Name: ミニ脳卒中マウスモデルにおける神経免疫相互作用の単離とフローサイトメトリー評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 22 s
Description: 学ぶ ミニ脳卒中マウスモデルにおけるフローサイトメトリーによる免疫細胞機能評価と神経免疫相互作用の解析手法。このプロトコルは虚血性脳卒中後の免疫応答を詳細に評価し、神経変性疾患の研究にも応用可能です。

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<ol><li>Kleindorfer, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2021+Guideline+for+the+prevention+of+stroke+in+patients+with+stroke+and+transient+ischemic+attack%3A+A+guideline+from+the+American+heart+association%2FAmerican+Stroke+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">2021 Guideline for the prevention of stroke in patients with stroke and transient ischemic attack: A guideline from the American heart association/American Stroke Association.</a> Stroke. 52 (7), e364-e467 (2021).</li>
<li>Pu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projected+global+trends+in+ischemic+stroke+incidence%2C+deaths+and+disability-adjusted+life+years+from+2020+to+2030%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Projected global trends in ischemic stroke incidence, deaths and disability-adjusted life years from 2020 to 2030.</a> Stroke. 54 (5), 1330-1339 (2023).</li>
<li>Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Projections+of+the+stroke+burden+at+the+global%2C+regional%2C+and+national+levels+up+to+2050+based+on+the+global+burden+of+disease+study+2021%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Heart+Assoc%22%5BJournal%5D)">Projections of the stroke burden at the global, regional, and national levels up to 2050 based on the global burden of disease study 2021.</a> J Am Heart Assoc. 13 (23), e036142(2024).</li>
<li>Ma, Y., Yang, S., He, Q., Zhang, D., Chang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+immune+cells+in+post-stroke+angiogenesis+and+neuronal+remodeling%3A+The+known+and+the+unknown%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of immune cells in post-stroke angiogenesis and neuronal remodeling: The known and the unknown.</a> Front Immunol. 12, 784098(2021).</li>
<li>Duan, M., Xu, Y., Li, Y., Feng, H., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+brain-peripheral+immune+responses+for+secondary+brain+injury+after+ischemic+and+hemorrhagic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Targeting brain-peripheral immune responses for secondary brain injury after ischemic and hemorrhagic stroke.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 102(2024).</li>
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<li>Zhang, Z., Lv, M., Zhou, X., Cui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+peripheral+immune+cells+in+the+recovery+of+neurological+function+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Roles of peripheral immune cells in the recovery of neurological function after ischemic stroke.</a> Front Cell Neurosci. 16, 1013905(2022).</li>
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<li>Cardona, A. E., Huang, D., Sasse, M. E., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+microglial+cells+for+RNA+analysis+or+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine microglial cells for RNA analysis or flow cytometry.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1947-1951 (2006).</li>
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<li>Mcdonough, A., Weinstein, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroimmune+response+in+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Neuroimmune response in ischemic preconditioning.</a> Neurotherapeutics. 13 (4), 748-761 (2016).</li>
<li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analysis+reveals+dynamic+microglial-induced+a1+astrocyte+reactivity+via+c3%2Fc3ar%2FNF-kappab+signaling+after+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analysis reveals dynamic microglial-induced a1 astrocyte reactivity via c3/c3ar/NF-kappab signaling after ischemic stroke.</a> Mol Neurobiol. 61 (12), 10246-10270 (2024).</li>
<li>Maecker, H. T., Trotter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+controls%2C+instrument+setup%2C+and+the+determination+of+positivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry controls, instrument setup, and the determination of positivity.</a> Cytometry. 69A, 1037-1042 (2006).</li>
<li>Siddiqui, S., Livak, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+advanced+flow+cytometry%3A+A+practical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Principles of advanced flow cytometry: A practical guide.</a> Methods Mol Biol. 2580, 89-114 (2023).</li>
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<li>Martin, E., El-Behi, M., Fontaine, B., Delarasse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+microglia+and+monocyte-derived+macrophages+from+the+central+nervous+system+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of microglia and monocyte-derived macrophages from the central nervous system by flow cytometry.</a> J Vis Exp. 124, e55781(2017).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia-associated+neuroinflammation+is+a+potential+therapeutic+target+for+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regen+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia-associated neuroinflammation is a potential therapeutic target for ischemic stroke.</a> Neural Regen Res. 16 (1), 6-11 (2021).</li>
<li>Mao, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+polarization+in+ischemic+stroke%3A+Complex+mechanisms+and+therapeutic+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Chin+Med+J+%28Engl%29%22%5BJournal%5D)">Microglia polarization in ischemic stroke: Complex mechanisms and therapeutic interventions.</a> Chin Med J (Engl). 134 (20), 2415-2417 (2021).</li>
