Name: 無傷のマウス神経網膜におけるグルコースアナログ、6-(N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ)-6-デオキシグルコースの取り込みの測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: 学ぶマウス神経網膜における6-NBDGを用いたグルコース取り込み測定法。蛍光グルコースアナログを使った簡便で低コストなエクスビボ技術により、加齢や神経変性疾患における網膜の糖代謝変化を評価できます。

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<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
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<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
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<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
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<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
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<table><tbody><tr><td>#5鉗子</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td>網<td>膜解剖に使用</td></tr><tr><td>1.5mL微量遠心チューブ</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8 "ニードル</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>解剖中に角膜を穿刺するために使用</td></tr><tr><td>5mLチューブMTC</td><td>バイオ</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50mLチューブVWR</td><td>89039-656</td><td></td><td>によるアバンター</td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>蛍光グコースアナログ</td></tr><tr><td>96ウェルプレート 黒、クリアボトム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>麻酔チャコールフィルター キャニスター</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>麻酔に使用</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>ミリポアシグマ</td><td>SML1774</td><td>GLUT1の阻害用。</td></tr><tr><td>4°Cで遠心分離機にかけます。C</td><td>エッペンドルフ</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>圧縮ガス (5% 二酸化炭素、95% 酸素)</td> <td>エアガス</td><td>UN3156</td><td>麻酔に使用</td></tr><tr><td>湾曲した鉗子</td><td>をセットアップ Roboz 手術器具</td><td>RS-5137</td><td>網膜の解剖に使用</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>エ</td></tr><tr><td>タノールの後にサンプル間のソニケーターを洗浄するために使用されます解剖顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>szX12</td><td>網膜の解剖に使用</td></tr><tr><td>エタノール 200プルーフ</td><td>デコン研究所</td><td>2701</td><td>サンプル間のソニケーターの洗浄に使用する</td></tr><tr><td>泡浮遊チューブラック</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>36-099-2328</td><td>ウォーターバスステップでのインキュベーション中のチューブ用</td></tr><tr><td>一般的なハサミ</td><td>ロボズ手術器具</td><td>RS-680</td><td>網膜に使用解剖</td></tr><tr><td>イソフルラン250mLボトル</td><td>Piramalクリティカルケア</td><td>NDC &nbsp;</td><td>6679401725 麻酔</td></tr><tr><td>イソフルラン装置</td> VWR <td>89012-492</td><td>によって販売されたVetequip</td><td>安楽死の前に麻酔をかけるために使用</td></tr><tr><td>キムワイプ</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレートリーダー</td><td>分子デバイス</td><td>SpectraMax M2マイクロプレートリーダー</td><td>サンプルを読み取るために使用されます</td></tr><tr><td>神経基礎-A メディア</td><td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>ノーズコーン(低プロファイル麻酔マスク)</td><td>ケントサイエンティフィック</td><td>SOMNO-0801</td> 解<td></td></tr><tr><td>剖顕微鏡の客観的なアンセ</td>シアを提供するために使用されます <td>オリンパス</td><td>DFプラポ1x pf</td><td>網膜解剖に使用されます</td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>網膜解剖中に使用</td></tr><tr><td>ピアスアッセイ試薬</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ P20</td><td>オリンパスプラスチック</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ P200、P1000、P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150、76322-154、76322-132</td><td></td></tr><tr><td>ピペットマンピペット P200、P1000、P20、P10</td><td>VWR</td><td>F144055M、F144056M、F144058M、F144059M</td><td></td></tr><tr><td>コンピュータ上の SoftMax Pro ソフトウェア</td><td>分子デバイス</td><td>SoftMax Pro 7 ソフトウェア</td><td>サンプルの読み取りに使用されるソフトウェア</td></tr><tr><td>ソニック ディスクレーブレーター</td><td>サーモフィッシャー科学</td><td>FB50110</td><td>超音波処理サンプル(網膜)</td></tr><tr><td>トランスファーピペットフィ</td><td>ッシャーブランド</td><td>13-711-9AM</td><td>1つのチューブから別のチューブに網膜を移すために使用されます</td></tr><tr><td>バンナスプリングハサミ</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>網膜の解剖に使用</td></tr><tr><td>ウォーターバスを37°Cに設定;C</td><td>N/A</td><td>N/A イン</td><td>キュベーションに使用</td></tr></tbody></table>

