Name: ヒトCD59/インターメディリシン細胞アブレーションツールを用いた腎マクロファージの急速な枯渇 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-09T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: 学ぶ ヒトCD59/インターメディリシンを用いた腎マクロファージ選択的アブレーション法。マウスモデルで単球による88%再生とCX3CR1/CX3CL1シグナル軸の重要性を解明し、急性腎障害後の免疫監視再構築メカニズムを明らかにする。

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<ol><li>Epelman, S., Lavine, K. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+and+functions+of+tissue+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Origin and functions of tissue macrophages.</a> Immunity. 41 (1), 21-35 (2014).</li>
<li>Nelson, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+renal+mononuclear+phagocytic+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The renal mononuclear phagocytic system.</a> J Am Soc Nephrol. 23 (2), 194-203 (2012).</li>
<li>Wang, Y., Harris, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in renal disease.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (1), 21-27 (2011).</li>
<li>Islamuddin, M., Qin, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+macrophages+and+NLRP3+inflammasomes+in+kidney+diseases+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Renal macrophages and NLRP3 inflammasomes in kidney diseases and therapeutics.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 229(2024).</li>
<li>Ricardo, S. D., van Goor, H., Eddy, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+diversity+in+renal+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Macrophage diversity in renal injury and repair.</a> J Clin Invest. 118 (11), 3522-3530 (2008).</li>
<li>Mily, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+of+M1+and+M2+Human+Monocyte-Derived+Cells+and+Analysis+with+Flow+Cytometry+upon+Mycobacterium+tuberculosis+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polarization of M1 and M2 Human Monocyte-Derived Cells and Analysis with Flow Cytometry upon Mycobacterium tuberculosis Infection.</a> J Vis Exp. (163), e61807(2020).</li>
<li>Huen, S. C., Cantley, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Renal+Injury+and+Repair%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Renal Injury and Repair.</a> Annu Rev Physiol. 79, 449-469 (2017).</li>
<li>Tang, P. M., Nikolic-Paterson, D. J., Lan, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages%3A+versatile+players+in+renal+inflammation+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages: versatile players in renal inflammation and fibrosis.</a> Nat Rev Nephrol. 15 (3), 144-158 (2019).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+fate%2C+dynamics+and+niches+of+renal+macrophages+of+bone+marrow+or+embryonic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Distinct fate, dynamics and niches of renal macrophages of bone marrow or embryonic origins.</a> Nat Commun. 11 (1), 2280(2020).</li>
<li>Chew, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney+resident+macrophages+have+distinct+subsets+and+multifunctional+roles%5BTitle%5D)+AND+%22Matrix+Biol%22%5BJournal%5D)">Kidney resident macrophages have distinct subsets and multifunctional roles.</a> Matrix Biol. 127, 23-37 (2024).</li>
<li>Cheung, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+macrophage+subpopulations+occupy+distinct+microenvironments+in+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Resident macrophage subpopulations occupy distinct microenvironments in the kidney.</a> JCI Insight. 7 (20), 161078(2022).</li>
<li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li>
<li>Feng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cre-inducible+human+CD59+mediates+rapid+cell+ablation+after+intermedilysin+administration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Cre-inducible human CD59 mediates rapid cell ablation after intermedilysin administration.</a> J Clin Invest. 126 (6), 2321-2333 (2016).</li>
<li>Hu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+conditional+targeted+ablation+of+cells+expressing+human+CD59+in+transgenic+mice+by+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid conditional targeted ablation of cells expressing human CD59 in transgenic mice by intermedilysin.</a> Nat Med. 14 (1), 98-103 (2008).</li>
<li>Giddings, K. S., Zhao, J., Sims, P. J., Tweten, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+CD59+is+a+receptor+for+the+cholesterol-dependent+cytolysin+intermedilysin%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Struct+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Human CD59 is a receptor for the cholesterol-dependent cytolysin intermedilysin.</a> Nat Struct Mol Biol. 11 (12), 1173-1178 (2004).</li>
<li>Parkhurst, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+promote+learning-dependent+synapse+formation+through+brain-derived+neurotrophic+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia promote learning-dependent synapse formation through brain-derived neurotrophic factor.</a> Cell. 155 (7), 1596-1609 (2013).</li>
<li>Cao, Q., Harris, D. C., Wang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+kidney+injury%2C+inflammation%2C+and+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Macrophages in kidney injury, inflammation, and fibrosis.</a> Physiology. 30 (3), 183-194 (2015).</li>
<li>Li, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+macrophages+in+fibrosis+of+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">The role of macrophages in fibrosis of chronic kidney disease.</a> Biomed Pharmacother. 177, 117079(2024).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Versatile+cell+ablation+tools+and+their+applications+to+study+loss+of+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Versatile cell ablation tools and their applications to study loss of cell functions.</a> Cell Mol Life Sci. 76 (23), 4725-4743 (2019).</li>
<li>Yashchenko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cx3cr1+kidney+resident+macrophage+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cx3cr1 kidney resident macrophage heterogeneity.</a> Front Immunol. 14, 1082078(2023).</li>
<li>Duffield, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+and+immunologic+inflammation+of+the+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophages and immunologic inflammation of the kidney.</a> Semin Nephrol. 30 (3), 234-254 (2010).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+macrophage+phenotypes+contribute+to+kidney+injury+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Distinct macrophage phenotypes contribute to kidney injury and repair.</a> J Am Soc Nephrol. 22 (2), 317-326 (2011).</li>
