Name: 分子および計算研究のためのツールとしてのマウス乳腺腫瘍からの癌関連線維芽細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-03T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 学ぶマウス乳腺腫瘍由来の癌関連線維芽細胞を用いた分子・計算解析手法。トランスクリプトーム解析と腫瘍オルガノイドモデルで腫瘍微小環境を動的に解明し、STAT3標的治療戦略を探索する。

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<table><tbody><tr><td>1KbプラスDNAラダー</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>10787018</td><td></td></tr><tr><td>24ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>酢酸</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>695092</td><td></td></tr><tr><td>エイジI-HF</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>R3552</td><td>-20度で保管します。C</td></tr><tr><td>ベタジン</td><td>メダファーマ</td><td>23907076</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml;rker カウンティングチャンバー&nbsp;</td><td>VWRの</td><td>40443703</td><td></td></tr><tr><td>焼灼低温ファインチップディスプ</td><td>キーラー</td><td>AX10339KL</td><td></td></tr><tr><td>遠心機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5810R型</td><td></td></tr><tr><td>コニカルチューブ 15 mL</td><td>ザルシュテット</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>コニカルチューブ 50 mL</td><td>ザルシュテット</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mLマイクロチューブ</td><td>ザルシュテット</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>クリスタルバイオレット</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>C0775</td><td>RTに保管し、ヒュームフードで使用&nbsp;</td></tr><tr><td>培養プレート直径100mm&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>833902</td><td></td></tr><tr><td>培養プレート直径60mm&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>ddH20</td><td>ホームメード</td><td></td><td>RTで保管し、生物学的フードで使用</td></tr><tr><td>デジタルノギス</td><td>プレシバ</td><td>02-301-2</td><td></td></tr><tr><td>デジタルマイクロスコープ</td><td>ライカ</td><td>DM6B型</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>D8418</td><td>生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>ダルベッコ'の改造されたイーグル」s ミディアム (DMEM)</td><td>ギブコ</td><td>11965092</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>エコリ-HF</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>R3101</td><td>-20度で保管します。C</td></tr><tr><td>エチレンジアミン四酢酸(EDTA)</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>E6758</td><td>RTで保管し、生物学的フードで使用</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>ギブコ</td><td>16000044</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 10 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 100 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>フィルターチップ 1000 & micro;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 20 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 200 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>フィルトロプール S プラス 0,20 & マイクロ;m&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>フィルトロプール S プラス 0,45 & マイクロ;m&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>831826</td><td></td></tr><tr><td>細かいはさみ</td><td>2バイオール</td><td>1406009</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>2バイオール</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>ジェネチキン</td><td>ギブコ</td><td>10131035</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>リポフェクタミン 2000 トランスフェクション試薬</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>11668019</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>8&muのマトリゲル侵入室;m PETメンブレン&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレートリーダー(吸光度600nm)</td><td>プロメガ</td><td>GM3500型</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ 1.5 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>オプティメム</td><td>ギブコ</td><td>31985047</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド(PFA)</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>158127</td><td>RTで保管し、ヒュームフードで使用</td></tr><tr><td>pBABE-neo largeTcDNA&nbsp;</td><td>アドジーン</td><td>1780</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>pCL-アンフォ</td><td>ノバスバイオロジカル&nbsp;</td><td>18746853</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>pCMV-R8.74</td><td>アドジーン</td><td>22036</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>pCMV-VSVG&nbsp;</td><td>アドジーン</td><td>8454</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン(ペンストレプト、10,000&μ;g/mL)&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>15140122</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>位相差顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水&nbsp;(PBS)</td><td>ホームメード</td><td></td><td>RTで保管し、生物学的フードで使用</td></tr><tr><td>pLKO.1-ピューロ&nbsp;</td><td>アドジーン</td><td>10878</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>ポリ-L-リジン溶液</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>P8920</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>&nbsp からのピューロマイシン二塩酸塩;ストレプトミセス・アルボニガー</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>rCutSmart バッファー&nbsp;</td><td>ニューイングランドバイオラボ</td><td>B6004</td><td>-20度で保管します。C</td></tr><tr><td>げっ歯類シェーバー</td><td>エスキュラップ</td><td>GT416</td><td></td></tr><tr><td>ロズウェルパーク記念研究所(RPMI)</td><td>ギブコ</td><td>61870010</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>丸い先端の喉の渇きの綿棒</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>Z744127</td><td></td></tr><tr><td>メス</td><td>ギマ</td><td>27041</td><td></td></tr><tr><td>セキュラセミマイクロ天びん</td><td>ザルトリウス</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 10 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 2 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 25 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 5 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>ステッチ 5-0</td><td>エチコン</td><td>1866G</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 10 mL</td><td>ペンタフェルテ</td><td>00202250E14</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 5 mL</td><td>ペンタフェルテ</td><td>00202250E12</td><td></td></tr><tr><td>シリンジオムニカンインスリン1mL</td><td>ブラウン</td><td>9151125S</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュアデシブ</td><td>3Mベットボンド</td><td>1469SBの</td><td></td></tr><tr><td>トランスウェルインサート 8 & マイクロ;m 細孔&nbsp;</td><td>隼</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Transwell Matrigel インサート 8 & micro;m 細孔&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>354480</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA(0.5%)、フェノールレッドなし</td><td>ギブコ</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>Vivaspin 20遠心濃縮機MWCO 10,000 Da&nbsp;</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>Z614602</td><td></td></tr></tbody></table>

