Name: 液滴移動法による巨大単層小胞の確実な作製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T12:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 学ぶ液滴移動法による巨大単層小胞（GUV）の作製法。合成生物学やマイクロロボティクス研究に応用可能で、高い封入効率と簡便な操作が特徴です。基礎的な実験設備で実施でき、細胞型マイクロロボット開発に貢献します。

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<ol><li>Träuble, H., Grell, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carriers+and+specificity+in+membranes.+IV.+Model+vesicles+and+membranes.+The+formation+of+asymmetrical+spherical+lecithin+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res+Program+Bull%22%5BJournal%5D)">Carriers and specificity in membranes. IV. Model vesicles and membranes. The formation of asymmetrical spherical lecithin vesicles.</a> Neurosci Res Program Bull. 9 (3), 373-380 (1971).</li>
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<li>Dimova, R., Stano, P., Marques, C. M., Walde, P. <a target="_blank" href="https://www.taylorfrancis.com/chapters/edit/10.1201/9781315152516-1/preparation-methods-giant-unilamellar-vesicles-rumiana-dimova-pasquale-stano-carlos-marques-peter-walde?context=ubx&refId=bca4cc2f-16fd-4222-8c37-3bacb6c1e469">Preparation methods for giant unilamellar vesicles.</a> Giant Vesicle Book. , 3-20 (2019).</li>
<li>Tyler, A. I. I., Greenfield, J. L., Seddon, J. M., Brooks, N. J., Purushothaman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+phase+behavior+of+fatty+acid+containing+membranes+to+membrane+bio-mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Coupling phase behavior of fatty acid containing membranes to membrane bio-mechanics.</a> Front Cell Dev Biol. 7, (2019).</li>
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<li>Weakly, H. M. J. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0006349524005666">Several common methods of making vesicles (except an emulsion method) capture intended lipid ratios.</a> Biophys J. 123 (19), 3452-3462 (2024).</li>
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<li>Matsushita-Ishiodori, Y., Hanczyc, M. M., Wang, A., Szostak, J. W., Yomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+imaging+flow+cytometry+to+quantify+and+optimize+giant+vesicle+production+by+water-in-oil+emulsion+transfer+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Using imaging flow cytometry to quantify and optimize giant vesicle production by water-in-oil emulsion transfer methods.</a> Langmuir. 35 (6), 2375-2382 (2019).</li>
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<li>Lee, I. -H., Passaro, S., Ozturk, S., Ureña, J., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intelligent+fluorescence+image+analysis+of+giant+unilamellar+vesicles+using+convolutional+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Intelligent fluorescence image analysis of giant unilamellar vesicles using convolutional neural network.</a> BMC Bioinformatics. 23 (1), 48(2022).</li>
