Name: 複雑な糞便群集の連続培養のためのバイオリアクターアセンブリ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: 学ぶミニバイオリアクターアレイの組み立て法。複雑な糞便微生物叢を連続培養し、嫌気性条件下で特定プロセスの微生物群集への影響を制御下で検討できます。並列実験により迅速な結果取得が可能です。

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<ol><li>Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+estimates+for+the+number+of+human+and+bacteria+cells+in+the+body%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Revised estimates for the number of human and bacteria cells in the body.</a> PLoS Biol. 14 (8), e1002533(2016).</li>
<li>Postler, T. S., Ghosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+holobiont%3A+how+microbial+metabolites+affect+human+health+and+shape+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Understanding the holobiont: how microbial metabolites affect human health and shape the immune system.</a> Cell Metab. 26 (1), 110-130 (2017).</li>
<li>Rooks, M. G., Garrett, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+metabolites+and+host+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, metabolites and host immunity.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 341-352 (2016).</li>
<li>Auchtung, J. M., Robinson, C. D., Farrell, K., Britton, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiniBioReactor+Arrays+%28MBRAs%29+as+a+tool+for+studying+C.+difficile+physiology+in+the+presence+of+a+complex+community%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">MiniBioReactor Arrays (MBRAs) as a tool for studying C. difficile physiology in the presence of a complex community.</a> Methods Mol Biol. 1476, 235-258 (2016).</li>
<li>Han, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+metabolomics+pipeline+for+the+mechanistic+interrogation+of+the+gut+microbiome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A metabolomics pipeline for the mechanistic interrogation of the gut microbiome.</a> Nature. 595 (7867), 415-420 (2021).</li>
<li>Bilinski, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fresh+versus+frozen+stool+for+fecal+microbiota+transplantation-assessment+by+multimethod+approach+combining+culturing%2C+flow+cytometry%2C+and+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Fresh versus frozen stool for fecal microbiota transplantation-assessment by multimethod approach combining culturing, flow cytometry, and next-generation sequencing.</a> Front Microbiol. 13, 872735(2022).</li>
<li>Li, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+stool+sample+preservation+methods+on+gut+microbiota+biodiversity%3A+New+original+data+and+systematic+review+with+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Effects of stool sample preservation methods on gut microbiota biodiversity: New original data and systematic review with meta-analysis.</a> Microbiol Spectr. 11 (3), e0429722(2023).</li>
