経口β-アミノプロピオニトリルおよび皮下アンジオテンシンII注入により誘発された胸部大動脈解離のマウスモデル

この研究は、BAPN とアンジオテンシン II 誘導による胸部大動脈解離 (TAD) のマウス モデルを確立し、TAD の病因または治療アプローチを調査するための貴重なツールを提供する詳細な手順を提供します。BAPN-アンジオテンシンIIの組み合わせは、高いTAD発生率を達成し、ヒトTADで観察されたものと同様の病態生理学的特徴を再現するマウスTADモデルを確立する方法を提供します。将来的には、私たちの研究チームは、心血管の病因を説明するための臨床研究と基礎研究を統合し、メカニズムの洞察とトランスレーショナルイノベーションを通じて新しい治療戦略の発見を優先していきます。

[プレゼンター]各マウスの体重を量り、最大体重を記録して、実験に必要なアンジオテンシンII質量を計算します。計算テンプレートを使用して、最大体重に基づいて各マウスのアンジオテンシンII質量を決定します。次に、マウスあたり130マイクロリットルのアンジオテンシンII溶液を調製するために必要なアンジオテンシンIIの総質量を計算します。提供されたテンプレートを使用して、実験に必要なアンジオテンシンII溶液と生理食塩水の充填量を決定します。分析天びんを使用して、滅菌マイクロチューブ内のアンジオテンシンIIの計算量を計量します。計算された量の生理食塩水をマイクロチューブに加えます。ボルテックスミキサーを使用して、目に見える粒子が残らなくなるまで粉末を完全に溶解します。分析天びんを使用して、ポンプ本体とフローモデレーターを含む各浸透圧ポンプの重量を量ります。開いたばかりの1ミリリットル滅菌注射器に充填チューブを取り付け、調製したアンジオテンシンII溶液を慎重に吸引します。充填チューブを上向きに持ち、シリンジから気泡を取り除きます。チューブがそれ以上挿入できなくなるまで、充填チューブの端を浸透圧ポンプの上部開口部にそっと挿入します。ポンプを直立させ、アンジオテンシンII溶液が出口に現れるまでシリンジプランジャーをゆっくりと押します。その後、充填チューブを停止して慎重に取り外します。次に、減速器とポンプ上部の間に隙間が残らなくなるまで、フローモデレーターをポンプ開口部に慎重にゆっくりと挿入します。分析天びんを使用して負荷されたポンプの重量を量り、値を記録します。充填されたポンプを摂氏37度の滅菌生理食塩水に入れ、モデレーターの頭を上に向けて、移植前に少なくとも6時間置きます。マウスを手術面に腹臥位に置きます。メスを使って、皮膚に1センチメートルの横方向の切開を丁寧に行います。1 組の湾曲した鉗子を使用して切縁をつかみ、もう 1 組の鉗子を使用して皮下組織を鈍く解剖し、浸透圧ポンプ用のポケットを作成します。充填されたポンプをポケットに挿入し、フローモデレーターヘッドがマウスの尾端を向きます。切縁をきれいに整列させ、6-0 の非吸収性縫合糸を使用して皮膚を閉じます。この図は、すべての実験グループにおける大動脈解離と破裂の発生率を示しています。大動脈解離は、BAPNとアンジオテンシンIIのグループのマウスの100%で発生し、35%が破裂を経験し、BAPNまたはBAPNと生理食塩水のグループで観察された55%または60%の発生率を上回りましたが、対照では解離または破裂は発生しませんでした。大動脈の肉眼的形態は、対照の大動脈と比較して、BAPN、BAPN と生理食塩水、および BAPN とアンジオテンシン II 群で進行性の変形を示しました。胸部大動脈の最大直径は、対照と比較してすべてのBAPN治療群で有意に大きく、治療群間で有意差はありませんでした。ヘマトキシリンとエオシンの染色により、対照では薄くて均一な大動脈壁が明らかになりましたが、BAPN治療グループはすべて肥厚と炎症性浸潤を示しました。エラスチン ヴァン ギーソン染色では、対照群では無傷の弾性線維が示され、すべての BAPN 処理群では偽内腔形成を伴う進行性の繊維断片化が示されました。