Name: 顔面 高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-08T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 学ぶマウス網膜の凍結切片法による空間的転写解析。網膜神経節細胞の全細胞マッピングを可能にし、神経回路の理解を深める革新的な技術です。

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<ol><li>Baden, T., Euler, T., Berens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+retinal+basis+of+vision+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Understanding the retinal basis of vision across species.</a> Nat Rev Neurosci. 21 (1), 5-20 (2020).</li>
<li>Heukamp, A. S., Warwick, R. A., Rivlin-Etzion, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topographic+variations+in+retinal+encoding+of+visual+space%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Topographic variations in retinal encoding of visual space.</a> Annu Rev Vis Sci. 6, 237-259 (2020).</li>
<li>Collin, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+web-based+archive+for+topographic+maps+of+retinal+cell+distribution+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Optom%22%5BJournal%5D)">A web-based archive for topographic maps of retinal cell distribution in vertebrates.</a> Clin Exp Optom. 91 (1), 85-95 (2008).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. GraSP gene targets to hierarchically infer sub-classes with CuttleNet. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2024).</li>
<li>Rheaume, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+transcriptome+profiling+of+retinal+ganglion+cells+identifies+cellular+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Single cell transcriptome profiling of retinal ganglion cells identifies cellular subtypes.</a> Nat Commun. 9 (1), 2759(2018).</li>
<li>Tran, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+profiles+of+retinal+ganglion+cells+differing+in+resilience+to+injury+reveal+neuroprotective+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Single-cell profiles of retinal ganglion cells differing in resilience to injury reveal neuroprotective genes.</a> Neuron. 104 (6), 1039-1055.e12 (2019).</li>
<li>Yan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+retinal+cell+atlas%3A+Molecular+identification+of+over+sixty+amacrine+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mouse retinal cell atlas: Molecular identification of over sixty amacrine cell types.</a> J Neurosci. 40 (27), 5177-5195 (2020).</li>
<li>Bleckert, A., Schwartz, G. W., Turner, M. H., Rieke, F., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+space+is+represented+by+nonmatching+topographies+of+distinct+mouse+retinal+ganglion+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Visual space is represented by nonmatching topographies of distinct mouse retinal ganglion cell types.</a> Curr Biol. 24 (3), 310-315 (2014).</li>
<li>Holmgren, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+pursuit+behavior+in+mice+maintains+the+pursued+prey+on+the+retinal+region+with+least+optic+flow%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Visual pursuit behavior in mice maintains the pursued prey on the retinal region with least optic flow.</a> eLife. 10, e70838(2021).</li>
<li>Tapia, M. L., Nascimento-dos-Santos, G., Park, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtype-specific+survival+and+regeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+response+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Subtype-specific survival and regeneration of retinal ganglion cells in response to injury.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 956279(2022).</li>
<li>Berchuck, S. I., Mukherjee, S., Medeiros, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estimating+rates+of+progression+and+predicting+future+visual+fields+in+glaucoma+using+a+deep+variational+autoencoder%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Estimating rates of progression and predicting future visual fields in glaucoma using a deep variational autoencoder.</a> Sci Rep. 9 (1), 18113(2019).</li>
<li>de Gainza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+trajectory+of+glaucoma+progression+in+2-dimensional+structural-functional+space%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmol+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">The trajectory of glaucoma progression in 2-dimensional structural-functional space.</a> Ophthalmol Glaucoma. 3 (6), 466-474 (2020).</li>
<li>Choi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+organization+of+the+mouse+retina+at+single+cell+resolution+by+MERFISH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial organization of the mouse retina at single cell resolution by MERFISH.</a> Nat Commun. 14 (1), 4929(2023).</li>
<li>Kremers, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+STED+imaging+in+the+inner+and+outer+whole-mount+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution STED imaging in the inner and outer whole-mount mouse retina.</a> Front Ophthalmol. 3, 1126338(2023).</li>