<li>Fouhy, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+freezing+on+faecal+microbiota+as+determined+using+MiSeq+sequencing+and+culture-based+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The effects of freezing on faecal microbiota as determined using MiSeq sequencing and culture-based investigations.</a> PLoS One. 10 (3), e0119355(2015).</li>
<li>Sun, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-derived+metabolic+factors+reduce+Campylobacteriosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Microbiota-derived metabolic factors reduce Campylobacteriosis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (6), 1751-1763.e2 (2018).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+jejuni+promotes+colorectal+tumorigenesis+through+the+action+of+cytolethal+distending+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Campylobacter jejuni promotes colorectal tumorigenesis through the action of cytolethal distending toxin.</a> Gut. 68 (2), 289-300 (2019).</li>
<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
<li>Ziv, N., Brandt, N. J., Gresham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+chemostats+in+microbial+systems+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of chemostats in microbial systems biology.</a> J Vis Exp. (80), e50168(2013).</li>
<li>Wille, J., Coenye, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+dispersion%3A+The+key+to+biofilm+eradication+or+opening+Pandora%27s+box%5BTitle%5D)+AND+%22Biofilm%22%5BJournal%5D)">Biofilm dispersion: The key to biofilm eradication or opening Pandora's box.</a> Biofilm. 2, 100027(2020).</li>
<li>Biagini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designs+and+methodologies+to+recreate+in+vitro+human+gut+microbiota+models%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-des+Manuf%22%5BJournal%5D)">Designs and methodologies to recreate in vitro human gut microbiota models.</a> Bio-des Manuf. 6 (3), 298-318 (2023).</li>
<li>Qi, Y., Yu, L., Tian, F., Zhao, J., Zhai, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+models+to+study+human+gut-microbiota+interactions%3A+Applications%2C+advances%2C+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro models to study human gut-microbiota interactions: Applications, advances, and limitations.</a> Microbiol Res. 270, 127336(2023).</li>
<li>Gościniak, A., Eder, P., Walkowiak, J., Cielecka-Piontek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+gastrointestinal+models+for+nutraceuticals+research-achievements+and+challenges%3A+A+practical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Artificial gastrointestinal models for nutraceuticals research-achievements and challenges: A practical review.</a> Nutrients. 14 (13), 2560(2022).</li>