</ol>

リポソームを産生するための前述の技術を実装して1、Pautotらは、直径2が0.1〜1μmの範囲の直径を持つ脂質小胞を産生するプロトコルを確立した。液滴転写法は、さらに大きな小胞(直径1μmを超える)3の生成に効果的であることがすぐに証明され、実行の容易さと高いカプセル化効率からますます人気が高まっています。実際、膨潤法(ゲル膨潤や電形成など)と比較して、このプロトコルは、同等の数の小胞および関連する廃棄物を形成するために必要な貨物溶液の量を減らします4。GUVは、同等のカプセル化効率を持つ代替方法を介して流体界面から組み立てることができます。ただし、マイクロ流体チップ5,6または連続液滴界面交差カプセル化(cDICE)7に基づくものと比較すると、液滴移送は、基本的な機器を備えたどの実験室でも手頃な価格で最も簡単なセットアップを提供します。さらに、マイクロ流体法により、膜内に望ましくない油の介在物を含む GUV が生じる可能性があります。これらの理由から、液滴移送は、人工細胞3,8,9,10、そして最近ではマイクロロボティクス11,12の分野で、貴重な貨物をGUVに積み込むための選択方法となっている。
この方法は、リン脂質によって媒介される水/油界面の安定化による膜のリーフレットの形成に基づいています。まず、リン脂質を油(脂質溶液、LS)に溶解し、次に油性LSに所望のGUV貨物(内液、IS)を含む水溶液で油中水エマルジョンを調製します。次に、エマルジョンをチューブに移し、そこで別の水溶液(外溶液、OSと名付けられた)がLSと事前に平衡化されて水と油の界面を形成します。GUVは、水滴が遠心分離によってこのOS/LS界面を強制的に通過するときに形成され、GUVの内側のリーフレットはIS液滴の表面に形成され、外側のリーフレットはOSとLSの間に形成されます(図1)。
多くのプロトコルバリアントは、偶発的な実験ニーズに応じてパラメーターが調整されて説明されています。プロセスを最適化するための最初の広範な試みは、Mogaら13によって説明され、Zhangらは最近のレビューで関連する例のほとんどを収集しました14。プロトコルに影響を与える多くのパラメーターが記載されているにもかかわらず、新しいGUV製剤の最適化プロセスをどのように実施できるか、また、製造後のGUVの回収と操作のベストプラクティスの兆候はありません。入手可能な科学文献と私たちの直接の経験に基づいて、基本原理について話し合いながらGUVを製造するための一般的なプロトコルをここで提供します。そうすることで、新しいGUV製剤の最適化に役立つ適応症と、プロトコルに常に適用できる2つの予防措置、つまり制御された環境でのLSの調製と、クリーンなGUVサンプルの回収のために上部油相を簡単に除去する方法を提供します。2つの例を選びました:1つはISとして240 mMのスクロース、LSとしてシリコーンオイルAR20中の0.2 mM DOPC(条件E [空]、 表1を参照)、もう1つはISとして240 mMのスクロース中の0.2%1.1 μmポリスチレン微粒子、LSとして鉱物油中の3.18 mM DOPCで構成されています(条件P [粒子を含む]、 表1を参照)。どちらのサンプルも、OSとして240 mMのグルコースを使用して作成されました。この浸透圧を選択して、生理学的条件下で弛緩した脂質膜(膜張力が低い)を持つGUVを取得しました。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig1v5.jpg"> 
図1:液滴移動法の概略図。 (A)脂質溶液を形成するための油中リン脂質(黄色相)、内液としてのスクロース含有溶液(シアン)、および外溶液として等浸糖グルコース溶液(白色)の3つの溶液を別々のバイアルで調製します。次に、LSをISと混合して安定したエマルジョンを形成し、次に(C)OSとLSの間の界面を平衡化させてから、(D)エマルジョンをその上に注ぎます。(E)水滴は遠心力によってLS / OS界面を横切るように強制され、(F)GUVの形成を可能にします。この図は縮尺ではなく、メソッドの概略図のみを提供することを目的としています。略語:LS =脂質溶液;IS = 内部ソリューション;OS = 外部ソリューション;GUV = 巨大な単層小胞。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>0.22 & マイクロ;m混合セルロースエステル膜&nbsp;シリンジフィルター</td><td>メルク</td><td>SLGSVR255F</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mLチューブ</td><td>バイオクラス</td><td>06.0279.00</td><td></td></tr><tr><td>100 & ムー;L型ガラス製シリンジ</td><td>メルク</td><td>20737</td><td></td></tr><tr><td>150 mLビーカー</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>213-1123</td><td>3以上</td></tr><tr><td>20 mLダークガラスバイアル ND24</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>548-9001A</td><td></td></tr><tr><td>2 