<li>Wynn, T. A., Vannella, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+in+Tissue+Repair%2C+Regeneration%2C+and+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Macrophages in Tissue Repair, Regeneration, and Fibrosis.</a> Immunity. 44 (3), 450-462 (2016).</li>
<li>Guo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+proximal+tubular+epithelial+cells+and+other+interstitial+cells+in+tubulointerstitial+fibrosis+after+renal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between proximal tubular epithelial cells and other interstitial cells in tubulointerstitial fibrosis after renal injury.</a> Front Endocrinol. 14, 1256375(2023).</li>
<li>Guillot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+acid-activated+macrophages+promote+biliary+epithelial+cell+proliferation+through+integrin+%CE%B1v%CE%B26+upregulation+following+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Bile acid-activated macrophages promote biliary epithelial cell proliferation through integrin αvβ6 upregulation following liver injury.</a> J Clin Invest. 131 (9), 132305(2021).</li>
<li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipocyte+Death+Preferentially+Induces+Liver+Injury+and+Inflammation+Through+the+Activation+of+Chemokine+%28C-C+Motif%29+Receptor+2-Positive+Macrophages+and+Lipolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Adipocyte Death Preferentially Induces Liver Injury and Inflammation Through the Activation of Chemokine (C-C Motif) Receptor 2-Positive Macrophages and Lipolysis.</a> Hepatology. 69 (5), 1965-1982 (2019).</li>
<li>Saxena, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Atp6v1g3-Cre+mice+for+investigation+of+intercalated+cells+and+the+collecting+duct%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Generation of Atp6v1g3-Cre mice for investigation of intercalated cells and the collecting duct.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 325 (6), F770-F778 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.45 & マイクロ;Mシリンジフィルター</td><td>ミリポール</td><td>SLHVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>4-15% TGX 染色フリープロテインゲル</td><td>バイオラッド</td><td>4568084</td><td></td></tr><tr><td>6倍のローディングバッファー</td><td>漁夫</td><td>50-103-6570</td><td></td></tr><tr><td>70%エタノール</td><td>WWRライフサイエンス</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>ACK(塩化アンモニウム-カリウム)溶解バッファー</td><td>ギブコ</td><td>A1049201</td><td></td></tr><tr><td>アフィニティー樹脂ビーズ</td><td>ミリポール</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>アンピシリンナトリウム溶液</td><td>ザイモリサーチ</td><td>A1001-5</td><td></td></tr><tr><td>抗CD11b-PE-Cy7(クローンM1/70)</td><td>インビトロゲン</td><td>25-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>抗CD16/32(Fc&γ;RIII/II、クローン93)</td><td>eバイオサイエンス</td><td>48-0161-80</td><td></td></tr><tr><td>抗CD45-e450(クローン30-F11)</td><td>eバイオサイエンス</td><td>48-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>アンチF4/80-BV605(クローンBM8)</td><td>バイオレジェンド&nbsp;</td><td>123133</td><td></td></tr><tr><td>抗hCD59-PE(クローンOV9A2)</td><td>インビトロゲン</td><td>12-0596-42</td><td></td></tr><tr><td>アクアライブ/デッド染料</td><td>インビトロゲン</td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;L34957A</td><td></td></tr><tr><td>ビーズ(樹脂)</td><td>ミリポール</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>ベンゾナーゼヌクレアーゼ</td><td>ミリポール</td><td>〒70664-10KUN</td><td></td></tr><tr><td>BugBusterタンパク質抽出試薬</td><td>ミリポール</td><td>70584-4</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ用遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>チューブ用遠心分離機</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>75-001-241</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV型</td><td>ワージントンバイオケミカルコーポレーション</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>コーンオイル</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>C8267</td><td></td></tr><tr><td>デオキシリボヌクレアーゼ(DNAse)I</td><td>ワージントンバイオケミカルコーポレーション</td><td>LS002007</td><td></td></tr><tr><td>Detoxi-Gel樹脂カラム</td><td>ミリポール</td><td>69670</td><td></td></tr><tr><td>DPBS(ダルベッコ'sリン酸緩衝生理食塩水)溶液</td><td>コーニング</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTAチューブ</td><td>BDの</td><td>365974</td><td></td></tr><tr><td>FBS(ウシ胎児血清)</td><td>ギブコ</td><td>10082-139</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>漁夫</td><td>BP229-1</td><td></td></tr><tr><td>HBSS(ハンク」s Ballanced Salt Solution)</td><td>ギブコ</td><td>24020117</td><td></td></tr><tr><td>IPTG(イソプロピル&β;-D-1-チオガラクトピラノシド)&nbsp;</td><td>ミリポアシグマ</td><td>206-703-0</td><td></td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>VETワン</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>LBメディア</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRフォルテッサフローサイトメーター</td><td>BDバイオサイエンス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MES [2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸]</td><td>漁夫</td><td>50-488-796</td><td></td></tr><tr><td>MOPS [3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸]</td><td>漁夫</td><td>50-213-522</td><td></td></tr><tr><td>パーコール密度勾配媒体</td><td>サイトバ</td><td>17089101</td><td></td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td></td><td>現在は廃止され、代替手段を使用</td></tr><tr><td>PFA(パラホルムアルデヒド)</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>I28800</td><td></td></tr><tr><td>精製カラム</td><td>ミリポール</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>rリゾチーム溶液</td><td>ノヴァゲン</td><td>20C71110</td><td></td></tr><tr><td>振とう水浴&nbsp;</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>TSSB15</td><td></td></tr><tr><td>Slide-A-Lyzer透析キット</td><td>熱</td><td>66107</td><td></td></tr><tr><td>デオキシコール酸ナトリウム</td><td>漁夫</td><td>BP349-100</td><td>作りたてまたは1ヶ月未満</td></tr><tr><td>滅菌セルストレーナー(40 &m)</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-363-547</td><td></td></tr><tr><td>タモキシフェン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>6734</td><td></td></tr><tr><td>超遠心フィルター</td><td>ミリポール</td><td>UFC900308</td><td></td></tr><tr><td>純水</td><td>熱</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックスミキサー</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>2215365</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-ME(&beta;-メルカプトエタノール)</td><td>漁夫</td><td>BP176-100</td><td></td></tr></tbody></table>

