Name: フローサイトメトリーを用いた損傷脊髄のミクログリアおよび末梢浸潤マクロファージの同定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-24T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 学ぶフローサイトメトリーを用いた損傷脊髄におけるミクログリアと末梢浸潤マクロファージの同定方法。M1様・M2様表現型を評価し、神経炎症の役割解明と中枢神経系疾患治療戦略への応用を目指す。

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<li>Cao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paeoniflorin+suppresses+kidney+inflammation+by+regulating+macrophage+polarization+via+KLF4-mediated+mitophagy%5BTitle%5D)+AND+%22Phytomedicine%22%5BJournal%5D)">Paeoniflorin suppresses kidney inflammation by regulating macrophage polarization via KLF4-mediated mitophagy.</a> Phytomedicine. 116, 154901(2023).</li>
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<table><tbody><tr><td>1&times;PBSの</td><td>&nbsp;ソーラービオ</td><td>P1020</td><td></td></tr><tr><td>10&回;PBSの</td><td>&nbsp;ソーラービオ</td><td>P1022</td><td></td></tr><tr><td>18 匹の 8 週間齢の雌 C57/BL6 マウス&nbsp;</td><td>Cavens Laboratory Animal Ltd、Chang Zhou、中国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>APC-eFluor 780標識ラット抗マウスCCR7(IgG2bカッパ)</td><td>インビトロゲン</td><td>47-1971-82</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>APC-eFluor 780 標識ラット IgG2b kappa&nbsp;アイソタイプコントロール</td><td>インビトロゲン</td><td>47-4321-82</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>APC標識ラット抗マウスCD45(IgG2bカッパ)</td><td>インビトロゲン</td><td>17-0451-82</td><td>0.125&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>APC標識ラットIgG2b kappa&nbsp;アイソタイプコントロール</td><td>インビトロゲン</td><td>17-4031-82</td><td>0.125&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>DMEMの</td><td>ギブコ</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>ロンセラ</td><td>S711-001</td><td></td></tr><tr><td>FITC 標識ラット抗マウス CD68 (IgG2b κ)</td><td>インビトロゲン</td><td>&nbsp;MA5-16676</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>FITC 標識ラット IgG2b kappa&nbsp;アイソタイプコントロール</td><td>インビトロゲン</td><td>11-4031-82</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>バイオシャープ</td><td>23319084</td><td></td></tr><tr><td>PE標識ラット抗マウスCD11b(IgG2bカッパ)</td><td>インビトロゲン</td><td>12-0112-81</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>PE標識ラットIgG2bカッパ&nbsp;アイソタイプコントロール</td><td>インビトロゲン</td><td>12-4031-82</td><td>0.25&ミュー;g/テスト</td></tr><tr><td>パーコール</td><td>&nbsp;ソーラービオ</td><td>P8370</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン溶液</td><td>バイオシャープ</td><td>BL526A型</td><td></td></tr></tbody></table>

フローサイトメトリーを用いた損傷脊髄のミクログリアおよび末梢浸潤マクロファージの同定

Identifying Microglia and Peripheral Infiltrating Macrophages in the Injured Spinal Cords Using Flow Cytometry

脊髄組織からの免疫細胞は、ポリビニルピロリドン密度勾配遠心分離でコーティングされたコロイド状シリカを使用して分離されます。遠心分離プロセスでは、細胞は浮力密度に応じて異なる層に分布し、細胞分離が達成されます(図1)。上から順に、細胞破片、単核細胞に富む層、リンパ球に富む層、そして下部に赤血球と顆粒球の層が分布しています。
M1様細胞およびM2様細胞のFCM解析は、CD68、CD45、CD11b、およびCCR7からなる細胞マーカー発現プロファイルを利用します29,30。CD11b+ CD68+ CCR7+を発現する細胞はM1様細胞と定義され、CD11b+ CD68+ CCR7-細胞はM2様細胞と定義されます。また、CD11b+CD45−...