無傷のマウス神経網膜におけるグルコースアナログ、6-(n-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ)-6-デオキシグルコースの取り込みの測定

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

図4は、WTマウス網膜を6-NBDGと異なる期間インキュベートした代表的なグルコース蛍光測定値を示しています。30分間のインキュベーション後、6-NBDGのレベルは平均336±27.91AUでしたが、60分後、6-NBDGのレベルは平均616.3±8.38AUに増加しました。さらに30分間のインキュベーションにより、6-NBDG(506.4 ± 5.3 AU)のレベルが低下しました。60分では、結果のばらつきが最小限に抑えられていたため、6-NBDGによる網膜のインキュベーションに最適な時間として選択されました。単位は任意であり、これらの結果は全タンパク質に正規化されていないことに注意してください。
図5は、6-NBDGおよびGLUT1阻害剤BAY-876(最終濃度100 μM)とインキュベートしたWTマウス網膜からのグルコース蛍光測定値を示しています。6-NBDGの取り込みは24%の減少が観察され、神経マウス網膜における6-NBDGの取り込みにはGLUT1非依存...

無傷のマウス神経網膜におけるグルコースアナログ、6-(N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ)-6-デオキシグルコースの取り込みの測定

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

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カットローディング：網膜ニューロン間ギャップ結合トレーサーカップリングの程度を調べるための便利なツール

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細胞外蛍光グルコースアナログ枯渇の測定:マウス臓器におけるグルコース取り込みをex vivoで評価するための代理測定技術

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放射性標識ドーパミンを用いたマウス脳シナプトソームのドーパミン取り込みの測定

成人老化マウスからの単一ニューロンの活性は、特定の脳領域のニューロンを解離し、蛍光膜電位色素イメージングを用いて研究することができる。グルコースの変化に対する応答を試験することによって、この手法は、成体腹内側視床下部ニューロンのグルコース感受性を研究するために使用することができる。...

グルコース感知を勉強する成体マウス由来の膜視床下部腹内側部のニューロンの電位色素イメージング

多くのビジョンを脅かす眼疾患は、網膜血管の機能不全に関連付けられます。したがって、網膜血管応答の測定は、根本的な病態生理学的メカニズムを調査することが重要です。この記事では、マウスの網膜細動脈の分離と血管作動性物質の血管径に及ぼす影響を評価するために準備のための詳しいプロトコルについて説明します。...

マウス網膜細動脈Ex Vivoでの反応性の測定の準備手順

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グルコース取り込みは、FRETベースの遺伝的にコードされたグルコースセンサーによって示されるように、TAR DNA結合タンパク質(TDP-43)タンパク質障害の影響を受ける ショウジョウバエ...

TDP-43蛋白症の ショウジョウバエ モデルにおけるグルコース取り込みの測定

マウス網膜血管系は、血管パターン形成のメカニズムを理解する上で特に興味深いものです。このプロトコルは、視神経乳頭から一定の距離にある蛍光血管造影眼底画像からマウス網膜血管の直径を自動的に測定します。...

マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

我々は繰り返しマウスミクログリアを可視化し、単球を循環させるための方法を説明します。...

慢性二光子用薄型頭蓋骨のウィンドウテクニック in vivoで</em神経炎症のモデルのマウスミクログリアの>イメージング

この記事は、そのままマウスの網膜における蛍光標識神経集団から個々のセルの記録を示しています。二光子赤外線励起を使用してtransgenetically標識された細胞は、それらの光反応、受容野の特性、及び形態を研究するためのパッチクランプ記録を対象としていた。...

無傷の網膜におけるGFP発現細胞集団の電気生理学的特性

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