HRTEC 初代培養液は、光学顕微鏡下で観察された同様の形態を示しました(図 1)。細胞は、アクアポリン1(AQP1)およびPECAM CD31 9,12,13に対する抗体を使用した以前の出版物に記載されているように、免疫蛍光によって特徴付けられました。免疫蛍光研究では、HRTECの90%以上がAQP1陽性であることが示され、その起源がヒト腎近位尿細管にあることが示されています。また、どの細胞も内皮抗体PECAM CD319に陽性ではありませんでした。
図2に示すように、HRTECは管状構造(尿細管形成)を形成し、これはヒトの腎臓の元の尿細管と類似しています。BMマトリックスへの播種から約4〜10時間後、HRTE...

Human renal tubular epithelial cell (HRTEC) primary cultures are isolated from kidneys removed from pediatric patients undergoing nephrectomies indicated ...

development-human-renal-tubular-epithelial-cell-primary-cultures

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上皮細胞が3-D細胞凝集体の形成をもたらす生理的条件下で成長することができ、回転細胞培養システムが記載されています。凝集体は、ディスプレイを生成...

回転壁容器バイオリアクター由来3D上皮細胞モデルの培養とその応用

このビデオでは、幅広い分子生物学および細胞培養研究のために、腎尿細管上皮細胞を単離および精製する手順を示します。...

マウス腎細胞単離:腎尿細管上皮細胞の初代培養を単離および作製する技術

このプロトコルは、血管系を介した洗剤の順行性灌流によるSprague...

上皮細胞の再増殖および腎組織の開発のための齧歯類細胞外マトリックスの足場の調製

このプロトコルは、マウス胚からのmetanephric基盤を単離および培養するための方法を記載する。...

マウス胎児腎臓の解剖および培養

このプロトコルは、分離し腎作用前のヴィヴォ、ミトコンドリアの生体エネルギーを含む評価するためにその後サブ培養することができますマウス主要な腎尿細管細胞を特徴付けるコスト効率の高いアプローチを提供します。...

マウスの主な腎尿細管上皮細胞の分離と性質、高スループットの細胞フラックスの解析

この研究は、臓器の発達を研究するための2つの方法、培養胚器官およびオルガノイドの血管化を可能にする鳥類胚からの絨毛球膜(CAM)の改善された異種移植セットアップと、新しい固定z方向を説明する。高解像時間経過共焦点イメージングを可能にする改変実験条件を有する臓器培養法。...

血管化、拡張開発、および顕微鏡イメージングの改善のための腎オルガノイドおよびオルガノイド培養の最適化

ここで提示されるのは、高効率(&gt;90%)を有する誘導多能性幹細胞からのヒト腎臓ポドサイトの誘導のための化学的に定義されたプロトコルであり、遺伝子操作または亜集団選択とは無関係である。このプロトコルは、26日以内に望ましい細胞タイプを生成し、腎毒性試験および疾患モデリングに有用であり得る。...

化学的に定義された条件下でのヒト人工多能性幹細胞からの成熟した腎臓ポドサイトの誘導分化

ヒト腎臓結管状尿細管培養は、腎臓生理学と疾患を研究するための貴重な インビトロ...

組織と尿からのヒト腎臓結管状突起の生成

ここでは、コラーゲンおよびコラーゲン-アガロースマトリックスを微生理学的システムに使用して3D細胞培養を実施するための手順を詳しく説明したプロトコルを紹介します。これらのプロトコルは、腎近位尿細管と腎細胞がんのスフェロイド共培養をサポートし、 in vivo...

腎臓癌の進行をモデル化するための腎臓健康と腫瘍上皮のマイクロ流体共培養

私たちは、ヒト腎臓全体を処理して一次腎近位尿細管上皮細胞を単離および培養するための最適化されたプロトコルと、これらの細胞を3次元、マイクロ流体、微生理学的プラットフォームで適用して腎近位尿細管を再現するためのプロトコールを提示します。...

初代ヒト近位尿細管上皮細胞の単離と腎近位尿細管の微生理学的モデルの作成におけるそれらの使用

学ぶ ヒト腎尿細管上皮細胞の初代培養と三次元培養の確立方法。シガトキシンによる細胞傷害効果の研究モデルとして、単分子膜および管状構造形成のプロトコルを解説します。

ヒト腎尿細管上皮細胞初代培養の単分子膜および三次元条件での培養

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