Name: 腫瘍のための食道オルガノイドモデル - JoVEジャーナル
Uploaded: 2025-05-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: このプロトコルは、腫瘍の進行および正常からがんへの組織学的変化を研究するための食道オルガノイドモデルの確立を記述しています。

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<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+initiation+and+early+tumorigenesis%3A+Molecular+mechanisms+and+interventional+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Tumor initiation and early tumorigenesis: Molecular mechanisms and interventional targets.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 149(2024).</li>
<li>Sánchez-Danés, A., Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+the+cells+of+origin+of+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Deciphering the cells of origin of squamous cell carcinomas.</a> Nat Rev Cancer. 18 (9), 549-561 (2018).</li>
<li>Abnet, C. C., Arnold, M., Wei, W. -Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of esophageal squamous cell carcinoma.</a> Gastroenterology. 154 (2), 360-373 (2018).</li>
<li>Bray, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+cancer+statistics+2022%3A+Globocan+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global cancer statistics 2022: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).</li>
<li>Lin, D. -C., Wang, M. -R., Koeffler, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+epigenomic+aberrations+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+and+implications+for+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Genomic and epigenomic aberrations in esophageal squamous cell carcinoma and implications for patients.</a> Gastroenterology. 154 (2), 374-389 (2018).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cells+activate+fibroblasts+to+promote+esophageal+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Epithelial cells activate fibroblasts to promote esophageal cancer development.</a> Cancer Cell. 41 (5), 903-918.e8 (2023).</li>
<li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+alterations+driving+precancerous+to+cancerous+lesions+in+esophageal+cancer+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Genomic alterations driving precancerous to cancerous lesions in esophageal cancer development.</a> Cancer Cell. 41 (12), 2038-2050.e5 (2023).</li>
<li>Lo, Y. -H., Karlsson, K., Kuo, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+organoids+for+cancer+biology+and+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cancer%22%5BJournal%5D)">Applications of organoids for cancer biology and precision medicine.</a> Nat Cancer. 1 (8), 761-773 (2020).</li>
<li>Loewa, A., Feng, J. J., Hedtrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+disease+models+in+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Human disease models in drug development.</a> Nat Rev Bioeng. 1 (8), 545-559 (2023).</li>
<li>Tang, X. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+organoids+in+basic+research+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Human organoids in basic research and clinical applications.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 168(2022).</li>
<li>Xu, H., Jiao, D., Liu, A., Wu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+organoids%3A+Applications+in+cancer+modeling+and+potentials+in+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor organoids: Applications in cancer modeling and potentials in precision medicine.</a> J Hematol Oncol. 15 (1), 58(2022).</li>
<li>Yan, H. H. N., Chan, A. S., Lai, F. P. -L., Leung, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+cultures+for+cancer+modeling%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Organoid cultures for cancer modeling.</a> Cell Stem Cell. 30 (7), 917-937 (2023).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+mouse+and+human+oral+esophageal+organoids+to+investigate+the+tumor+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Establishing mouse and human oral esophageal organoids to investigate the tumor immune response.</a> Dis Model Mech. 17 (1), dmm050319(2024).</li>
<li>Drost, J., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Organoids in cancer research.</a> Nat Rev Cancer. 18 (7), 407-418 (2018).</li>
<li>Ko, K. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Key+genetic+determinants+driving+esophageal+squamous+cell+carcinoma+initiation+and+immune+evasion%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Key genetic determinants driving esophageal squamous cell carcinoma initiation and immune evasion.</a> Gastroenterology. 165 (3), 613-628.e20 (2023).</li>
<li>Kornepati, A. V. R., Vadlamudi, R. K., Curiel, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programmed+death+ligand+1+signals+in+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Programmed death ligand 1 signals in cancer cells.</a> Nat Rev Cancer. 22 (3), 174-189 (2022).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+tumor+microenvironment+in+PD-L1%2FPD-1-mediated+tumor+immune+escape%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Role of the tumor microenvironment in PD-L1/PD-1-mediated tumor immune escape.</a> Mol Cancer. 18 (1), 10(2019).</li>
<li>Magré, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+organoid-immune+co-culture+models+for+cancer+research%3A+From+oncoimmunology+to+personalized+immunotherapies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother+Cancer%22%5BJournal%5D)">Emerging organoid-immune co-culture models for cancer research: From oncoimmunology to personalized immunotherapies.</a> J Immunother Cancer. 11 (5), e006290(2023).</li>
<li>Kijima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organoids+reveal+therapy+resistance+of+esophageal+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 7 (1), 73-91 (2019).</li>
<li>Fujii, M., Sekine, S., Sato, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+the+basis+of+histological+variation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Decoding the basis of histological variation in human cancer.</a> Nat Rev Cancer. 24 (2), 141-158 (2024).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 94(2022).</li>
