Name: 前立腺癌関連線維芽細胞の単離、培養、および特性評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 学ぶ前立腺癌関連線維芽細胞の単離・培養法。3Dオルガノイドを用いた腫瘍細胞との相互作用評価やSTAT3の役割解析により、がん微小環境の理解と新規治療標的の探索に貢献します。

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<table><tbody><tr><td>12ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833921</td><td></td></tr><tr><td>24ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833922</td><td></td></tr><tr><td>6ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833920</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルプレート</td><td>ザルシュテット</td><td>833924</td><td></td></tr><tr><td>抗GAPDHマウスmAb(6C5)</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>CB1001</td><td>出典:マウス;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>aSMAの</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>A5228&nbsp;</td><td>出典:マウス;WBの希釈:1:3000</td></tr><tr><td>カベオリン</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>CST3267</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>CD31-バイオブルー</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-119-980</td><td>フローサイトメトリー抗体、内皮細胞マーカー</td></tr><tr><td>CD326-PE(EpCAM)</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130113-826</td><td>フローサイトメトリーAb、上皮細胞マーカー</td></tr><tr><td>CD45-FITC型</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-110769</td><td>フローサイトメトリーAb、パン白血球マーカー</td></tr><tr><td>CD90-APCの</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-114-903</td><td>フローサイトメトリー Ab、線維芽細胞マーカー</td></tr><tr><td>コラーゲンVI(COL6A1)</td><td>アブカム</td><td>アブ182744</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>コニカルチューブ 15 mL</td><td>ザルシュテット</td><td>62554502</td><td></td></tr><tr><td>コニカルチューブ 50 mL</td><td>ザルシュテット</td><td>62547254</td><td></td></tr><tr><td>Cryopure 2 mLマイクロチューブ</td><td>ザルシュテット</td><td>72380992</td><td></td></tr><tr><td>培養プレート直径100mm&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>培養プレート直径100mm&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>353025</td><td></td></tr><tr><td>培養プレート直径60mm&nbsp;</td><td>コーニング</td><td>353002</td><td></td></tr><tr><td>ジメチルスルホキシド(DMSO)</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>D8418</td><td>生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>ダルベッコ'の改造されたイーグル」s ミディアム (DMEM)</td><td>ギブコ</td><td>11965092</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>FAPの</td><td>アブカム</td><td>AB53066</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:500</td></tr><tr><td>FcRブロッキング試薬、ヒト</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-059-901</td><td>Fcブロッカー</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (FBS)</td><td>ギブコ</td><td>16000044</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 10 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703010255</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 100 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703030255</td><td></td></tr><tr><td>フィルターチップ 1000 & micro;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703060255</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 20 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703030265</td><td></td></tr><tr><td>フィルター付きチップ 200 & マイクロ;L</td><td>ザルシュテット</td><td>703031255</td><td></td></tr><tr><td>フィルトロプール S プラス 0,20 & マイクロ;m&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>831826102</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>2バイオール</td><td>1102412</td><td></td></tr><tr><td>FSP1/S100A4</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>D9F9D (13018)</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:2000</td></tr><tr><td>IL6</td><td>アブクローナル技術</td><td>A0286</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>イメージJ</td><td>国立衛生研究所</td><td>バージョン1.53c</td><td>画像解析用ソフトウェア</td></tr><tr><td>Incucyte ImageLock 96ウェルプレート</td><td>サルトリアス</td><td>BA-04857</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte&reg;SX5</td><td>サルトリアス</td><td>SX5</td><td>生細胞分析装置&nbsp;</td></tr><tr><td>リポフェクタミン 2000 トランスフェクション試薬</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>11668019</td><td>陽イオン脂質媒介トランスフェクション試薬</td></tr><tr><td>MACS&reg;ティッシュストレージソリューション</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>マイクロプレートリーダー(吸光度600nm)</td><td>プロメガ</td><td>GM3500型</td><td></td></tr><tr><td>マイクロチューブ 1.5 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>7269001</td><td></td></tr><tr><td>NCADの</td><td>アブカム</td><td>アブ18203</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>ニトロブルーテトラゾリウム&nbsp;</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>N5514</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム&nbsp;</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>HS234526B</td><td></td></tr><tr><td>pBABE-puro-hTERT</td><td>アドジーン</td><td>1771</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>pCL-アンフォ</td><td>ノバスバイオロジカル&nbsp;</td><td>NBP2-29541</td><td>-20度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>PDGFRBの</td><td>サンタクルス</td><td>SC-432</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>ペニシリン-ストレプトマイシン (PS、10,000 &g/mL)&nbsp;</td><td>ギブコ</td><td>15140122</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>位相差顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス&nbsp;</td><td>BX42</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水&nbsp;(PBS)</td><td>ホームメード</td><td></td><td>NaCl、137 mM;KCl、2.7 mM;Na2HPO4、10 mM;KH2PO4、1.8 mM。オートクレーブしてRTで保管</td></tr><tr><td>ポリ-L-リジン溶液</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>P8920</td><td>4度で保管します。C、生物学的フードでの使用</td></tr><tr><td>ピューロマイシン二塩酸塩</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>P8833</td><td></td></tr><tr><td>セキュラセミマイクロ天びん</td><td>ザルトリウス</td><td>SECURA125-1S</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 10 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861254001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 2 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861252001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 25 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861256001</td><td></td></tr><tr><td>血清ピペット 5 mL&nbsp;</td><td>ザルシュテット</td><td>861253001</td><td></td></tr><tr><td>ステータス3</td><td>CST</td><td>9139</td><td>出典:マウス;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>STAT3 Y705</td><td>CST</td><td>9131</td><td>出典:ウサギ;WBの希釈:1:1000</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>MZ125</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 10 mL</td><td>ペンタフェルテ</td><td>00202260D12</td><td></td></tr><tr><td>テルモミキサー</td><td>エッペンドルフ</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA(0.5%)、フェノールレッドなし</td><td>ギブコ</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>ヴィム</td><td>サンタクルス</td><td>SC-6260</td><td>出典:マウス;WBの希釈:1:2000</td></tr><tr><td>Vivaspin 20遠心濃縮機&nbsp;</td><td>シグマ・アルディルチ</td><td>Z614602</td><td>MWCO 10,000 Da&nbsp;</td></tr><tr><td>ワーグナーハサミ</td><td>2バイオール</td><td>14070-12</td><td></td></tr></tbody></table>