<li>Shui, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+in+ischemic+stroke%3A+Pathogenesis+insights+and+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inflamm+Res%22%5BJournal%5D)">Microglia in ischemic stroke: Pathogenesis insights and therapeutic challenges.</a> J Inflamm Res. 17, 3335-3352 (2024).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infiltration+and+persistence+of+lymphocytes+during+late-stage+cerebral+ischemia+in+middle+cerebral+artery+occlusion+and+photothrombotic+stroke+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Infiltration and persistence of lymphocytes during late-stage cerebral ischemia in middle cerebral artery occlusion and photothrombotic stroke models.</a> J Neuroinflammation. 14 (1), 248(2017).</li>
<li>Schulze, J., Gellrich, J., Kirsch, M., Dressel, A., Vogelgesang, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system-infiltrating+t+lymphocytes+in+stroke+are+activated+via+their+TCR+%28T-cell+receptor%29+but+lack+CD25+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Central nervous system-infiltrating t lymphocytes in stroke are activated via their TCR (T-cell receptor) but lack CD25 expression.</a> Stroke. 52 (9), 2939-2947 (2021).</li>
<li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Des+Devel+Ther%22%5BJournal%5D)">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Des Devel Ther. 9, 3445-3454 (2015).</li>
<li>Leelatian, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+human+tissues+and+solid+tumors+with+mass+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of human tissues and solid tumors with mass cytometry.</a> Cytometry B Clin Cytom. 92 (1), 68-78 (2017).</li>
<li>Delmonte, O. M., Fleisher, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3A+Surface+markers+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry: Surface markers and beyond.</a> J Allergy Clin Immunol. 143 (2), 528-537 (2019).</li>
<li>Schmit, T., Klomp, M., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+flow+cytometry+for+simultaneous+and+multi-parametric+analysis+of+heterogenous+cell+populations+in+basic+and+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The application of flow cytometry for simultaneous and multi-parametric analysis of heterogenous cell populations in basic and clinical research.</a> Methods Mol Biol. 2223, 183-200 (2021).</li>
<li>Dukhinova, M., Kopeikina, E., Ponomarev, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Usage+of+multiparameter+flow+cytometry+to+study+microglia+and+macrophage+heterogeneity+in+the+central+nervous+system+during+neuroinflammation+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Usage of multiparameter flow cytometry to study microglia and macrophage heterogeneity in the central nervous system during neuroinflammation and neurodegeneration.</a> Methods Mol Biol. 1745, 167-177 (2018).</li>
<li>Rui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid+gasdermin+d+drives+early-stage+T-cell+immunity+and+peripheral+inflammation+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Myeloid gasdermin d drives early-stage T-cell immunity and peripheral inflammation in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 266(2024).</li>
<li>Rauber, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+identifies+changes+in+peripheral+and+intrathecal+lymphocyte+patterns+in+CNS+autoimmune+disorders+and+primary+CNS+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry identifies changes in peripheral and intrathecal lymphocyte patterns in CNS autoimmune disorders and primary CNS malignancies.</a> J Neuroinflammation. 21 (1), 286(2024).</li>
<li>Rayaprolu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-cytometric+microglial+sorting+coupled+with+quantitative+proteomics+identifies+moesin+as+a+highly-abundant+microglial+protein+with+relevance+to+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Flow-cytometric microglial sorting coupled with quantitative proteomics identifies moesin as a highly-abundant microglial protein with relevance to Alzheimer's disease.</a> Mol Neurodegener. 15 (1), 28(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mLマイクロ遠心チューブ</td><td>ネスト&nbsp;</td><td>615601</td><td>ラボ資料</td></tr><tr><td>1&times;PBSの</td><td>コーニング</td><td>21-040-CM</td><td>試薬</td></tr><tr><td>96ウェルクリアラウンドボトムTC処理マイクロプレート</td><td>コーニング</td><td>3799</td><td>ラボ資料</td></tr><tr><td>APC抗マウスCD19</td><td>バイオレジェンド</td><td>152410</td><td>抗体</td></tr><tr><td>APC/シアニン7抗マウスCD45</td><td>バイオレジェンド</td><td>103116</td><td>抗体</td></tr><tr><td>アバーチン (1.25%)</td><td>南京アイベイバイオテクノロジー&nbsp;</td><td>M2920</td><td>試薬</td></tr><tr><td>BD FACSAria II</td><td>BDの</td><td>642510</td><td>備品</td></tr><tr><td>ブリリアントバイオレット421抗マウスCD4</td><td>バイオレジェンド</td><td>100437</td><td>抗体</td></tr><tr><td>ブリリアントバイオレット605抗マウス/ヒトCD11b</td><td>バイオレジェンド</td><td>101237</td><td>抗体</td></tr><tr><td>BSAの</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>A1933-1G</td><td>ケミカル</td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>C4-28-100MG</td><td>酵素</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>M0303L</td><td>酵素</td></tr><tr><td>EDTAの</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>EDS-100G</td><td>ケミカル</td></tr><tr><td>Falcon 5 mL 丸底ポリスチレン試験管</td><td>コーニング</td><td>352052</td><td>ラボ資料</td></tr><tr><td>ファルコン&nbsp;15 mLコニカル遠心分離管</td><td>コーニング</td><td>352095</td><td>ラボ資料</td></tr><tr><td>フロージョーV10</td><td>BDの</td><td></td><td>ソフトウェア</td></tr><tr><td>GLAST (ACSA-1) 抗体、PE</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-118-344</td><td>抗体</td></tr><tr><td>イソフルラン</td><td>RWDライフサイエンス</td><td>R510-22-10</td><td>試薬</td></tr><tr><td>PE/シアニン7抗マウスCD3</td><td>バイオレジェンド</td><td>100220</td><td>抗体</td></tr><tr><td>PE/Dazzle 594 アンチマウス NK-1.1</td><td>バイオレジェンド</td><td>156518</td><td>抗体</td></tr><tr><td>TRIzol試薬</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>15596026</td><td>試薬</td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNase フリー蒸留水</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社</td><td>10977015</td><td>試薬</td></tr><tr><td>Vetbond ティッシュ接着剤</td><td>3メートル</td><td>1469SBの</td><td>ラボ資料</td></tr><tr><td>ゾンビアクアフィックス可能な生存能力キット</td><td>バイオレジェンド</td><td>423102</td><td>アミン反応性蛍光色素</td></tr></tbody></table>