分子および計算研究のためのツールとしてのマウス乳腺腫瘍からの癌関連線維芽細胞

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies

CAFの活動に関するin vitro評価 乳がん(BC)の攻撃的な特徴に対する乳腺腫瘍由来がん関連線維芽細胞(CAF)の寄与は、ステップ3に従って生成された不死化CAF(iCAF)を使用して研究されました。iCAFは、ステップ6で説明したようにスーパー活性化され、その後、sDMEMで飢餓状態にしてCMを収集し、4T1細胞を48時間治療するために使用しました(ステップ7.1を参照)。この治療に続いて、 in vitro 機能アッセイが行われました。 図1 は、4T1細胞の増殖が、対照飢餓培地(CTR)と比較して、s.a. iCAFs CMによる処理によって有意に増強されることを示しています。この増殖の増加は通常24時間以内に始まり、その後数日間上昇し続けます。これらの実験では、CMで処理する前に、プレーティングされた細胞の数と培地中の血清の割合の両方を最適化することが重要です。CM処理後、4T1細胞の遊走能は2倍になり、浸潤ではより控えめではあるが統計的に有意な増加が観...

A compelling body of research has confirmed the critical role of the tumor microenvironment (TME) in the growth and aggressiveness of breast cancer (BC). ...

cancer-associated-fibroblasts-from-mouse-mammary-tumors-as-tools-for

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

このレポートでは、我々はマウス乳腺から分離し、培養ドナー細胞にシステムのデモンストレーションを、と同所間質分析するためにレシピエントマウスにこれらの細胞を移植：乳腺腫瘍の開発中に上皮との相互作用を。...

C57BL/6Jマウスにおける間質細胞と癌細胞の乳腺移植

腫瘍間質内に存在する筋線維芽細胞の豊富な癌関連線維芽細胞（CAFS）、腫瘍の進行を推進する上で重要な役割を果たす。我々は実験的にヒト乳腺線維芽細胞からCAFSを生成するためのcoimplantation腫瘍xengraftモデルを開発した。プロトコルは、腫瘍形成を促進する能力を身CAFの筋線維芽細胞を確立する方法について説明します。...

ヒト乳腺線維芽細胞からの癌関連線維芽細胞の実験的生成（CAFS）

癌関連線維芽細胞（CAFS）は増殖、血管新生、炎症を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を容易にします。ここでは、表面マーカーとしてPDGFRαを使用して、細胞選別により新鮮なマウスおよびヒト組織由来正常線維芽細胞とCAFSの純粋な集団を単離するための方法を説明します。...

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

ここでは、癌転移における肺胞マクロファージの機能を研究するためのモデルとアプローチについて説明します。転移におけるこれらの細胞の役割を実証するために、クロドロン酸リポソームによる肺胞マクロファージの枯渇と併せて乳がんの同系(4T1)モデルを使用しました。...

乳がんの転移における肺胞マクロファージの役割を学びます

癌細胞と線維芽細胞を同時注入し、腫瘍の成長を経時的に監視するためのプロトコルが提供されます。このプロトコルは、腫瘍増殖の調節因子としての線維芽細胞の役割の分子基盤を理解するために使用できます。...

腫瘍増殖における癌関連線維芽細胞の役割を調べるためのマウスモデル

本論文は、三重陰性乳癌の同種マウスモデルからの原発性癌関連線維芽細胞の単離と培養と、腫瘍微小環境を標的とするように設計された新規ナノ粒子の前臨床試験への応用を目的とする。...

標的ナノ粒子の研究のための乳癌の同質性マウスモデルからの原発癌関連線維芽細胞の分離

多細胞3D腫瘍スフェロイドを肺腺癌細胞、線維芽細胞、および単球を用いて調製し、続いてこれらのスフェロイドから癌関連線維芽細胞(CAF)を単離した。単離されたCAFを正常な線維芽細胞と比較し、ミトコンドリアの膜貫通電位、活性酸素種、および酵素活性を研究することにより、ミトコンドリアの健康状態を評価しました。...

3D多細胞肺腫瘍スフェロイドから分離された癌関連線維芽細胞におけるミトコンドリアの健康評価

当初、スライド上に固定されていた乳腺組織を、全体のマウントとして、組織病理学的評価のために首尾よく除去、加工、切片化および染色する方法を開発した。この方法は、生殖および発育試験ガイドライン研究における乳腺全体マウントの採取および評価を促進し得る。...

病変同定のための乳腺全体マウントの分割

このプロトコルでは、末梢血および単一ヌクレオチド多型 (SNP) の評価や ELISA...

がんバイオ マーカーを評価するサンプル貯蔵のための便利なツールとして血液や血清スポットを乾燥

このプロトコルの目的は、免疫蛍光、転写などの異なる分析システムで対処することができる腫瘍バルク状環境における癌関連線維芽細胞(CAF)の分化を研究するために、インビトロモデルで3Dを確立することです。分析および生命細胞のイメージ投射。...

がん関連線維芽細胞分化とインビトロ研究における侵入のためのより生理学的システムとしての3Dスフェロイドモデル

学ぶマウス乳腺腫瘍由来の癌関連線維芽細胞を用いた分子・計算解析手法。トランスクリプトーム解析と腫瘍オルガノイドモデルで腫瘍微小環境を動的に解明し、STAT3標的治療戦略を探索する。

分子および計算研究のためのツールとしてのマウス乳腺腫瘍からの癌関連線維芽細胞

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