<li>Marrero, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut-on-a-chip%3A+Mimicking+and+monitoring+the+human+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Gut-on-a-chip: Mimicking and monitoring the human intestine.</a> Biosens Bioelectron. 181, 113156(2021).</li>
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腸内細菌叢は、細菌、真菌、古細菌、ウイルスなどの微生物の広大なネットワークであり、これらの微生物には、人間の宿主をはるかに上回る膨大な遺伝的および代謝的レパートリーが含まれています1。マイクロバイオームの豊富な代謝能力には、食事栄養素の細菌処理から生成される代謝物、細菌によって化学的に修飾された宿主代謝物、および微生物叢によって一意に合成される代謝物が含まれます2。微生物叢は、ほぼすべての宿主のバイオプロセスに関与していますが、炎症性腸疾患、癌、代謝障害、さらには神経障害などの病状にも関与しています2,3。微生物叢の寄与と宿主の寄与を解剖することは、健康と疾患における特定の微生物または複雑なコミュニティの役割を理解するために不可欠です。この解剖を可能にする1つのアプローチは、ダイナミックな条件下で多様な微生物群集を培養する微生物バイオリアクターの使用です。大規模なバイオ製品の栽培や代謝過程の研究のための特定の栄養因子の正確な制御など、ほぼすべての目的で糞便細菌群集の成長を可能にする多くの市販のバイオリアクターがあります。しかし、これらのシステムは莫大な費用がかかり、広範な準備が必要であり、多様な実験条件を並行して検討することはできません。より安価で、より適応性があり、多くの並列条件を可能にする簡素化されたアプローチのために、ここでは、Auchtung et al.4から適応された連続フロー下でのミニバイオリアクターアレイのセットアップと使用のためのプロトコルを示します。
ミニバイオリアクターシステムの完全なセットアップを 図1Aに示します。このミニバイオリアクターシステムは、互いに完全に独立し、蠕動流下の嫌気性チャンバーに設置された6つのリアクターウェルのアレイを使用して、連続的な培地の送達と除去を可能にします(図1A)。各リアクターアレイは60ポジションの磁気攪拌プレート上に配置され、2つの48カセット蠕動ポンプがソースメディアと廃棄物の流れのための2ストップチューブを保持しています(図1A)。嫌気性チャンバーには、酸素含有量のCAM-12嫌気性モニター、加熱能力で酸素を除去する触媒ボックス、細菌の代謝から余分なガスを吸収する硫化水素除去カラムが装備されています。各リアクターウェルには、ソースメディアインレット、ディスレットアウトレット、サンプルポートが装備されており、個々のリアクターウェルの接種やサンプリングが可能です(図1B)。
前述のように、バイオリアクターシステムは、温度、培地消費、および栄養素の利用可能性を動的に制御し、糞便群集の培養と維持をサポートします。加熱能力のある触媒ボックスによって温度を調節し、嫌気性チャンバー全体の温度変化を迅速に実施することができます。媒体の消費量は、反応器内の媒体回転を変えるために変更できる蠕動ポンプの流量によって制御されます。培地の回転率は、リアクターで培養されるコミュニティタイプに合わせてカスタマイズでき、例えば、成長の遅いまたは非常に急速に成長する標的株に適応させることができます。最後に、栄養素の利用可能性は、各リアクターウェルの個々のサンプルポートを介してコンポーネントを追加することで動的に変更できます。実験の開始時に変更できる静的条件で、システム内で動的制御が行われていないのは、培地の種類、酸素含有量、および同時反応器の数です。調査担当者は、任意のソース メディアを実装することを選択でき、ここでは 1 つのメディアについて説明しますが、他のソース メディア タイプは無数に成功裏に実装されています。反応器は、好気性または微好気性の条件下で運転することができます(微好気性チャンバーの利用可能性によって異なります)。最後に、研究者の実験ニーズに応じて、必要な数のリアクターを設置できます。リアクタはアレイ内に 6 つのセットにありますが、各リアクターは他のリアクターとは独立して動作し、必要に応じてそれぞれを異なるソースにリンクできます。
このモジュール式バイオリアクターシステムは、約25,000ドル(嫌気性チャンバーまたはチャンバー固有のコンポーネントを含まない)で完全にセットアップでき、再利用できない唯一の部品は、システムの実行ごとに100ドル未満で交換できるチューブです。このシステムはほとんどが自動化されていますが、メディアソースのボトルが空になったら交換する必要があるため、メディアレベルを毎日チェックする必要があります。さらに、サンプリングは手動で完了する必要があり、システムに対する動的な条件付き変更(温度の変更など)は手動で開始する必要があります。Auchtungらによって公開された元のシステムプロトコルから、全体的なパフォーマンスとユーティリティ4を改善するためにいくつかの変更が実装されました。まず、バイオリアクターアレイの3Dプリンティング用の材料をABSのような半透明透明プラスチックに改造し、オートクレーブを繰り返してシステムの構造的完全性を向上させます。さらに、外径 1/8 インチ (3.2 mm) の PTFE チューブ、E-LFL、内径 2.06 mm の 100 フィート チューブの代わりに、より頑丈な素材が使用され、崩壊しにくく、システム内の流れが詰まります。最後に、1/4 -28 mmのねじ山からとげのあるオスアダプターを使用した追加のフィッティングを使用して、メディアソースボトルからのチューブの滑りの変化を減らします。Hanらから、適応されたMEGA培地レシピは、気難しい嫌気性微生物の培養を可能にする、未定義で複雑で非常に豊富な培地を提供します5。この培地は、オリジナルが市販されなくなったため、ヒスチジン-ヘマチン成分の代替調製物を利用するように改変されています。水酸化ナトリウムは、培地を7.0または任意のpHにpH化するためにも使用されます。全体として、このシステムは予算とユーザーフレンドリーで、最適化されており、連続フロー培養システムへの優れたエントリーポイントです。