<li>Tong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+in+precision+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Med%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids in precision cancer medicine.</a> Med. 5 (11), 1351-1377 (2024).</li>
<li>Grönholm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+organoids+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy.</a> Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).</li>
<li>Sun, C. -P., Lan, H. -R., Fang, X. -L., Yang, X. -Y., Jin, K. -T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+for+precision+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoid models for precision cancer immunotherapy.</a> Front Immunol. 13, 770465(2022).</li>
<li>Kobayashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origin+and+contribution+of+cancer-associated+fibroblasts+in+colorectal+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">The origin and contribution of cancer-associated fibroblasts in colorectal carcinogenesis.</a> Gastroenterology. 162 (3), 890-906 (2022).</li>
<li>Du, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+stemness+of+cancer+stem+cells+to+fight+colorectal+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Targeting stemness of cancer stem cells to fight colorectal cancers.</a> Semin Cancer Biol. 82, 150-161 (2022).</li>
<li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+development+and+disease+with+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling development and disease with organoids.</a> Cell. 165 (7), 1586-1597 (2016).</li>
<li>Camp, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+cerebral+organoids+recapitulate+gene+expression+programs+of+fetal+neocortex+development%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Human cerebral organoids recapitulate gene expression programs of fetal neocortex development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (51), 15672-15677 (2015).</li>
<li>Lau, H. C. H., Kranenburg, O., Xiao, H., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+models+of+gastrointestinal+cancers+in+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Organoid models of gastrointestinal cancers in basic and translational research.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 17 (4), 203-222 (2020).</li>
<li>Han, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Landscape+of+human+organoids%3A+Ideal+model+in+clinics+and+research%5BTitle%5D)+AND+%22The+Innovation%22%5BJournal%5D)">Landscape of human organoids: Ideal model in clinics and research.</a> The Innovation. 5 (3), 100620(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 & ミュー;m フィルター</td><td>Merck</td><td>Cat#SLGPR33RB</td><td></td></tr><tr><td>24 ウェル プレート</td><td>Corning</td><td>Cat#3524</td><td></td></tr><tr><td>4% パラホルムアルデヒド</td><td>Beyotime</td><td>Cat# P0099</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu;m 滅菌ストレーナー</td><td>Falcon</td><td>Cat#352350</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Tocris Bioscience</td><td>Cat# 2939</td><td></td></tr><tr><td>Advanced DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12634028</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Solarbio</td><td>Cat# A8190</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Anti (Antibiotic-Antimycotic)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 15240062</td><td></td></tr><tr><td>B-27 サプリメント</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17504044</td><td></td></tr><tr><td>CO2 インキュベーター</td><td>Thermo&nbsp;</td><td>Cat#371GPCN</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ IV</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17104019</td><td></td></tr><tr><td>クライオスター</td><td>STEMCELL</td><td>Cat# 07930</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>Cat# 10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Gibco</td><td>Cat# PHG0313</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Cell Technologies</td><td>Cat# 30070</td><td></td></tr><tr><td>G-418</td><td>Sigma</td><td>Cat# A1720</td><td></td></tr><tr><td>ゼラチン</td><td>Solarbio</td><td>Cat# G8061</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Gibco</td><td>Cat# 35050061</td><td></td></tr><tr><td>成長因子低減マトリゲル</td><td>Corning</td><td>Cat# 354230</td><td></td></tr><tr><td>HE 染色キット</td><td>Beijing Yili Fine Chemicals Co., Ltd</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Gibco</td><td>Cat# 15630080</td><td></td></tr><tr><td>組織学的ペン</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9305</td><td></td></tr><tr><td>ハイグロマイシン B</td><td>シグマ</td><td>Cat# 400050</td><td></td></tr><tr><td>免疫組織化学染色キット</td><td>ZSGB-BIO</td><td>PV-8000</td><td></td></tr><tr><td>L-WRN</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276;RRID:CVCL_DA06</td><td></td></tr><tr><td>N-2 サプリメント</td><td>Gibco</td><td>Cat# 17502048</td><td></td></tr><tr><td>ニュートラルガム&nbsp;</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9555</td><td></td></tr><tr><td>オパール 5 色マニュアル IHC キット</td><td>PANOVUE</td><td>Cat# 10144100100</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>MeilunBio</td><td>Cat#MA0015</td><td></td></tr><tr><td>ウサギ モノクローン抗 PD-L1</td><td>CST</td><td>Cat# 13684;RRID:AB_2687655</td><td></td></tr>ウ<tr><td>サギポリクローナル抗Ki67</td><td>Abcam</td><td>Cat#ab16667;RRID:AB_302459</td><td></td></tr>ウ<tr><td>サギポリクローナル抗KRT6A</td><td>プロテインテックCat</td><td>#10590-1-AP;RRID:AB_2134306</td><td></td></tr><tr><td>羊血清</td><td>Zsbio</td><td>Cat#ZLI-9056</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>Cat#12604021</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE-EDTA</td><td>Gibco</td><td>Cat#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>スライド全体画像スキャナー</td><td>浜松</td><td>Cat#C13210</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleck Chemicals</td><td>Cat# S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

正常組織から癌組織への進行をモデル化する食道オルガノイドの樹立と組織学的解析

Establishment and Histological Analysis of Esophageal Organoids Modeling the Progression from Normal to Cancerous Tissues