ヒトcd59/インターメディリシン細胞アブレーションツールを用いた腎マクロファージの急速な枯渇

Rapid Depletion of Renal Macrophages Using Human CD59/Intermedilysin Cell Ablation Tool

His-Tag組換えILYの精製は、14で前述したのと同じプロトコルに従っていました。ILYは、Streptococcus intermedius由来のILY遺伝子をコードするプラスミドで形質転換された大腸菌BL21(DE3)細胞で発現することに成功しました。IPTGによる誘導では、標的タンパク質の過剰発現が明らかでした。発現後、ILYをニッケル-NTAアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製し、C末端のHisタグを特異的結合に利用しました。ILYの純度と分子量(~54 kDa)は、SDS-PAGE分析により確認されました（図1A)。タンパク質バンド強度は、ImageJソフトウェアを使用したデンシトメトリーによって定量化され、タンパク質濃度は分光光度分析によってさらに検証され、最終濃度は1.27 mg/mLになりました。精製されたILYの生物学的活性は、コレステロール依存性細胞溶解性を評価するための標準的なアッセイであるヒト赤血球(RBC)を用いた溶血アッセイを用いて評価されました。このアッ...

ヒトCD59/インターメディリシン細胞アブレーションツールを用いた腎マクロファージの急速な枯渇

Renal macrophages (RMs) are essential for kidney health, orchestrating immune surveillance, tissue homeostasis, and responses to injury. Previously, we ...

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Research

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