mLチューブ</td><td>バイオクラス</td><td>07.3534.99</td><td></td></tr><tr><td>50mLシリンダー</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>612-3843</td><td></td></tr><tr><td>500 & ムー;L型ガラス製シリンジ</td><td>ハミルトン</td><td>549-1166</td><td></td></tr><tr><td>50 mL ファルコンチューブ</td><td>メルク</td><td>CLS352070</td><td></td></tr><tr><td>50 mLシリンジ&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>8SS50L1</td><td></td></tr><tr><td>5 mLチューブ</td><td>グライナーバイオワン</td><td>622201</td><td></td></tr><tr><td>600 mLビーカー</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>213-1126</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml;chnerフラスコ</td><td>メルク</td><td>Z740682</td><td></td></tr><tr><td>丸底フラスコ用コルクリング</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>217-1000</td><td></td></tr><tr><td>晶析装置</td><td>ダッチャー</td><td>080474A</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-グルコース</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-ショ糖</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>デジタル温湿度計</td><td>ボーレンダー</td><td>V1863-07</td><td></td></tr><tr><td>DOPCの</td><td>アバンティ・リサーチ</td><td>850375C</td><td></td></tr><tr><td>ドリル</td><td>ドレメル</td><td>4000</td><td></td></tr><tr><td>エリオグラウシン二ナトリウム塩(ブリリアントブルーFCF)</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>861146</td><td></td></tr><tr><td>G18シリンジニードル</td><td>テルモ</td><td>AN1838R1</td><td></td></tr><tr><td>G21シリンジニードル</td><td>テルモ</td><td>AN2138R1</td><td></td></tr><tr><td>グローブチャンバー</td><td>ベルアート</td><td>F50030-0000</td><td>利用可能な場合はグローブボックスを使用できますが、湿度レベルが低い研究室では必要ない場合があります</td></tr><tr><td>ホットプレートマグネチックスターラー</td><td>LLG実験器具</td><td>6.263 448</td><td></td></tr><tr><td>軽鉱物油</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>330779</td><td></td></tr><tr><td>新しいコクシン</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>199737</td><td></td></tr><tr><td>ニトリルゴム製OリングOリング、8mmボア、外径12mm</td><td>RS</td><td>196-4863</td><td></td></tr><tr><td>セプタム付きオープンスクリューキャップ ND24</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>〒548-0031A</td><td></td></tr><tr><td>P1000マイクロピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12346132</td><td></td></tr><tr><td>P10000マイクロピペット</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>89079-978</td><td></td></tr><tr><td>P200マイクロピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12326132</td><td></td></tr><tr><td>ペーパータオル</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>KIMB6657</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>291-1214</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (1000)</td><td>エッペンドルフ</td><td>0030000919</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (10000)</td><td>エッペンドルフ</td><td>0030000765</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (200)</td><td>エッペンドルフ</td><td>0030000870</td><td></td></tr><tr><td>ポリスチレン粒子、1.1 &m</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>LB11-1MLの</td><td></td></tr><tr><td>ラバーキャップ</td><td>バイオクラス S.r.l.