このプロトコルでは、このミニバイオリアクターアレイシステムのセットアップについて、材料、システムの滅菌、その後の腸内ヒト化マウス糞便サンプルの培養への使用などについて詳しく説明します。この方法の全体的な目標は、制御された条件下で微生物群集を培養するために利用できる、適応可能で費用対効果の高いバイオリアクターシステムを構築することです。ミニバイオリアクターシステムの組み立てのワークフローの詳細な概略図を 図2 に示し、プロトコル内の適切なステップで参照します。この例では、ヒト化腸マウスの同じ糞便サンプルを2つのリアクターに接種し、MEGA培地の連続的な流れの下での微生物群集の構造を説明します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2.jpg"> 
図1:嫌気性チャンバー内のミニバイオリアクターアレイセットアップの概略図(A)嫌気性チャンバー内の完成したミニバイオリアクターアレイセットアップの全景。6ウェルバイオリアクターアレイは、60ポジションのマグネチックスタープレート上に配置されています。ソースルアーティーネットワークは、2穴ボトルキャップを介して左側のソースメディアに取り付けられています。2つの蠕動ポンプが、それぞれ左右のソースネットワークと廃棄物ネットワークから2ストップチューブを保持します。廃棄物のルアーティーネットワークは、右側の廃棄物ボトルに空になります。アレイシステムの周囲には、CAM-12モニター、加熱能力付き触媒ボックス、硫化水素除去カラムなど、嫌気性チャンバーの運転に必要な機器が配置されています。(B)1つの反応器ウェルに取り付けられたソース、サンプル、および廃棄物ポートの上面図で、反応器内の適切な高さに媒体があります。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig1v2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2.jpg"> 
図2:ミニバイオリアクターアレイの組み立てワークフローの概略図。 (A)ミニバイオリアクターアレイの上から見た図、ソース、廃棄物、およびサンプルポートの向きを示しています。(B)プロトコルのステップ2.3〜2.4を示すビューを備えたミニバイオリアクターアレイの側面図。1/8インチPTFEチューブとフィッティング(1)を取り付けて、廃棄物ポートとサンプルポートに挿入します。PTFEなしの継手(1)をソースポートに挿入します。(C)プロトコルのステップ2.5〜2.6を示すミニバイオリアクターアレイの側面図。継手(2)は、ソースポートと廃棄物ポートに取り付けられています。サンプルポートには継手(3)が取り付けられており、その上に継手(4)が挿入されています。(D)ステップ2.9-2.11を示すミニバイオリアクターアレイの側面図。E-LFL 2.06 mmチューブはソースポートとウェイストポートに接続され、もう一方の端はフィッティング(5)と(6)に接続されています。次に、適切な直径の2ストップチューブをフィッティング(6)に接続します。次に、2ストップチューブの端で逆接続が繰り返され、フィッティング(6)が2ストップチューブに接続し、フィッティング(5)がそれに接続します。最後に、E-LFL 2.06 mmチューブをフィッティング(5)に接続して、ルアーティーネットワークに接続します。(E)ステップ2.12-2.15で説明したソースと廃棄物ルアーティーネットワークのセットアップを表示するミニバイオリアクターアレイのトップダウンビュー。E-LFL 2.06 mmチューブは、フィッティング(5)で終わるもので、各リアクターを複数のフィッティング(7)に接続するために使用され、その最後の開口部はソースまたは廃液ボトルのキャップに接続されています。(F)ステップ2.16-2.17で説明されている2穴ボトルキャップアセンブリの側面図。キャップの1つの開口部は、ボトルの内側に配置されているPTFEチューブに接続されています。その開口部にはフィッティング(1)が挿入され、続いてフィッティング(2)が挿入され、フィッティング(5)に接続されたE-LFL 2.06mmチューブが挿入されます。このフィッティングは、ソースまたは廃棄物のルアーネットワークに取り付けられています。PTFEチューブに接続されていない開口部には、フィッティング(1)を挿入し、続いてフィッティング(2)を挿入し、E-LFL 2.06mmチューブを別のフィッティング(5)に接続します。この端部は、オートクレーブ滅菌中にホイルでキャップされ、滅菌済みの0.22μMシリンジフィルターに将来取り付けることができます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68035/68035fig2v2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD スリップチップシリンジ滅菌、使い捨て</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>1/4-28 mm スレッドからとげのあるオスアダプター (3.2 mm)、5/パック</td><td>Cole-Parmer</td><td>008NB32-KD5L</td> 6 <td>ウェルアレイを 1 つ構築するには、2 パックが必要です</td></tr><tr><td>10M NaOH (水酸化ナトリウム)</td><td>シグマ</td><td>72068-100ML</td><td></td></tr><tr><td>2.0ml スクリューキャップチューブ、ノンローレット、スカート付き、ナチュラル、電子ビーム滅菌チューブ、キャップ付き</td> フィ<td>ッシャーScientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>2mag MIXdrive 60 撹拌ドライブ</td><td>2mag</td><td>40060</td><td>60 ポジション磁気撹拌プレート (加熱能力の追加 - cat# 40260)</td></tr> <tr><td>6 ウェル リアクター arrray、ABS ライク 半透明 透明 プラスチック</td><td>Protolabs</td><td>カスタム</td><td>3D プリント用 .stl ファイルの補足ファイルを参照してください</td></tr> 無<tr><td>水エタノール (200 