Live-Cell F&#246;rster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

Javed Akhtar; Muhammad Imran; Jiahe Wang; Gang Ma; Guanyu Wang

doi:10.3791/68075

HepG2細胞における代謝制御Akt活性化ダイナミクスの生細胞フェルスター共鳴エネルギー移動イメージング

JoVE Journal
Cancer Research

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JoVE Journal Cancer Research

Live-Cell Förster Resonance Energy Transfer Imaging of Metabolically Regulated Akt Activation Dynamics in HepG2 Cells

HepG2細胞における代謝制御Akt活性化ダイナミクスの生細胞フェルスター共鳴エネルギー移動イメージング

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08:03 min

May 23, 2025

DOI: 10.3791/68075-v

Javed Akhtar^1,2,3,4,5, Muhammad Imran⁶, Jiahe Wang^1,2,3, Gang Ma⁵, Guanyu Wang^1,2,3

¹Laboratory of Biocomplexity and Engineering Biology, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ²Futian Biomedical Innovation R&D Center,The Chinese University of Hong Kong, ³Ciechanover Institute of Precision and Regenerative Medicine, School of Medicine,The Chinese University of Hong Kong, ⁴Department of Immunology and Microbiology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁵Department of Biology, School of Life Sciences,Southern University of Science and Technology, ⁶Department of Computer Science and IT,University of Southern Punjab

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

ここでは、生きたHepG2細胞におけるAkt活性化とリン酸化の時空間ダイナミクスを定量化するためのプロトコルを紹介します。フェルスター共鳴エネルギー移動(FRET)イメージングは、がん細胞におけるインスリンシグナル伝達経路と代謝調節に関する貴重な洞察を提供する強力なツールです。

細胞の不均一性は、本質的に平均化された細胞動態の複雑さを正確に記述する障害です。だからこそ、私たちは単一細胞をイメージングするためにここにいます。遺伝的にコードされたFRETバイオセンサーの最近の開発により、特異性が向上し、細胞内のAktのリアルタイム追跡に革命が起こり、異種の理解と個別化された薬物療法の開発に役立ちます。

がんと糖尿病は複雑な代謝経路を経由します。がんにおけるインスリンシグナル伝達経路の生体複雑性を解読するために、最先端の生細胞FRETイメージングを単一細胞分解能で使用します。FRET信号のノイズとスペクトルクロストークを最小限に抑えるには、共焦点顕微鏡、ハードウェア、ソフトウェア構成の最適化、レーザー出力の微調整、検出器ゲインの調整が重要であることがわかりました。

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