<li>Simon, P., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+methods+of+retrograde+staining%2C+layer-separation+and+viscoelastic+cell+stabilization+to+isolate+retinal+ganglion+cells+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Combined methods of retrograde staining, layer-separation and viscoelastic cell stabilization to isolate retinal ganglion cells in adult rats.</a> J Neurosci Methods. 83 (2), 113-124 (1998).</li>
<li>Lindqvist, N., Vidal-Sanz, M., Hallböök, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+cell+RT-PCR+analysis+of+tyrosine+kinase+receptor+expression+in+adult+rat+retinal+ganglion+cells+isolated+by+retinal+sandwiching%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Protoc%22%5BJournal%5D)">Single cell RT-PCR analysis of tyrosine kinase receptor expression in adult rat retinal ganglion cells isolated by retinal sandwiching.</a> Brain Res Brain Res Protoc. 10 (2), 75-83 (2002).</li>
<li>Fontaine, V., Kinkl, N., Sahel, J., Dreyfus, H., Hicks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+purified+rat+photoreceptors+in+vitro+is+stimulated+directly+by+fibroblast+growth+factor-2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Survival of purified rat photoreceptors in vitro is stimulated directly by fibroblast growth factor-2.</a> J Neurosci. 18 (23), 9662-9672 (1998).</li>
<li>Sandu, C., Hicks, D., Felder-Schmittbuhl, M. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+photoreceptor+circadian+oscillator+strongly+relies+on+lighting+conditions%3A+Molecular+clock+in+rat+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rat photoreceptor circadian oscillator strongly relies on lighting conditions: Molecular clock in rat photoreceptors.</a> Eur J Neurosci. 34 (3), 507-516 (2011).</li>
<li>Jaeger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+organization+of+the+rodent+retina+involves+strongly+coupled%2C+layer-specific+oscillators%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Circadian organization of the rodent retina involves strongly coupled, layer-specific oscillators.</a> FASEB J. 29 (4), 1493-1504 (2015).</li>
<li>Hecht, R. M., Shi, Q., Garrett, T. R., Sivyer, B., Morgans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Split+retina+as+an+improved+flatmount+preparation+for+studying+inner+nuclear+layer+neurons+in+vertebrate+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Split retina as an improved flatmount preparation for studying inner nuclear layer neurons in vertebrate retina.</a> J Vis Exp. (203), e65757(2024).</li>
<li>Budoff, S. A., Poleg-Polsky, A. A Complete spatial map of mouse retinal ganglion cells reveals density and gene expression specializations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBudoff%2C+SA+%22bioRxiv%22">bioRxiv</a>. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>エイムズ&プライム;ミディアム</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>A1420-10X1L</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>ビーズスミス スレッド ザップ、スレッド バーナー</td><td>ビーズスミス ストア</td><td>7.90524E+11</td><td>代替焼灼器を使用できます</td></tr> ク<tr><td>ライオスタット</td><td>ライカ</td><td>cm1950</td><td>重要な考慮事項は、ステージ温度に対して個別に制御可能な容量です。</td></tr>ド<tr><td>ライアイス</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA Fine</td></tr><tr><td>Science Tools Dumont #5 鉗子</td><td>Fine Science Tools 1129500</td><td>NC9889584</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>Fisher Healthcare Tissue-Plus OCT コンパウンド</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>Fisherbrand 高精度ストレート スレンダー ファイン ポイント ピンセット/鉗子</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-127</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>フィッシャーブランド標準解剖はさみ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>08-951-20</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>フィッシャーブランド スーパーフロストプラス顕微鏡スライド</td><td>フィッシャーサイエンティフィ</td>ック <td>22-037-246</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>インテグラミルテックスノイエスアイリスハサミ</td><td>インテグラミルテックス181510</td><td>12-460-278</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>オリンパス IX81 スピニング ディスク 落射蛍光顕微鏡</td><td></td><td></td><td>図 7 RNAscope</td></tr><tr><td>HiPlex</td><td>ACDBio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>長方形カバー メガネ</td><td>フィッシャー サイエンティフィ</td>ック <td>12-541-033</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>重炭酸ナトリウム</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>S6014-25G</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nunc ガラス底皿</td><td>フィッシャーScientific</td><td>12-567-400</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>ブームスタンドの World Precision Instrument 精密ステレオズーム三眼顕微鏡 (IV)</td> World <td>Precision Instrument PZMTIVBS</td><td>50-253-8607</td><td>特定のブランドは重要ではありません</td></tr><tr><td>Zeiss Axio Imager.M2 落射蛍光顕微鏡&nbsp;</td><td></td><td></td><td>光学セクショニングが有効(図8の場合)</td></tr></tbody></table>