プルーフ)フィ</td><td>ッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>BP2818</td><td></td></tr><tr><td>酢酸、氷河</td><td>シグマ</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>アダプター、ナイロン、1/4-28 スレッドへのオス ルアー、25/パック</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-82</td><td>6 ウェル アレイを 1 つ構築するには、6 個 (1 パック) が必要です</td></tr> <tr>アル<td>ミホイル</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>嫌気性チャンバー</td><td>コイ ラボ製品</td><td>タイプ B</td><td></td></tr><tr><td>Bel-Art&nbsp;SP Scienceware ノミ マイクロ スピンバー 磁気撹拌バー (1/pk)</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>22-261679</td><td>6 ウェル アレイを 1 つ構築するには、6 つが必要です。</td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネットクラス2</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>酪酸</td>シ<td>グマ</td><td>B103500&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 & middot; 2H2O (塩化カルシウム二水和物)</td><td>シグマ</td><td>C7902</td><td></td></tr><tr><td>クロロックス ヘルスケア 殺菌ワイプ 漂白剤付き、無香料、6 インチ x 5 インチ、ワイプ 150 枚パック</td><td>オフィス デポ</td><td>129202</td><td></td></tr><tr><td>D-(-)-フルクトース</td><td>シグマ</td><td>F0127-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-セロビオース</td><td>シグマ</td><td>C7252-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-グルコース</td><td>シグマ</td><td>G8270-100G</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-マルトース一水和物</td>シ<td>グマ</td><td>M5885-100G</td><td></td></tr><tr><td>ドリル アメリカ プラグ ハンド タップ DWTP1/4-28</td><td>ホーム デポ</td><td>305699489</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、Ca および Mg なしの 1X、滅菌</td>ジェ<td>ネシー</td><td>25-508</td><td></td></tr><tr><td>メス ルアー & 1/16&プライム; ホース バーブ アダプター、ナイロン、25/パック</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-00</td><td>6ウェルアレイを1つ構築するには、24(1パック)</td></tr><tr><td>メスルアー&times; 1/8&プライム;ホースバーブアダプター、ナイロン25/パック</td>が必要です <td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-04</td> 6<td>ウェルアレイを1つ構築するには、6(1パック)</td></tr><tr><td>メスルアー&times; 3/32&p�me;ホースバーブアダプター、ナイロン、25/パック</td>が必要です <td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-02</td> 6<td>ウェルアレイを1つ構築するには、 6 (1 パック)</td></tr> <tr><td>メス ルアー ティー、ナイロン、25/パック</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45502-56</td> 6 <td>ウェル アレイを 1 つ構築するには、10 (1 パック)</td></tr> <tr><td>FeSO4 & middot; 7H2O (鉄 [II] 硫酸塩 七水和物)</td> <td>シグマ</td><td>F8633</td><td></td></tr><tr><td>ヘマチン</td><td>シグマ</td><td>H3281</td><td></td></tr><tr><td>ヒスチジン</td><td>シグマ</td><td>H7750</td><td></td></tr><tr><td>イソ吉草酸</td><td>シグマ</td><td>129542</td><td></td></tr><tr><td>K2HPO4 二塩基性 (リン酸水素二カリウム)</td> <td>シグマ</td><td>P2222-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4 一塩基性 (リン酸二水素カリウム)</td><td>シグマ</td><td>P0662-500G</td><td></td></tr><tr><td>ラージ オリフィス ピペット チップ</td><td>フィッシャー サイエンティフィック</td><td>02-707-134</td><td></td></tr><tr><td>L-システイン塩酸塩</td><td>シグマ</td><td>C1276-10G</td><td></td></tr><tr><td>ロック リング付きオス ルアー & 1/8&プライム; ホースバーブアダプター、ナイロン、25/パック</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-45505-04</td><td>1 つの 6 ウェル アレイを構築するには、42 個 (2 パック) が必要です。