前立腺癌関連線維芽細胞の単離、培養、および特性評価

Isolation, Culture, and Characterization of Prostate Cancer-Associated Fibroblasts

7 人の高悪性度 PCa 患者からの CAF と NF のペアは、このプロトコルで単離に成功しました。患者の手術年齢とグリーソンスコアを表 3 にまとめます。由来線維芽細胞集団の純度を評価するために、継代2つの一次CAFおよびNFを分離し、示された蛍光抗体またはヨウ化プロピジウムで染色し、アポトーシスを評価しました。その後のFACS分析の代表的な結果を図2Aに示し、ゲーティング戦略と各マーカーに対して陽性の細胞の割合を強調しています。分析には、上皮細胞 (EpCAM)、内皮細胞 (CD31)、免疫細胞 (CD45)、および活性化線維芽細胞 (CD90) のマーカーが含まれていました。この結果は、細胞が上皮、内皮、または免疫細胞マーカーに対してほとんど陰性であり、CAF活性化のマーカーと考えられているCD90に対してさまざまな陽性を示したため、純粋な線維芽細胞の単離が成功したことを確認しています35,36<su...

Tumor stroma can be actively shaped by tumor cells to adopt pro-tumorigenic properties, making it a focal point of cancer research. Among the stromal ...

isolation-culture-characterization-prostate-cancer-associated

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

癌関連線維芽細胞（CAFS）は増殖、血管新生、炎症を促進し、そのシグナル伝達を介して腫瘍の開始、成長と進行を容易にします。ここでは、表面マーカーとしてPDGFRαを使用して、細胞選別により新鮮なマウスおよびヒト組織由来正常線維芽細胞とCAFSの純粋な集団を単離するための方法を説明します。...

