Name: 無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 学ぶ、ISOポジティブケージシステムを用いて無菌マウスにヒト糞便微生物叢を移植する方法。がん進行と治療応答における細菌の役割を解明し、マイクロバイオーム研究の新たな知見を得ることができます。

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<ol><li>Park, J. C., Im, S. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+men+in+mice%3A+the+development+and+application+of+a+humanized+gnotobiotic+mouse+model+for+microbiome+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Of men in mice: the development and application of a humanized gnotobiotic mouse model for microbiome therapeutics.</a> Exp Mol Med. 52 (9), 1383-1396 (2020).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiome+remodelling+leads+to+inhibition+of+intestinal+farnesoid+X+receptor+signalling+and+decreased+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Microbiome remodelling leads to inhibition of intestinal farnesoid X receptor signalling and decreased obesity.</a> Nat Commun. 4, 2384(2013).</li>
<li>Schwabe, R. F., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiome+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The microbiome and cancer.</a> Nat Rev Cancer. 13 (11), 800-812 (2013).</li>
<li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+intestinal+microbiota+in+the+development+of+Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and intestinal microbiota in the development of Type 1 diabetes.</a> Nature. 455 (7216), 1109-1113 (2008).</li>
<li>Gray, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+adaptation+of+human+inflammatory+bowel+diseases+microbiota+enhances+colonization+efficiency+and+alters+microbiome+aggressiveness+depending+on+recipient+colonic+inflammatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Mouse adaptation of human inflammatory bowel diseases microbiota enhances colonization efficiency and alters microbiome aggressiveness depending on recipient colonic inflammatory environment.</a> Microbiome. 12 (1), 147(2024).</li>
<li>Gopalakrishnan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+modulates+response+to+anti-PD-1+immunotherapy+in+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 97-103 (2018).</li>
<li>Matson, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+commensal+microbiome+is+associated+with+anti-PD-1+efficacy+in+metastatic+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The commensal microbiome is associated with anti-PD-1 efficacy in metastatic melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 104-108 (2018).</li>
<li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), 91-97 (2018).</li>
<li>Paik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+using+a+hermetically-sealed%2C+positive-pressured+isocage+system+for+studies+involving+germ-free+mice+outside+a+flexible-film+isolator%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Potential for using a hermetically-sealed, positive-pressured isocage system for studies involving germ-free mice outside a flexible-film isolator.</a> Gut Microbes. 6 (4), 255-265 (2015).</li>
<li>Hecht, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+cage-autonomous+method+for+the+maintenance+of+the+barrier+status+of+germ-free+mice+during+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A simple cage-autonomous method for the maintenance of the barrier status of germ-free mice during experimentation.</a> Lab Anim. 48 (4), 292-297 (2014).</li>
<li>Dremova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterility+testing+of+germ-free+mouse+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sterility testing of germ-free mouse colonies.</a> Front Immunol. 14, 1275109(2023).</li>
<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
<li>Le Roy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+microbiota+engraftment+following+fecal+microbiota+transfer+in+mice+models%3A+age%2C+kinetic+and+microbial+status+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of microbiota engraftment following fecal microbiota transfer in mice models: age, kinetic and microbial status matter.</a> Front Microbiol. 9, 3289(2018).</li>
<li>Lebeuf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contaminants+and+where+to+find+them%3A+microbiological+quality+control+in+axenic+animal+facilities%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Contaminants and where to find them: microbiological quality control in axenic animal facilities.</a> Front Microbiol. 12, (2021).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+jejuni+promotes+colorectal+tumorigenesis+through+the+action+of+cytolethal+distending+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Campylobacter jejuni promotes colorectal tumorigenesis through the action of cytolethal distending toxin.</a> Gut. 68 (2), 289-300 (2019).</li>