</td></tr>肉<tr><td>エキス</td><td>Sigma</td><td>70164-500G</td><td></td></tr><tr><td>Med Vet International&nbsp;Exel ニードル、20G x 1 インチ、皮下注射、100/箱、26417</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>50-209-2532</td><td></td></tr><tr><td>メナジオン (ビタミン K3)</td><td>シグマ</td><td>M5625</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4&nbsp;&ミッドドット;7H2O(硫酸マグネシウム七水和物)</td><td>シグマ</td><td>M1880-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q</td><td></td><td></td><td></td></tr>水<tr><td>NaCl(塩化ナトリウム)</td><td>シグマ</td><td>S9888-500G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3 (炭酸水素ナトリウム)</td><td>シグマ</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>Omnifi t Q シリーズ 2 穴ボトルキャップ</td><td>Cole-Parmer</td><td>00945Q-2</td><td>6 ウェル アレイを 1 台構築するには、</td></tr><tr><td>1 つの PMP IPC-N L 24CHNL 8RLR 115V</td><td>MasterFlex</td><td>ISM939C-115V</td><td>24 チャンネル蠕動ポンプが必要です、ソース用に 1 個、廃棄物用に 1 個が必要です</td></tr><tr><td>Precision Seal&reg ゴムセプタム、白、外径 7 mm ガラス管 (100/pk)</td><td>ミリポア シグマ</td><td>Z553905-100EA</td><td>1 つの 6 ウェル アレイを構築するには、6 セプタムが必要です</td></tr><tr><td>プロピオン酸</td><td>シグマ</td><td>P5561&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ポンプチューブ、2ストップ、Tygon S3 E-Lab、1.02 mm ID;12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-28</td><td>6ウェルアレイを1台構築するには、6&nbspが必要です。(1パック)</td></tr><tr><td>ポンプチューブ、2ストップ、Tygon S3 E-Lab、1.14 mm ID; 12/PK</td><td>VWR</td><td>MFLX96460-30</td><td>6ウェルアレイを1台構築するには、6(1パック)</td></tr>ピ<tr><td>ューリタンキャリーブレア培地、5ml</td>が必要です フィ<td>ッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>PYREX 2Lラウンド培地保存ボトル、GL45スクリューキャップ付き</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>06-414-1E</td><td></td></tr><tr><td>カミソリの刃</td> ジェネ<td>シー12-640</td><td></td><td></td></tr>レ<tr><td>サズリン、ナトリウム塩</td><td>サーモフィッシャーの ACROS Organics</td><td>AC41890-0010</td><td></td></tr><tr><td>可溶性デンプン</td><td>シグマ</td><td>S9765-100G</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼マイクロスパチュラ、スプーンライク</td>ブレード <td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>S50823</td><td></td></tr><tr><td>TBNG TYGON ELFL 2.06MMID 100'VWR</td><td></td> <td>MFLX06449-42</td> 6 <td>ウェル アレイを 1 つ構築するには、205.5 cm の</td></tr><tr><td>微量ミネラル サプリメント</td><td>ATCC</td><td>MD-TMS</td> <td>が必要です</td></tr><tr><td>トリプチカーゼペプトン(BBL)</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>B11921</td><td></td></tr>チューブ<tr><td>、PTFE、1/8&Pine;(3.2 mm)外径と時間;内径 1.5 mm、10 m</td><td>Cole-Parmer</td><td>008 T32-150-10</td><td>6 ウェル アレイを 1 台構築するには、300 mm</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P1754&nbsp が必要です。</td><td></td></tr><tr><td>ビタミンサプリメント</td><td>ATCC</td><td>MD-VS</td><td></td></tr><tr><td>酵母エキス (バクト)</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>DF0127-17-9</td><td></td></tr></tbody></table>