ミニ脳卒中マウスモデルにおける神経免疫相互作用の単離とフローサイトメトリー評価

Isolation and Flow Cytometric Assessment of Neuroimmune Interactions in a Mini-Stroke Murine Model

この研究では、ミニ脳卒中モデル内のフローサイトメトリー分析を使用して、虚血性脳卒中後の免疫細胞の機能を評価するための洗練されたプロトコルを提示します。ミニ脳卒中は、右中大脳動脈 (MCA) の遠位枝の永久結紮によって誘発され、続いて両側総頸動脈 (CCA) の 7 分間の閉塞が引き起こされました。この方法論は、病変量が少なく、一貫しており、死亡率が非常に低いことを特徴とする軽度の脳卒中をもたらします。さらに、このモデルは長期的な神経免疫相互作用を調査する能力を備えているため、脳卒中後の回復過程における炎症の役割を調べるのに非常に適しています。
ミクログリア誘発性神経炎症は、虚血性脳卒中の病態生理学において中心的な役割を果たしています19。虚血性脳卒中後のミクログリアトランスクリプトームの動的変化を解明するために、まずフローサイトメトリーを用いてミクログリアを単離し、リアルタイムPCRでその純度を確認しました。 図2 は、脳卒中後の1日目(<strong class="xfig...

Stroke is a leading cause of death and long-term disability worldwide, with ischemic stroke representing the majority of cases. Following an ischemic ...