</td><td>12.2300.05</td><td></td></tr><tr><td>ゴム製円錐形ガスケット</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>217-0211</td><td></td></tr><tr><td>スクリューキャップ&nbsp;ND24</td><td>アバントール&nbsp;</td><td>〒548-0161A</td><td></td></tr><tr><td>シリコーンオイル AR20</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>10836</td><td></td></tr><tr><td>シリコンパイプ(内径1.6mm、外径3mm)</td><td>RS</td><td>667-8441</td><td></td></tr><tr><td>シリコンパイプ(内径6mm、外径12mm)</td><td>RS</td><td>273-2541</td><td>6メートル以上</td></tr><tr><td>三方ジャンクション</td><td>RS</td><td>795-405</td><td></td></tr><tr><td>双方向ジャンクション</td><td>RS</td><td>419-7287</td><td></td></tr><tr><td>双方向バルブ</td><td>クレイバー</td><td>91280</td><td></td></tr><tr><td>純水</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>22934</td><td>利用可能な場合は、この製品をMilli-Qシステムで精製された水に置き換えることができます</td></tr><tr><td>万能はさみ</td><td>ボーケム</td><td>4154</td><td></td></tr></tbody></table>

液滴移動法による巨大単層小胞の確実な作製

Using the Droplet Transfer Method to Reliably Prepare Giant Unilamellar Vesicles

最適なGUV調製は、透明な油相と明確なペレットの形成によって特徴付けられます(図4A)。水滴がGUVに変換できない場合、通常、水滴は崩壊し、OS/LS界面にリン脂質の破片を残します(図4C)。この効果は、水/油界面でのリン脂質の不十分な平衡に起因する、油相からのリン脂質および他の分子の凝集によって引き起こされる可能性が最も高いです。それにもかかわらず、目に見えるペレットが存在しなかったり、界面に破片が存在したりしても、GUV が形成され、プロセスを継続できる可能性があります。洗浄ステップは、すべてのリン脂質の破片を除去するのに完全に効果的ではありませんが、油滴の除去に大きく役立ち、サンプル全体の品質を向上させます( 図6A と 図6Bを比較してください)。
高湿度条件で調製された古いLSまたはLSを使用すると、多くの場合、GUV分散液が減少し、収率が低下し、油相からのリン脂質やその他の分子によって形成される可能性が最も高い無秩序凝集体の含有量が高くなります(図6C)。高湿度条件で調製されたLSでは、GUV生産(GUVを含むサンプルがほとんどない)で0.8を超える変動係数が観察されましたが、修正されたグローブチャンバーで調製されたLSでは、変動係数は0.5未満でした。
遠心分離条件が異なると、GUV の収量と品質に影響を与える可能性があります。定性分析から、3,300 × g での 20 分間が、スクロースを充填した GUV の良好な状態として特定されました (サンプル E)。速度を下げると(500 × gで45分)、収量が減少し、速度を上げると(16,600 × gで5分)、無秩序なリン脂質凝集体の形成が増加しました。遠心力が弱いと、多くの液滴がOS/LS界面を通過するのが妨げられるため、収率が低下する可能性がありますが、強い力では、界面の交差中に外側のリーフレット上のリン脂質の組織化に十分な時間が与えられない可能性があります(図7)。微粒子のカプセル化は、微粒子の質量密度がISの質量密度とほぼ一致する限り、遠心分離パラメータを調整することで最適化することもできます。この目的のために、遠心分離加速度を下げる(そして遠心分離時間を長くする)ことで、固体粒子によって加えられる力によるリン脂質膜の破損を回避することにより、粒子のより均質なカプセル化が可能になります(最適な遠心分離パラメータの調査がまだ進行中である間、良好なカプセル化の例を 図6D に示します17)。
リン脂質の拡散は油相の影響を受ける可能性があるため、簡単な定性試験を実行してエマルジョンの安定性を評価できます(図5)。ISに溶解した着色染料(ブリリアントブルーFCF)を使用して視覚化を改善することで、水と油の比率の異なるエマルジョンを調製し、時間の経過とともに観察することができます。安定性の低下は、水滴の凝集とそれに伴う油相からの分離によって視覚化できます。大きな液滴(肉眼で見える)はGUVに変換されにくいため、相分離が最も少ないエマルジョン条件の使用をお勧めします。
プロトコルの変動の影響は、プロトコルセクション4で説明されているようにサイズ分布分析を通じて検証できます:GUVの直径は位相差顕微鏡画像からImageJを使用して測定でき、サイズ分布はGitHub16で利用可能なスクリプトで分析できます。このプロトコルに従って、たとえば、シリコーンオイルAR20よりも鉱物油を選択すると、より大きな直径のGUVの増加を観察することが可能でした(図8)。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig2v5.jpg"> 