蛍光活性化細胞選別（FACS）によって新鮮な組織からの正常および癌関連線維芽細胞の分離

直接ヒト組織からがん幹細胞（CSCが）の単離は、それらの生物学的特性評価のために必要である。また、難しい手順のトラブルシューティングのヒントを提供しながら、この原稿は、ヒト組織からの前立腺のCSCを単離するための方法論を説明します。...

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

ここでは、多細胞相互作用やがん細胞の挙動の細胞外マトリックス依存性調節を調査するのに役立つ、3次元での共培養のプロトコールを紹介します。この実験モデルでは、ヒトのがん関連線維芽細胞を包埋したコラーゲンゲル上でがん細胞を培養します。...

腫瘍間質相互作用のための三次元共培養モデル

線維芽細胞の振る舞いは、さまざまな臨床実体の根底にありますが、それらは主にその固有の不均一性のために、特徴付けられていないままです。従来の線維芽細胞研究は、in vivoでの線維芽細胞の挙動をマスキングするin...

FACSによるマウス皮膚線維芽細胞の分離

ここでは、初代前立腺上皮細胞の三次元培養とその後の管腔分化を支援する迅速なin...

原発性前立腺細胞の分化のための迅速なフィルターを挿入ベースの3D培養システム

この原稿は、ヒトの皮膚から乳頭線維芽細胞および網状繊維を単離するための FACS ベースのプロトコルを記載している。それは、explant...

蛍光活性化細胞選別によるヒトの皮膚からの乳頭状および網状線維芽細胞の単離

我々は、初心者(例えば、学生)が実行可能な、簡単で迅速かつ信頼性の高い方法で原発性成人線維芽細胞を分離するためのプロトコルを提示する。この手順は、酵素組織の消化と機械的撹拌を超音波と組み合わせて、一次線維芽細胞を得ます。プロトコルは、特定の実験要件(例えば、ヒト組織)に容易に適合させることができる。...

超音波増強原発性成人線維芽細胞分離

ヒト原発性前立腺上皮細胞を用いて、スフェロイドベースの標識保持アッセイによる幹様細胞の機能的特徴付けの新規バイオマーカーフリー法を報告する。BrdU、CFSE、またはファーレッド2Dセルラベリングのステップバイステッププロトコルについて説明します。三次元回転楕円体形成;免疫細胞化学による標識保持幹細胞同定;FACS...

3次元スフェロイド培養からの幹様細胞の分離

線維芽細胞の純粋な集団を得ることは、創傷修復および線維化におけるその役割を研究するために重要である。ここでは、線維芽細胞と筋線維芽細胞を、傷つけていないマウスの心臓から分離し、その後、免疫蛍光、RTPCR、蛍光支援細胞選別による純度と機能性の特徴付け、およびコラーゲンゲル収縮。...

成人心臓線維芽細胞と筋線維芽細胞の分離と特徴付け

本論文は、三重陰性乳癌の同種マウスモデルからの原発性癌関連線維芽細胞の単離と培養と、腫瘍微小環境を標的とするように設計された新規ナノ粒子の前臨床試験への応用を目的とする。...

標的ナノ粒子の研究のための乳癌の同質性マウスモデルからの原発癌関連線維芽細胞の分離

多細胞3D腫瘍スフェロイドを肺腺癌細胞、線維芽細胞、および単球を用いて調製し、続いてこれらのスフェロイドから癌関連線維芽細胞(CAF)を単離した。単離されたCAFを正常な線維芽細胞と比較し、ミトコンドリアの膜貫通電位、活性酸素種、および酵素活性を研究することにより、ミトコンドリアの健康状態を評価しました。...

3D多細胞肺腫瘍スフェロイドから分離された癌関連線維芽細胞におけるミトコンドリアの健康評価

学ぶ前立腺癌関連線維芽細胞の単離・培養法。3Dオルガノイドを用いた腫瘍細胞との相互作用評価やSTAT3の役割解析により、がん微小環境の理解と新規治療標的の探索に貢献します。

前立腺癌関連線維芽細胞の単離、培養、および特性評価

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