<li>Wu, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+long-term+dietary+patterns+with+gut+microbial+enterotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Linking long-term dietary patterns with gut microbial enterotypes.</a> Science. 334 (6052), 105-108 (2011).</li>
<li>Ross, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+diet+and+the+gut+microbiome%3A+implications+for+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The interplay between diet and the gut microbiome: implications for health and disease.</a> Nat Rev Microbiol. 22 (11), 671-686 (2024).</li>
<li>Maier, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+impact+of+non-antibiotic+drugs+on+human+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Extensive impact of non-antibiotic drugs on human gut bacteria.</a> Nature. 555 (7698), 623-628 (2018).</li>
<li>Walter, J., Armet, A. M., Finlay, B. B., Shanahan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+or+exaggerating+causality+for+the+gut+microbiome%3A+Lessons+from+human+microbiota-associated+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Establishing or exaggerating causality for the gut microbiome: Lessons from human microbiota-associated rodents.</a> Cell. 180 (2), 221-232 (2020).</li>
<li>Berland, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+engraftment+capacity+of+frozen+ready-to-use+human+fecal+microbiota+transplants+assessed+in+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">High engraftment capacity of frozen ready-to-use human fecal microbiota transplants assessed in germ-free mice.</a> Sci Rep. 11 (1), 4365(2021).</li>
<li>Choo, J. M., Rogers, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+murine+gut+microbiota+in+gnotobiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Establishment of murine gut microbiota in gnotobiotic mice.</a> iScience. 24 (2), 102049(2021).</li>
<li>Bokoliya, S. C., Dorsett, Y., Panier, H., Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+fecal+microbiota+transplantation+in+murine+microbiome+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Procedures for fecal microbiota transplantation in murine microbiome studies.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 711055(2021).</li>
<li>Li, Y., Cao, W., Gao, N. L., Zhao, X. -M., Chen, W. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistent+alterations+of+human+fecal+microbes+after+transplantation+into+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics+Proteomics+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Consistent alterations of human fecal microbes after transplantation into germ-free mice.</a> Genomics Proteomics Bioinformatics. 20 (2), 382-393 (2022).</li>
<li>Turnbaugh, P. J., Ridaura, V. K., Faith, J. J., Rey, F. E., Knight, R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+diet+on+the+human+gut+microbiome%3A+a+metagenomic+analysis+in+humanized+gnotobiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of diet on the human gut microbiome: a metagenomic analysis in humanized gnotobiotic mice.</a> Sci Transl Med. 1 (6), 6ra14(2009).</li>
<li>Staley, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+engraftment+of+human+microbiota+into+mice+with+a+single+oral+gavage+following+antibiotic+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning.</a> Microbiome. 5 (1), 87(2017).</li>
<li>Lebeuf, M., Turgeon, N., Faubert, C., Robillard, J., Paradis, É, Duchaine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Managing+the+bacterial+contamination+risk+in+an+axenic+mice+animal+facility%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Managing the bacterial contamination risk in an axenic mice animal facility.</a> Can J Microbiol. 67 (9), 657-666 (2021).</li>
<li>Basic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+and+contamination+incidence+of+gnotobiotic+experiments+performed+in+microisolator+cages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Monitoring and contamination incidence of gnotobiotic experiments performed in microisolator cages.</a> Int J Med Microbiol. 311 (3), 151482(2021).</li>
<li>Amorim, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+a+protocol+for+faecal+microbiota+engraftment+in+animal+models+after+successful+antibiotic-induced+gut+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Refining a protocol for faecal microbiota engraftment in animal models after successful antibiotic-induced gut decontamination.</a> Front Med. 9, 770017(2022).</li>
</ol>