図2:グローブチャンバーのセットアップ。 この図は、脂質溶液調製のためのグローブチャンバーの主な変更を示しています。(A)窒素と真空による入口接続。(B)グローブチャンバーとの入口接続。(C)出口バルブ;(D)溶媒蒸発用の針付きキャップ。(E)溶媒蒸発用の細いパイプ。(F)湿気を吸収するシリカ粒子。(G)グローブチャンバーに入れるアイテム:デジタル温湿度計(1)、有機溶媒中の脂質溶液(2)、コルクリングホルダー(3)、ガラスシリンジ(4)、セプタムと針付きのオープンキャップ(5)、油溶液(6)、キャップ付きのオープンダークバイアル(7)、10 mLチップ(8)、P10000ピペット(9);(H)水に浸した出口パイプの端。(I) 入口と出口に接続された針付きキャップで閉じたバイアル。(J)改良された手袋チャンバーの概略図。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig3v5.jpg"> 
図3:油を簡単に取り除くための容器。 プロトコルセクション2.1に従ってオイルを簡単に除去できるように、容器内のGUVを調製する主なステップ。(A)P1000チップが収まるように、5mLチューブキャップに穴を開けます。次に(B)キャップを空の5mLチューブに置き、先端をOリングを通して穴に挿入します。(C)溶液をプロトコルセクション2.2および2.3に従ってチューブに入れ、先端にキャップを付け、チューブを50mLチューブ内に配置します。シリコーンオイル中の0.2 mM DOPCから調製されたGUVに、230.7 mMのスクロースと3.1 mMのブリリアントブルーFCFをロードして、可視化を強化しました。(D)遠心分離後、上部油相はGUVバッファーの一部とともにチップ内に閉じ込められます(液滴の一部がGUVに変換できず、OSで色素を放出するため、シアン色に見えます)。ゴム製キャップのおかげで、チップは液体内容物と一緒に5mLチューブから簡単に取り外すことができ、油相全体を迅速かつ簡単に取り除くことができます。(E)GUVペレットは、位相差顕微鏡で確認されたように、明らかな油汚染がなく、透明な分散液でチューブの底から簡単に収集できます。スケールバー = 20 μm。略語:LS =脂質溶液;IS = 内部ソリューション;OS = 外部ソリューション;GUV =巨大な単層小胞;DOPC = 1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig4v5.jpg"> 
図4:GUVの形成。 (A)OS/LS界面、(B)透明な油相を持つクリーンなGUVペレット、および(C)OS/LS界面にデブリを含むGUVペレットの例(このGUV集団のISに1.65 mMの新しいコクシン色素が可視化を強化するために添加されたため、デブリとペレットは赤みを帯びて見えます)。略語:LS =脂質溶液;IS = 内部ソリューション;OS = 外部ソリューション;GUV = 巨大な単層小胞。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig6v5.jpg"> 
図5:異なる油比と油中水比でのエマルジョンの安定性。 この図は、オイルの種類と使用する水/油 (w/o) 比率に応じて、エマルジョンの経時的な安定性を示しています。ISは、エマルジョンの可視化を強化するために、230.7 mMのスクロースと3.1 mMのブリリアントブルーFCFで構成されていました。鉱物油で調製されたエマルジョンは、シリコーンオイルAR20で作られたエマルジョンよりも安定性が低くなります。この効果は、w/o比が増加するとさらに増幅されます。シリコーンオイルAR20のエマルジョンは大幅に安定していますが、w/o比が増加するにつれて安定性も低下し、乳化直後に相分離が見られます(シリコーンオイルAR20は10%)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig5v5.jpg"> 
図6:位相差顕微鏡によるGUVの観察。 鉱油中の3.18 mM DOPCから構成されたLSから調製したショ糖負荷GUVの20倍倍拡大(A)油除去後に回収されたサンプル。(B)洗浄ステップ後に回収されたサンプル。(C)酸素と湿度が規制されていない環境で調製されたLSから得られるGUV収率が低い。(D)微粒子を充填したGUV。スケールバー = 10 μm;油滴は丸で囲まれており、リン脂質と油分子の無秩序な凝集体の例は矢印で示されています。略語:LS =脂質溶液;GUV = 巨大な単層小胞。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig7v5.jpg"> 
図7:GUV形成に対するさまざまな遠心分離条件の影響。 シリコーンオイルAR20中の0.2 mM DOPCからなるLSで調製したショ糖負荷GUVの位相差画像図は、(A)16,600 × g で5分間、(B)3,300 × g で20分間、(C)500 × g で45分間のGUVの定性的比較を示しています。遠心分離速度が速いとリン脂質凝集体の存在が高くなりますが、遠心分離速度が低いと収率が低下します。スケールバー = 50 μm。略語:LS =脂質溶液;GUV =巨大な単層小胞;DOPC = 1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig8v5.jpg"> 