顔面 高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片

En face Cryosectioning of Mouse Retina for High-dimensional Spatial Molecular Analysis

このプロトコルを成功裏に実施すると、網膜表面全体の空間的関係を維持しながら、複数の分子プロファイリングアプローチに適した無傷 の顔面 網膜切片が作成されます。私たちは、従来の免疫組織化学から手動のマルチプレックスRNA検出を経て、自動化されたハイスループット分子プロファイリングへと進む、体系的な検証アプローチを通じて、プロトコールの有用性を実証しています。
私たちのプロトコルの最初の検証では、2つの十分に特徴付けられたマーカーを使用して、すべての網膜の組織完全性と構造保存を評価します(図7)。網膜神経節細胞は抗RBPMS免疫染色で標識され、血管系ネットワークはトマトレクチンを用いて可視化されます。この組み合わせは、両方のマーカーが健康な網膜に明確で十分に文書化された分布パターンを持っているため、プロトコルの成功に関する即時のフィードバックを提供します。
適切に調製された組織では、RBPMS免疫反応性は神経節細胞層の個別の細胞標識として現れ、シグナルは...

The complex laminar structure of the retina presents significant challenges for comprehensive spatial molecular mapping. Current techniques for ...

en-face-cryosectioning-mouse-retina-for-high-dimensional-spatial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

解剖手法は、ハイスループットスクリーニングで表現型解析を実行するための組織固定のマウス眼球摘出を示しています。...

リモートハイスループット表現型解析のためのマウスの目の摘出

出典:Wang, Z., et al. Transpupillary Two-Photon In Vivo Imaging of the Mouse Retina. J. Vis. Exp. (2021).このビデオでは、2光子顕微鏡を用いたin vivo網膜イメージングの技術を紹介しています。麻酔マウスは、頭部を固定し、眼の潤滑剤を塗布し、眼にカバースリップを貼ることでイメージングの準備をします。蛍光タンパク質を発現する網膜神経節細胞(RGC)は、まず落射蛍光を用いてアラインメントして可視化します。最後に、2光子イメージングが採用されており、RGCの高解像度の視覚化が可能です。...

マウス網膜のTwo-Photon In Vivoイメージング

ここでは、下流の RNA 解析のための小柱網 (TM) を隔離するため再現性のあるレーザー キャプチャ レーザーマイクロダイ セクション (LCM) のためのプロトコルについて述べる.TM での遺伝子発現の変化を分析する能力は、TM...

遺伝子発現解析のためのマウスの目から非常に純粋な小柱網のキャプチャ マイクロダイゼクション

ラット網膜血管ペリサイト、すなわち、低温セクション、全体-マウント、および血管ネットワークの低張性分離の免疫組織化学的可視化のための 3...

網膜の低温電子顕微鏡セクション全体-マウント、および微小血管の免疫組織化学的可視化の低張性分離血管準備

本報告では、免疫組織化学(IHC)のための凍結マウス網膜切片を準備するための包括的な方法について説明する。...

免疫組織化学用マウスレチンクライオ切片の調製

in vivoイメージングは、健康と疾患における生物学の研究のための強力なツールです。このプロトコルは、標準的な2光子顕微鏡によるマウス網膜の経瞳孔イメージングについて説明しています。また、網膜の複数の細胞コホートを蛍光標識するためのさまざまなin...

経瞳孔二光子マウス網膜のin vivoイメージング

このプロトコルは、タンパク質分析のためにマウスの桿体光受容体の細胞内区画を単離するための2つの技術を提示する。第1の方法は、生きた網膜とセルロース濾紙を使用してロッドの外側セグメントを分離し、第2の方法は凍結乾燥された網膜と粘着テープを使用してロッドの内側と外側のセグメント層を剥離する。...

タンパク質分析のためのマウス網膜における光受容体細胞区画の単離のための2つの剥離方法

このプロトコルでは、網膜のシナプス回路とタンパク質の局在の探索に焦点を当てて、免疫電子顕微鏡のプレ埋め込みの詳細な手順を概説しています。...

免疫電子顕微鏡のプレ埋め込みによる網膜回路と分子局在の研究

蛍光トマトレクチンの眼窩後注射後、血小板由来成長因子受容体βによる免疫蛍光染色により、網膜血管系の周皮細胞を調べました。標識された網膜をさらに組織透明化法で処理し、共焦点顕微鏡下で網膜血管系を取り巻く周皮細胞の3次元ビューを視覚化するために全体をマウントしました。...

免疫染色によるマウス網膜血管周皮細胞の3D可視化 

マウス網膜凍結切片を調製し、光受容体上で免疫染色を実施するためのプロトコルが記載されている。この記事により、研究者は、保存状態の良い形態と高品質の免疫染色結果を備えたマウス網膜凍結切片を一貫して作製することができます。...

マウス網膜の凍結切片および免疫染色

学ぶマウス網膜の凍結切片法による空間的転写解析。網膜神経節細胞の全細胞マッピングを可能にし、神経回路の理解を深める革新的な技術です。

顔面高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片

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