無菌マウスは、マイクロバイオーム研究者のレパートリーに欠かせないツールであり、宿主の健康状態や疾患状態における微生物叢の寄与を分析することができます。無菌マウスは完全に無菌で生まれ、生涯にわたって無菌のままです1.無菌マウスに特定の細菌株をコロニー形成することで、これらの分類群と代謝、免疫、またはその他の宿主機能との間の原因研究が可能になります2,3,4,5。特に有利なのは、ヒトのドナーから得られた糞便を移植することにより、無菌マウスを微生物叢のレベルで「ヒト化」する能力であり、バリア条件で飼育すると、マウス由来の微生物からの汚染を防ぐことができる1。このアプローチにより、マイクロバイオームの分野で多くの重要な発見、例えば、ヒトの腸内細菌叢ががん免疫療法の反応に及ぼす影響など、多くの重要な発見が可能になりました6,7,8。
しかし、ヒト化無菌マウスはマイクロバイオーム分野の研究努力にとって非常に貴重ですが、このアプローチの広範な適応を阻害する多くの制限があります。無菌マウスは、セミリジッドまたはフレキシブルフィルムの大型アイソレーターで飼育および維持されますが、機能実験では、1つのミニアイソレーターに複数のケージを収容する個別のミニアイソレーターをセットアップする必要がありますが、これは1つの実験条件下でのみ可能です。このミニアイソレータアプローチは、スペースフットプリントとコストを増加させると同時に、実験で調査できる実験条件の数と並行して実行できる実験の数を大幅に制限します。有望な解決策は、ISOcage P Bioexclusion System(ここではisocageシステムと呼ぶ)9,10と呼ばれる個別のモジュール式ケージシステムを使用することです。アイソケージシステムは、個々の密閉された陽圧アイソレーターケージ内で無菌マウスの実験的操作を可能にし、各ミニアイソレーター間ではなく、各ケージ間で別々の実験条件を可能にします。適切な無菌技術により、動物を無菌条件下で最大12週間アイソケージに収容したり、ヒト糞便移植によってヒト化して、互換性のある実験的アプローチ(つまり、無菌条件下で実施可能)で使用することができる。アイソケージシステムを使用して複数の独立した実験を並行して実行でき、ミニアイソレータ間で複数の実験を実行するよりもスペースフットプリントとコストが大幅に削減されます。
無菌マウスをフレキシブルフィルム育種アイソレータで繁殖させる目的は、無菌状態を注意深く保存することである11。無菌状態のモニタリングに使用される技術には、マウスの体表面と口腔の定期的な綿棒、および糞便サンプルの無菌収集が含まれ、これらはPCRベースの商用アッセイによって培養およびテストされます。これらのサンプルの細菌学的、血清学的、および真菌学的検査はすべて、無菌状態を決定するために必要です11。無菌マウスを繁殖アイソレーターからアイソケージに移して実験用に使用する場合、マウスは綿棒で拭き取り、移植時に無菌状態を確認するために試験されます。イソケージの無菌性チェックは、糞便サンプルの無菌収集を通じて実施され、その後、細菌、ウイルス、および真菌の汚染物質を検出するために培養されます。これらのマウスの無菌状態を検証するには、出生から実験プロトコルの終了まで、これらの無菌チェックの結果を注意深く収集して記録する必要があります。
アイソケージシステムは、個々のケージ(図1)、繁殖アイソレーターから輸送するためのトランスファーディスク(図1)、およびケージを収容するアイソケージラック(図2)で構成されています。各アイソケージには、給気口に取り付けられたケージレベルの高効率微粒子空気(HEPA)フィルターと、閉じたときに気密シールを作るシリコンガスケットが含まれており、汚染物質が空気を介してケージに侵入しないようにします(図1A)。このケージの蓋は、滅菌されたバイオセーフティキャビネット内に逆さまに置くと、滅菌作業面として使用できます(図1A)。ケージ内のワイヤーラックには、フードボトルとウォーターボトルが収納されています(図1B)。ケージ内でオートクレーブ滅菌された鉗子は、ケージ内部の表面との接触を必要とするすべての操作に使用されます。ケージ自体には、外側の動物を識別するための取り外し可能なケージカードホルダー用のノッチと、アイソケージラックにドッキングする吸気ノズルとエクスポートノズルがあります(図1C-E)。安全な閉鎖クランプと蓋のタブロックにより、ラックシステムに再度ドッキングする準備ができたときにケージが密閉されます(図1F)。推奨される寝具はAlpha-driであり、オートクレーブ可能な濃縮小屋も推奨されます(図1F)。トランスファーディスクは、無菌マウスを繁殖アイソレーターからアイソケージに移動するために使用され、動物の操作を可能にするために三角形の開口部を備えた回転可能なコンパートメント蓋が含まれています(図1G-H)。ディスクには、小さいサイズ(直径21.6cm)と大きいサイズ(直径28cm)があり、どちらもマウス8匹の容量があります。オートクレーブテープは、ディスクの円周と空気穴に気密シールを作成するために使用され、滅菌剤を浸して滅菌剤を浸した袋で輸送する前に行われます(図1I)。ラックシステム自体には、エアブロワ、ラックレベルのHEPAフィルタステータス、およびラックの非常用バッテリ電源を監視する画面があり、これらはすべてシステムに含まれています(図2A)。密閉されたマグネヘリックゲージは、ケージシステムによって維持される正圧を表示し、自動視覚的なドッキングインジケータはケージのドッキングステータスを示します(黄色のタブアウトは、ケージがドッキングされていないか、ドッキングが失敗したことを意味します)(図2B-D)。また、イソケージの操作には、標準認定のバイオセーフティキャビネットが必要です。