私たちの研究範囲は、虚血性脳卒中後の免疫細胞機能に焦点を当てています。脳卒中の病理における常在免疫細胞と浸潤免疫細胞の法則を理解することを目指しています。現在、フローサイトメトリーは、神経炎症における免疫細胞の機能と相互作用を評価するために広く使用されています。さらに、免疫技術、単一細胞およびシーケンシングにより、神経免疫相互作用の研究が進んでいます。私たちの研究室は、神経免疫相互作用におけるアストロサイトの経路、神経炎症プロセスへの血管の寄与を説明することに焦点を当てます。まず、50ミリリットルの注射器を取り、その端に26ゲージの針を取り付けます。注射器に生理食塩水を完全に充填します。麻酔をかけたマウスを発泡ボード上に仰臥位で配置します。前肢と後肢を伸ばし、26ゲージの針で固定します。鋸歯状の親指鉗子を使用して、腹部の皮膚をつかみ、横方向の切開を行い、肝臓を露出させます。肋骨の両側に沿ってカットしてハートを露出させます。次に、26ゲージの針を左心室に挿入し、右の神託を切断します。シリンジプランジャーを押して、血液を排出します。オラクルから排出される血液が透明になるまで灌流を続けます。マウスの首を切って脳を抽出した後、マウススチールブレインマトリックスに移し、連続した2ミリメートルの厚さの角膜スライスに切断します。500マイクロリットルの消化酵素混合物を12ウェルプレートの各ウェルに導入します。マイクロ鉗子を使用して、梗塞組織を繊細に分離し、消化酵素混合物に移します。最後に、眼科用ハサミで組織を可能な限り小さな断片に断片化し、プレートを摂氏37度で20分間インキュベートします。AP 1000ピペットを使用して、溶液を10回穏やかに吸引して分注し、組織を個々の細胞に解離させます。次に、溶液を70マイクロメートルのセルストレーナーに通します。12ウェルプレートとセルストレーナーの両方を、カルシウムとマグネシウムを含む氷冷HBSSで繰り返しすすぎます。次に、収集した細胞懸濁液を摂氏4度で5分間500Gで遠心分離します。ペレットを乱さずに上清を慎重に廃棄します。ペレットを1ミリリットルのPBSに再懸濁します。遠心分離プロセスを繰り返した後、ペレットを150マイクロリットルのPBSに再度再懸濁し、懸濁液を96ウェルの丸い底板に移します。摂氏4度で5分間、500Gで再度遠心分離します。遠心分離後、96ウェルプレートをしっかりとつかみ、素早く反転させて上清を捨てます。次に、細胞生存率蛍光ダイをPBSで1〜100の比率で希釈し、希釈した色素溶液の150マイクロリットルにペレットを再懸濁します。プレートを光から保護しながら、室温で10分間インキュベートします。摂氏4度で5分間遠心分離した後、上清を廃棄します。細胞表面抗体カクテルを磁気活性化細胞選別または最大バッファーで希釈し、細胞を洗浄せずに抗体カクテルをウェルに加えます。摂氏4度で15〜20分間インキュベートしてから、さらに5分間遠心分離します。プレートを遠心分離し、上清を廃棄した後、ペレットを150マイクロリットルの最大バッファーに再懸濁します。懸濁液を1.5ミリリットルの遠心分離管または5ミリリットルの丸底ポリスチレン試験管に移します。手動の方法またはオンラインのパネル設計ツールを使用して、機器構成に従ってマルチカラーフローサイトメトリーパネルを設計します。細胞生存率色素をパネルに含めて、データから生体不明の細胞や破片を除外します。前方散乱検出器と側面散乱検出器の設定を調整して、目的のセルが正しく表示され、適切にゲートできるようにします。FSCおよびSSCパラメータを微調整して、破片や無関係なノイズを除去します。FSC面積と高さを示すドットプロットで、ダブレットとシングルセルを区別します。生存色素の陰性シグナルを使用して、生存細胞を単離します。未染色細胞の自家蛍光コントロールと染色細胞陽性コントロールを比較して、染色細胞が各パラメーターに対して適切にスケーリングされていることを確認します。マルチカラーセルサンプルを解析し、2つのカラードットプロットを調べることで、補正を微調整します。細胞集団が互いに垂直または水平に整列するまで、補正設定を上下に調整します。CD45 および CD11B シグナルを利用して、特定の発現パターンに基づいてリンパ球、ミクログリア、骨髄細胞、星状細胞を区別します。リンパ球を同定するための基準として機能する自家蛍光制御として偽の脳組織を使用します。特定のターゲットを分析する場合は、脳卒中後の脳組織でFMOコントロールを利用します。制御データを収集して保存します。同様に、サンプルデータを収集して保存します。標的細胞集団を選択し、5ミリリットルの丸底ポリスチレン試験管または15ミリリットルの円錐形遠心分離管のいずれかに分類します。500マイクロリットルのPBSを加え、収集チューブをすすぎ、細胞の生存率を維持し、ペレット形成を助けます。CCR7陽性およびCD11c陽性のミクログリアは、虚血性脳卒中後2日目と7日目に定量化されました。ミクログリアにおけるCCR7発現は、偽対照と比較して2日目に急激に上昇し、7日目に上昇したままでした。CD11c陽性ミクログリアも同様の傾向をたどり、2日目にピークに達し、7日目には偽よりも高いままでした。ドットプロットは、2日目と7日目に密なCCR7およびCD11cシグナルを示しました。偽制御におけるスパース信号との対比ゲーティング戦略はCD11BとCD45発現を用いてミクログリア骨髄細胞とリンパ球を分離した追加のマーカーは、生細胞、星状細胞、およびリンパ球サブセットを定義しました。

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神経科学

中大脳動脈の糸状閉塞は、マウスでは虚血性脳卒中を研究するための一般的なモデルです。...