図8:サイズ分布分析。 (A)鉱物油中の0.2 mM DOPCと(B)シリコーンオイルAR20中の0.2 mM DOPCから得られた2つのスクロース負荷GUVサンプルの比較(*位相差顕微鏡下でGUVを明確に区別できるようにサンプルを10倍に希釈しました)。プロトコルセクション4に従って実施された分析は、シリコーンオイルAR20サンプルと比較して、鉱物油サンプルの直径が大きい方向にシフトしたことを示しています。ただし、シリコーンサンプルの収率はほぼ20倍高くなります。略語:GUV =巨大な単層小胞;DOPC = 1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig8large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>歩</td>
			<td>条件E</td>
			<td>条件P</td>
			<td>形容</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>4.11グラム</td>
			<td>17.11グラム</td>
			<td>スクロースの塊</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>2.16グラム</td>
			<td>2.16グラム</td>
			<td>ブドウ糖の質量</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240ミリメートル</td>
			<td>1000ミリメートル</td>
			<td>ショ糖の濃度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240ミリメートル</td>
			<td>240ミリメートル</td>
			<td>グルコースの濃度</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>シリコーンオイル</td>
			<td>鉱油</td>
			<td>LSの油相</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>0.1 mLガラスシリンジ</td>
			<td>0.5 mLガラスシリンジ</td>
			<td>クロロホルム溶液中にDOPCを移すためのガラスシリンジ</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.10</td>
			<td>63 μL</td>
			<td>500 μL</td>
			<td>クロロホルム溶液中のDOPCの体積</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.16</td>
			<td>10ミリリットル</td>
			<td>5ミリリットル</td>
			<td>オイル量</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.4.1</td>
			<td>3300g 20分</td>
			<td>500g 45分</td>
			<td>遠心分離条件</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1:プロトコルのバリエーション。 この表は、2つの異なるGUV集団(スクロース負荷GUV(条件E)と微粒子負荷GUV(条件P))を調製するためのプロトコルのさまざまなステップ(最初の列に示されている)のバリエーションを報告しています。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>身分証明書</td>
			<td>関連する手順</td>
			<td>内径(mm)</td>
			<td>外径(mm)</td>
			<td>長さ(mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>1.2.1;1.2.3</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>1.2.1;1.2.4;1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>1.2.1;1.2.4;1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>1.2.1;1.2.4;1.2.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>1.2.1;1.2.6;1.3.13</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>1.2.2;1.2.7;1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7</td>
			<td>1.2.2;1.2.7;1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>1.2.2;1.2.9;1.3.11;1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9</td>
			<td>1.2.2;1.2.9;1.3.11;1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表2:グローブチャンバー内のガスおよび真空接続用のパイプ。 この表は、グローブチャンバーを窒素および真空ラインに接続するために使用されるシリコンパイプの寸法を示しています。アセンブリプロセスを容易にするために、参照 ID が提供されています。

Over the past two decades, the droplet transfer method, also known as inverted emulsion, double emulsion, phase transfer, or emulsion transfer, has proven ...

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Research

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