ここで提示するプロトコルは、無菌状態を維持しながら、無菌状態下で無菌マウスを繁殖アイソレーターからアイソケージに成功裏に移送するための適切な方法、ヒトドナー糞便スラリーによる無菌マウスのヒト化、および無菌状態の確認またはさらなる機能研究のための生存能力保存のためのアイソケージに収容されたマウスからの糞便の収集を説明しています。この例では、無菌マウスを、肺がんの免疫療法で治療したヒト被験者のプールされた糞便検体でヒト化し、治療に対するレスポンダーまたはノンレスポンダーとして二分化します。この例では、免疫療法反応に対する反応表現型は、腸内細菌叢のヒト化によってレシピエントマウスに移され、その後、レシピエントマウスに腫瘍細胞をさらに接種して免疫療法で治療することができました。人間の糞便スラリーのプロトコルは、研究者が望む任意のヒトドナーの糞便または任意の疾患の前臨床モデルに容易に適応することができます。このプロトコルを使用すると、任意のヒト糞便ドナー微生物叢を無菌宿主に移植することが可能であり、健康と疾患における微生物叢の役割をさらに調査することができます。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig01.jpg"> 
図1:アイソケージディスクとトランスファーディスクの概略図(A)ケージ蓋の下面の上面図、内部ケージレベルのHEPAフィルターとシリコンガスケットシールの位置を示すラベル。(B)ケージの内部を上から見た図で、ワイヤーバーの蓋、内部のウォーターボトル、注ぎ口、およびオートクレーブ可能なチャウを保持するためのワイヤーラック内の位置を示すラベルが付いています。(C)ケージカードホルダーのノッチを示すケージの正面図。(D)蓋が上にあるフルケージの上から見た図で、HEPAフィルターがエアインテークノズルにどのように取り付けられているかを示しています。(E). アイソケージラックシステムにドッキングする吸気ノズルとエクスポートノズルを示すケージの背面図。(F)蓋が上にあるフルケージの側面図で、開いた位置にある安全なクロージャークランプを示すラベルがあり、各クランプに白いタブがそれらを所定の位置にロックします。ケージの内部には、底にAlpha-driの寝具が重ねられており、寝具の中に置かれたエンリッチメント小屋が示唆されています。(G)上部に蓋をしたトランスファーディスクの上から見た図。(H)トランスファーディスクの内部を上から見た図で、動物の操作を可能にする三角形の開口部を備えた回転可能なコンパートメント蓋を示しています。(I)完全に組み立てられたトランスファーディスクの側面図は、繁殖アイソレーターからアイソケージへのトランスファー中に気密シールを作成するオートクレーブテープの配置を示しています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig02.jpg"> 
図2:アイソケージラックシステムの概略図(A)ケージがドッキングされ、エアブロワーの状態、HEPAフィルターの状態、および非常用バッテリーの監視画面を示すラベルを備えた完全なアイソケージラック。ラックの左下には、ラックレベルの HEPA フィルター用のスロットがあります。(B)ラックによって維持される正圧を示す同封のマグネヘリックゲージ。(C)目に見える黄色のドッキングインジケータがないドッキングされたアイソケージで、ラックとエアノズルの間の接続が成功したことを示しています。(D)ラック内の空のスロットで、ラックが所定の位置になく、エアノズルがアイソケージに接続されていないことを示す目に見える自動視覚的なドッキングインジケーターがあります。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>1 mL BDスリップチップシリンジ滅菌、単回使用</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mLスクリューキャップチューブ、ノンローレット、スカート付き、ナチュラル、Eビーム滅菌チューブ、キャップ付き</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>36 x 32 x 48" 3ミルガセットポリバッグ</td><td>Uline</td><td>S-13455</td><td></td></tr><tr><td>Exspor二酸化塩素二酸化物滅菌活性剤の5ガロンタンク&nbsp;</td><td>エコラボ</td><td>6301680</td><td></td></tr><tr><td>Exspor 二酸化塩素滅菌剤ベースの 5 ガロン タンク&nbsp;</td><td>エコラボ</td><td>6301194</td><td></td></tr><tr><td>600 mL ポリプロピレン ビーカー</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>S01914</td><td></td></tr><tr><td>ALPHA-dri 寝具</td><td>シェパード 専門紙</td><td></td><td></td></tr><tr><td>嫌気性チャンバー</td><td>コイ ラボ 製品</td><td>タイプ B</td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティ キャビネット クラス 2</td><td>ヌアイレ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>認定 Isoケージ オートクレーブ可能 HEPA フィルター XT 極端な温度</td><td>Tecniplast</td><td>1245ISOFHXT</td><td></td></tr><tr><td>クリアレンズLPXIQuity安全ゴーグル&nbsp;</td>デュポン<td>922205455</td><td></td><td>ファスナル</td></tr><tr><td>&nbsp;タイベック&nbsp;スリーブ - 18"</td><td>Uline</td><td>S-13893E</td><td></td></tr><tr><td>DWK Life Sciences DURAN 45 mm プッシュオン天然ゴムキャップ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>01-258-107</td><td>1 L オートクレーブボトル用ラバーキャップ</td></tr><tr><td>ダイナロンクイックミスト HDPE 