複雑な糞便群集の連続培養のためのバイオリアクターアセンブリ

Bioreactor Assembly for Continuous Culture of Complex Fecal Communities

糞便サンプルは、接種後2週間でヒト糞便スラリーにコロニーを形成したマウスから採取し、-80°Cで保存した。 バイオリアクターシステムは、2つのリピートリアクターウェルに対して連続的なMEGA培地フローでセットアップされました(図3A)。糞便スラリーは、ステップ6に記載のプロトコルに従ってマウス糞便ペレットから調製し、両方の反応器にサンプルポートからレスポンダーマウス糞便スラリーを接種した。静条件下で37°Cの反応器ウェル内の糞便群集を一晩インキュベートした後、反応器への流れを再開し、6日間維持しました。両方のリアクターウェルは、リアクターへの再流開始から1日後、2日後、3日後、4日後、6日後にサンプリングされ、さらなる処理のために-80°Cで保存されました。
微生物群集の経時的な組成の違いおよび複製反応器間の差を評価するために、ビーズビーターの均質化とフェノール:クロロホルム分離、および前述の...

The microbiota, especially bacteria, respond to various environmental exposures such as micro and macronutrients, pharmacological compounds, and ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

実験室規模の嫌気性消化は、科学者が嫌気性バイオテクノロジーの既存のアプリケーションを最適化する新しい方法を研究するために、様々な有機性廃棄物のメタン生成ポテンシャルを評価することができます。この資料では、継続的に嫌気性消化の攪拌実験室規模の建設、接種、操作、および監視するための一般的なモデルを導入しています。...

システムのセットアップと基本操作：バイオガスに有機性廃棄物を変換するために連続的に攪拌した嫌気性消化

出典: アフマディ、S. ら。介入療法がヒト糞便マイクロバイオータに与える影響を推定するためのin vitroバッチ培養モデル。 J. Vis. Exp.

in vitro ヒト腸内細菌叢による大腸内発酵を模倣するバッチカルチャーモデル

栄養調整は、攪拌懸濁バイオリアクターでの培養物に対する断続的なバッチ給餌と比較して、哺乳類細胞スフェロイドの増殖速度を改善します。...

スフェロイドにおける哺乳動物細胞の大規模拡張のための連続供給することによって栄養規制

培養中の細胞の機能的な動作は、3次元培養環境16-21様インビボでより中で培養することによって改善することができます。この原稿は、in vivo様の哺乳動物組織培養のための中空繊維バイオリアクターシステムのセットアップと操作について説明しています。...

用中空糸バイオリアクター<em&gt;インビボ</em&gt;哺乳動物の組織培養様

高密度バイオリアクター(HDBR)と名付けられた新しいリアクターデザインが、高密度微生物群集の培養と研究のために提示されています。ここでは、HDBRをフォトバイオリアクター(PBR)構成で適用し、高密度の混合藻類群集による窒素代謝の研究に成功しています。...

多様な微生物群集の高密度栽培のための新しいバイオリアクター

腸宿主微生物間相互作用は、合成経口コミュニティ、体外消化消化、および小腸上皮のモデルを組み合わせる手法を使用して評価されました。病原体と複数種バイオ...

培養腸宿主微生物インターフェイスで合成細菌コンソーシアムの実行可能性を評価します。

ここでは、胃腸管の生理的条件をシミュレートするバイオリアクターの一連を使用して体外のコロン,の腸内細菌を培養するためのプロトコルを提案する.

体外養殖人間の腸内細菌を研究する技術を適用する高度な

ここでは、GMPグレードの溶解性マイクロキャリアに基づく完全クローズドシステムによる接着細胞の大規模製造を実現するためのプロトコルを紹介します。ヒト間葉系幹細胞、HEK293T細胞、およびVero細胞の培養は検証され、細胞および遺伝子治療業界の量的要求と品質基準の両方を満たしました。...

GMPグレードの溶解性多孔質マイクロキャリアに基づく大規模セル生産

この論文の焦点は、環境から獲得した気難しい嫌気性微生物の培地を作るためのベストプラクティスを詳述することです。これらの方法は、嫌気性培養の管理に役立ち、とらえどころのない未培養微生物である「微生物暗黒物質」の増殖をサポートするために適用できます。...

環境的に獲得した嫌気性微生物を培養するための In Situ 情報に基づく模擬培地フォーマットのセット

ミニバイオリアクターアレイ(MBRA)は、複雑な微生物群集の培養を可能にするハイスループットでカスタマイズ可能な連続フロー培養システムであり、マイクロバイオームのダイナミクス、治療的相互作用、および環境要因に対する微生物の反応を研究するための並行実験をサポートします。...

ミニバイオリアクターアレイ(MBRA)の組み立てと使用のためのプロトコルの更新

学ぶミニバイオリアクターアレイの組み立て法。複雑な糞便微生物叢を連続培養し、嫌気性条件下で特定プロセスの微生物群集への影響を制御下で検討できます。並列実験により迅速な結果取得が可能です。

複雑な糞便群集の連続培養のためのバイオリアクターアセンブリ

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