このプロトコルでは、ESCC腫瘍形成のさまざまな段階でのオルガノイドサンプリングと組織学的分析について説明します(図1)。ESCC患者から正常な食道粘膜、低悪性度上皮内腫瘍(LGIN)、高悪性度上皮内腫瘍(HGIN)、および腫瘍組織をサンプリングすることにより、腫瘍形成のさまざまな段階を表すオルガノイドを構築できます。さらに、これらのオルガノイドのパラフィン包埋および切片化を行い、続いて免疫蛍光染色を行った。
腫瘍形成期における免疫抑制分子の発現や細胞クローンの形態学的特性を調べるため、腫瘍発生の様々な段階から食道上皮組織を採取し、免疫蛍光染色を行った。染色が完了した後、スライドをスキャンする前に、マーカーに4つの疑似カラーを定義しました。PD-L1、Ki-67、KRT6Aには、それぞれ緑、赤、灰色の疑似色を割り当て、細胞核にはDAPIを標識しました。実験結果から、食道粘膜からのオルガノイド形態は腫瘍形成中に変化し、主に無秩序になることが示されました。免疫蛍光染色により、腫瘍形成が進行するにつれて、上皮細胞の増殖が変化し、...

Organoids have emerged as a pivotal tool for advancing the understanding of tumorigenesis and cancer therapy. By generating human organoid models ...

establishment-histological-analysis-esophageal-organoids-modeling

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

この原稿は、生産、特性評価および正常な初代ヒト食道線維芽細胞および脱細胞化ブタの足場内に播種した扁平上皮細胞から調製した組織工学3D食道構造物の潜在的な用途を説明しています。結果は、正常なヒトの食道に似成熟重層上皮の形成を実証します。...

生産、特性評価および3D組織工学ヒト食道粘膜モデルの使用可能性

このプロトコルは、単一細胞消化の有無にかかわらず食道腺癌オルガノイドの継代培養および凍結保存の方法を記述し、研究者が実験計画に基づいて適切な戦略を選択できるようにする。...

食道腺癌オルガノイドの継代培養と凍結保存:単一細胞消化の長所と短所

このプロトコルでは、一次正常および腫瘍乳腺組織から差動遠心分離によって上皮オルガノイドを生成するためのアプローチについて説明します。さらに、包埋オルガノイドの3次元培養および免疫蛍光イメージングのための説明書が含まれています。...

継代なしの正常および腫瘍乳腺組織からのマウスおよびヒト上皮オルガノイドの生成とイメージング

このプロトコルでは、化学的発がんによって誘発される正常、腫瘍前、および扁平上皮がんの病変を表すマウスの口腔食道3Dオルガノイドを生成および特性評価するための重要なステップについて説明します。...

3Dオルガノイドによる口腔食道扁平上皮癌のモデリング

オルガノイド-線維芽細胞共培養は、 in vivo...

オルガノイド共培養を用いた食道線維芽細胞の機能特性評価と可視化

胃患者由来オルガノイドは研究での利用が増加しているが、標準化された播種密度を持つ単一細胞消化物からヒト胃オルガノイドを生成するための正式なプロトコルが不足している。このプロトコルは、上部内視鏡検査中に得られた生検組織から胃オルガノイドを確実に作成するための詳細な方法を提示します。...

良性胃体および外皮上皮の生検からの患者由来胃オルガノイドの確立と特性評価

ここでは、ヒト食道オルガノイドの培養と気液界面培養のプロトコールを提供します。食道オルガノイドの気液界面培養は、サイトカインが食道上皮バリアに及ぼす影響を研究するために使用できます。...

好酸球性食道炎における上皮バリアを調べるための三次元細胞培養モデル 

このプロトコルは、食道扁平上皮癌(ESCC)患者から、がん性オルガノイド、がん関連線維芽細胞(CAFs)、非腫瘍関連線維芽細胞(CF)を同時に分離する方法を説明しています。これらの患者に合わせた材料の採用は、患者間変動の問題を回避し、ESCC研究に適した実験プラットフォームを提供する可能性があります。...

同一食道がん患者からの腫瘍オルガノイド、がん関連線維芽細胞および対応する線維芽細胞の確立

骨肉腫における癌幹細胞（CSCを）の存在は、最近、その病因に関連しています。本稿では、非接着性条件下で増殖するのCSCの能力を用いて、従来の骨肉腫（OS）の人間の生検から得られた初代細胞培養物からのCSCの単離を提示します。...

がんの確立は、ヒト従来の骨肉腫からの幹細胞培養物

血中循環がん細胞 (Ctc) がん転移中に肺を植民地化を促進する上での役割を解読する動物モデルです。ここでは、私たちが設立され、正常に実行体内法を具体的にテスト肺植民地化の Ctc の高分子フィブロネクチン (polyFN)...

肺組織に腫瘍のセルの視覚化を循環させるため肺植民地化アッセイの確立

このプロトコルは、腫瘍の進行および正常からがんへの組織学的変化を研究するための食道オルガノイドモデルの確立を記述しています。

正常組織から癌組織への進行をモデル化する食道オルガノイドの樹立と組織学的解析

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