噴霧器ボトル</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>03-438-12B</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーブランポリプロピレンメスシリンダー</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>03-007-44</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーブラン&nbsp;鈍く尖った鉗子を解剖</td><td>する フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>08-887</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーブランドインスタントシーリング滅菌ポーチ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>01-812-51</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーブランド ストレート ブロード ストロングチップ 一般用途 鉗子&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>16-100-107</td><td></td></tr><tr><td>フィッシャーブランド&nbsp;鉛フリーオートクレーブテープ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>15-901-110</td><td></td></tr><tr><td>強制ニードル、再利用可能なステンレス鋼。直。22ゲージ針、先端直径1.25 mm、長さ38 mmまたは1.5インチ(DOZ)</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-PK 020</td><td></td></tr><tr><td>H-B Instrument Durac Timer</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-202-015</td><td></td></tr><tr><td>IsoPositive Cages and Rack (i.e. isocages)</td><td>Tecniplast&nbsp;&nbsp;</td><td>ISO30P</td><td>30ケージ(6 w x 5 h)、片面</td></tr><tr><td>ニトリル耐薬品性手袋サイズS(7)、M(8)またはL(9)長さ18インチ、22ミル、Ansell</td><td>Grainger</td><td>4T426</td><td></td></tr><tr><td>ニトリル試験用手袋、中、非滅菌、パウダー</td><td>フリーMedSupply Partners</td><td>KG-1101M</td><td></td></tr><tr><td>オリーブ/マゼンタバヨネットガス&ベーパーカートリッジ/パティキュレートフィルター 2Ct&nbsp;</td><td>&nbsp;マウス用3M /ファスナル50051138541878</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ポリカーボネートRadDiskミニ 8-75 x 4</td><td>Braintree Scientific</td><td>IRD-P M</td><td></td></tr><tr><td>ポリプロピレンブーファンキャップ - 24 インチ、ブルー</td><td>Uline</td><td>S-10480BLU</td><td></td></tr><tr><td>ピューリタン ケーリー・ブレア ミディアム、5 mL</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>S、M および L ブルー シリコン デュアルモード ヘッド ハーネス ハーフ マスク レスピレーター&nbsp;</td><td>&nbsp;3M /ファスナル</td><td>50051131370826</td><td></td></tr><tr><td>SGPFFシリーズ滅菌パウダーフリーラテックス手袋、CTインターナショナル、厚さ= 6.5 mm、長さ= 30.5 cm(12)、グローブサイズ= 8.5、グローブカラー=ホワイト</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>18-999-102F</td><td></td></tr><tr><td>スキッド耐性シューズ</td><td>カバーUline</td><td>&nbsp;S-25639</td><td></td></tr><tr><td>手術用ガウン、タオル、滅菌済み、大、32/cs</td><td>Thomas Scientific</td><td>KIM 95111</td><td></td></tr><tr><td>Teklad Global 18% タンパク質押出げっ歯類ダイエット (滅菌可能)&nbsp;</td><td>Inotiv</td><td>2018SX</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene ヘビーデューティー長方形LLDPEタンク(カバー付き)(20 L容量)</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-831-330J</td><td></td></tr><tr><td>VERIFY Dual Species Self Contained Biological Indicators</td><td>Steris Healthcare</td><td>S3061</td><td></td></tr><tr><td>WypAll L40 1&frasl;4つ折りワイ</td><td>パーUline</td><td>S-8490</td><td></td></tr></tbody></table>