In a healthy spinal cord, peripheral infiltrating macrophages are almost undetectable, and microglia (MG) participate in maintaining the stability of the ...

identifying-microglia-peripheral-infiltrating-macrophages-injured

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

現在の記事は、効率的効果的にフローサイトメトリー分析に利用することができる脳や脊髄の組織から単核細胞を分離するために迅速なプロトコルを記述します。...

パーコール勾配を用いて脳と脊髄単核細胞の単離

フローサイトメトリーによる負傷者/病理学的な中枢神経系における細胞性炎症の定量は感度/精度を低下させる、細胞に類似した大きさと造粒を持つことができる脂質/ミエリン破片によって複雑になる。我々は、ミエリン破片を除去し、損傷した脊髄のフローサイトメトリーによって細胞の検出を向上させるために細胞の調製法を進めてきた。...

フローサイトメトリーによって負傷した脊髄組織における免疫細胞の定量的評価：セルの精製方法のための新しい使用法

ミクログリアは中枢神経系の防衛と免疫監視の最初の行を提供するマクロファージを常駐しています。...

ノーマルCNSのリアルタイムPCRによると神経炎症時のミクログリアにおけるマイクロRNAの検出

脳卒中後の脳骨髄細胞の特徴づけは、光分留法を用いて、立体解析によって行う、または脳白血球懸濁液のフローサイトメトリー分析により得ることができる。両方は、虚血性脳に見出さ主骨髄細胞サブセットの正確な表現型の区別を行うために有用な技術である。...

一時的または恒久的な脳虚血モデルにおける白血球亜集団の立体解析とフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

二光子生体内イメージングは、背柱外傷性脊髄挫傷を負った骨髄キメラ動物の天然組織環境における脊髄の異なる細胞タイプ間の相互作用を調査するために使用することができます。...

マウス背側列のクラッシュ損傷におけるミクログリアおよびマクロファージと軸索の相互作用の生体内イメージング

このプロトコールは、成体マウス中枢神経系におけるマクロファージ亜集団のフローサイトメトリーによる分析を提供し、これらの細胞によって発現される複数のマーカーの研究に有用である。...

フローサイトメトリーによる中枢神経系からのミクログリアおよび単球由来マクロファージの解析

マウスの坐骨神経内のセルのコンテンツの定量的解析は組織の欠乏のために困難です。このプロトコルでは、組織の消化と個々...

単一の坐骨神経とフローサイトメトリーを使用して単一のマウスの後根神経節における免疫系細胞の解析

ここでは、柱状磁気活性化細胞選別を利用して、脱髄疾患の動物モデルにおける原発性ミクログリアを単離および精製するためのプロトコルを提示する。...

脱髄の動物モデルにおける磁気活性化細胞選別によるマウス原発性ミクログリアの単離

ここでは、ミニ脳卒中モデルでのフローサイトメトリー分析を使用して、虚血性脳卒中後の免疫細胞機能を評価するためのプロトコルを紹介します。この方法は、神経免疫相互作用の詳細な調査を可能にし、他の神経変性疾患の研究にも適応できるため、脳卒中病理における免疫応答の理解を深めることができます。...

ミニ脳卒中マウスモデルにおける神経免疫相互作用の単離とフローサイトメトリー評価

このプロトコルは、フローサイトメトリーとシングルセルRNAシーケンシングを組み合わせて、出生後早期マウス脳の小脳におけるミクログリア細胞の状態を単離し、特徴付けます。酵素解離、パーコール遠心分離、免疫染色を使用してミクログリアの不均一性を明らかにし、小脳の発達と疾患におけるミクログリアの役割の理解を深めます。...

出生後早期マウス脳発生におけるミクログリア活性化を特徴付けるためのフローサイトメトリーと単一細胞解析

学ぶフローサイトメトリーを用いた損傷脊髄におけるミクログリアと末梢浸潤マクロファージの同定方法。M1様・M2様表現型を評価し、神経炎症の役割解明と中枢神経系疾患治療戦略への応用を目指す。

フローサイトメトリーを用いた損傷脊髄のミクログリアおよび末梢浸潤マクロファージの同定

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