マウスにおけるモデリングのストローク - フィラメントモデルと中大脳動脈閉塞

中大脳動脈閉塞（MCAO）の種々のマウスモデルが広く実験的脳研究において使用される。ここでは、人間の虚血性脳卒中の過半数によって課さ被害に対応する大き​​さの一貫した皮質梗塞を生成し、経頭蓋永久遠位MCAOのモデルを示しています。...

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

脳卒中後の脳骨髄細胞の特徴づけは、光分留法を用いて、立体解析によって行う、または脳白血球懸濁液のフローサイトメトリー分析により得ることができる。両方は、虚血性脳に見出さ主骨髄細胞サブセットの正確な表現型の区別を行うために有用な技術である。...

一時的または恒久的な脳虚血モデルにおける白血球亜集団の立体解析とフローサイトメトリーキャラクタリゼーション

このプロトコルは、マウスにおける一過性中大脳動脈閉塞後の梗塞容積と血液脳関門の破壊を減少させる反復的な低酸素プレコンディショニング、または全身性低酸素症への短時間の曝露について説明しています。また、脳卒中後の梗塞容積と血液脳関門の破壊の二重定量化についても詳しく説明し、神経血管保護の有効性を評価します。...

マウスにおける反復低酸素プレコンディショニングと過渡中大脳動脈閉塞後に神経血管保護の定量

ここでは、不可逆的な内皮一酸化窒素合成酵素(eNOS)阻害剤(L-Nio)の局所注射によるマウス白質の病巣性脳卒中の生成方法を紹介します。この技術の潜在的な応用を拡大する2つの定位バリエーション、逆行性ニューロントレーシング、および新鮮な組織の標識と解剖が提示されます。...

軸索変性と白質神経生物学の研究のための皮質下白質ストロークの多彩なマウスモデル

炎症は虚血性脳卒中の病因において中心的な役割を果たします。証拠の増加は、それが初期の脳損傷を悪化させるだけでなく、後の修復にも寄与する両刃の剣として機能することを示唆しています。このプロトコルは、虚血性脳からの免疫細胞の単離と、その後のフローサイトメトリー表現型について記述しています。...

虚血性マウス脳からの免疫細胞の単離およびフローサイトメトリー分析

脳卒中の病態生理学を理解するためには、信頼性のあるモデルを使用することが重要です。この論文は、マウスにおいて最も頻繁に使用される脳卒中モデルのいずれかを説明する、中大脳動脈閉塞（MCAO）モデルと呼ばれる再潅流と（また腔内フィラメントまたは縫合モデルと呼ばれます）。...

マウスの中大脳動脈閉塞再灌流誘発性の脳卒中のための外科的アプローチ

このプロトコルは、虚血性脳卒中のマウスモデルである一過性中大脳動脈閉塞後の肺環境における免疫細胞組成、サイトカインプロファイル、およびケモカインプロファイルの変化を同定するためのフローサイトメトリーの使用を記載している。...

肺環境における免疫細胞および炎症誘発性メディエーターの特性評価

中大脳動脈閉塞の異なるモデル(MCAo)は、実験的な脳卒中研究で使用されています。ここでは、外部頸動脈(ECA)を介した一過性MCAoの実験的ストロークモデルについて説明し、これは、自然血栓溶解または治療のために脳血管血栓が除去されるヒトの脳卒中を模倣することを目的とする。...

マウスにおける脳卒中のモデリング:外頸動脈を介した過渡中脳動脈閉塞

脳疾患に対する免疫応答を調べるために、免疫細胞の変化を解析するアプローチが一般的です。ここでは、マウスの脳組織と頭蓋骨骨髄から免疫細胞を単離するための2つの簡単で効果的なプロトコルが提供されています。...

マウスの脳と頭蓋骨からの免疫細胞の単離

学ぶ ミニ脳卒中マウスモデルにおけるフローサイトメトリーによる免疫細胞機能評価と神経免疫相互作用の解析手法。このプロトコルは虚血性脳卒中後の免疫応答を詳細に評価し、神経変性疾患の研究にも応用可能です。

ミニ脳卒中マウスモデルにおける神経免疫相互作用の単離とフローサイトメトリー評価

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