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのbioexclusion isopositive cage実験の調製と維持

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

ICIレスポンダーおよびノンレスポンダー表現型(プロトコルで以前に記載)によってプールされたヒト糞便サンプルを、グループごとに3つのアイソケージ(n = 1-2マウス/ケージ、レスポンダーのn = 6、ノンレスポンダーのn = 5)に飼育された男女混合GF-WTマウスに強制経口投与しました。マウスは、移植後1週間順応させられました。次に、これらのマウスから糞便サンプルを採取しました(無菌条件)。次いで、マウスをレスポンダーまたはノンレスポンダープールヒト糞便のいずれかの1×107CFU で強制経口投与した。その後、便は強制経口投与の1、2、および4週間後に採取されました。糞便サンプルは、無菌マウスの汚染物質の検出率が100%であるため、糞便サンプル14に加えて、ケージの寝具、水などをテストする必要はありません。これらのマウスの無菌状態を確認するために、移植後1週間でヒト糞便移植の前に、各マウスから1つの便ペレットを採取し、秤量した後、直ちに嫌気性チャンバーに移しました。各便サンプルを 1 mL の滅菌嫌気性リン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した後、ペレット ペストル コード...

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、機能的なヒト免疫システムと安定した生着したヒト様腸内細菌叢を持つ二重ヒト化骨BLT(骨髄、肝臓、胸腺)マウスを生成する方法を示しています。...

二重ヒト化BLT(骨髄、肝臓、胸腺)マウスモデルの生成

このビデオは、結腸炎症のあるインターロイキン-10欠損マウスに糞便微生物叢移植の手順を示しています。腸内でコロニー形成された糞便微生物は二次代謝産物を放出し、抗炎症性サイトカイン放出を誘発し、結腸の炎症を軽減します。...

インターロイキン-10欠損マウスにおける糞便微生物叢移植の影響の評価

これらの細胞がさまざまな腸および全身の疾患において重要な役割を果たすという認識が高まっているため、腸リンパ球の定量的特性評価への関心が高まっています。このプロトコルでは、その後のフローサイトメトリー特性評価のために、異なる小腸コンパートメントから単一細胞集団を分離する方法について説明します。...

マウスの小腸リンパ球の単離およびフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

機能的なヒト免疫系と安定なヒト様腸内微生物叢を特徴とする二重ヒト化BLTマウスを生成する新しい方法について述べた。このプロトコルは、無菌マウスまたはグノトバイオティック施設を必要とせずに従うことができる。...

安定したヒト様腸内微生物叢とヒト免疫系を特徴とする二重ヒト化BLTマウスモデル

炎症性腸疾患(IBD)の病因には、遺伝的感受性、粘膜免疫、腸の微小生態学的環境の相互作用が関与しています。本研究では、糞便微生物叢移植をIL-10欠損マウスに適用し、結腸の炎症と心機能への影響を調べました。...

インターロイキン10欠損マウスモデルにおける糞便微生物叢移植の治療的評価

ここでの目標は、心血管疾患における嚥下障害のメカニズムを調査するためのプロトコルの概要を説明することです。本稿では、マウスの糞便を無菌的に採取・移植し、腸管を分離し、「スイスロール」法を用いて消化管の変化を調べる免疫染色法について論じる。...

マウス糞便分離と微生物叢移植

ここでは、イムノフェノタイピングのための採血を例に、ワイルディングマウスの施設における微生物封じ込め対策を含む構造と運用手順について述べる。...

天然マイクロバイオームを持つ実験用マウスの施設の手術および生物学的封じ込め手順:イムノフェノタイピング手順

このプロトコルは、嫌気性条件下での複雑な糞便群集の連続フロー培養に利用されるミニバイオリアクターアレイの組み立てを詳述しています。また、さらなる分析のために、反応器の組み立て、接種、およびサンプリングの方法についても説明します。...

複雑な糞便群集の連続培養のためのバイオリアクターアセンブリ

本プロトコルは、非炎症条件下で pks+大腸菌 をマウスに定着させるために必要な手順と、便中での pks+大腸菌 の拡大の定着と評価のための非侵襲的手法を説明しています。...

非炎症条件下でのマウス pks+大腸菌 の定殖

ライム病の調査研究は、多くの場合、病原体ボレリアブルグドルフェリ、通常は数週間かかるプロセスに感染したダニの発生を必要とする。ここでは、時間内で達成可能なマイクロインジェクションベースのダニの感染症の手順を示しています。我々はまた、ダニの中でB.ブルグドルフェリのin...

ティック腸内ライム病の病原体の迅速な伝達とローカリゼーションのための方法

学ぶ、ISOポジティブケージシステムを用いて無菌マウスにヒト糞便微生物叢を移植する方法。がん進行と治療応答における細菌の役割を解明し、マイクロバイオーム研究の新たな知見を得ることができます。

無菌マウスへのヒト糞便移植のためのBioexclusion IsoPositive Cage実験の調製と維持

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