Name: 組織中のcGMP濃度の測定 - JoVEジャーナル
Uploaded: 2025-07-03T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 15 s
Description: 本記事では、競合用ELISAを用いて固形組織における環状グアノシン一リン酸(cGMP)濃度を測定するプロトコルを提示します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Dierks, E. A., Burstyn, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+%28NO%29%2C+the+only+nitrogen+monoxide+redox+form+capable+of+activating+soluble+guanylyl+cyclase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide (NO), the only nitrogen monoxide redox form capable of activating soluble guanylyl cyclase.</a> Biochem Pharmacol. 51 (12), 1593-1600 (1996).</li>
<li>Koglin, M., Behrends, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+functional+domain+of+the+alpha1+subunit+of+soluble+guanylyl+cyclase+is+necessary+for+activation+of+the+enzyme+by+nitric+oxide+and+YC-1+but+is+not+involved+in+heme+binding%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A functional domain of the alpha1 subunit of soluble guanylyl cyclase is necessary for activation of the enzyme by nitric oxide and YC-1 but is not involved in heme binding.</a> J Biol Chem. 278 (14), 12590-12597 (2003).</li>
<li>Olson, L. J., Knych, E. T., Herzig, T. C., Drewett, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+guanylyl+cyclase+inhibitor+reverses+nitric+oxide-induced+vasorelaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Selective guanylyl cyclase inhibitor reverses nitric oxide-induced vasorelaxation.</a> Hypertension. 29 (1), 254-261 (1997).</li>
<li>Bailey, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+supplementation+reduces+the+O2+cost+of+low-intensity+exercise+and+enhances+tolerance+to+high-intensity+exercise+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+%281985%29%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate supplementation reduces the O2 cost of low-intensity exercise and enhances tolerance to high-intensity exercise in humans.</a> J Appl Physiol (1985). 107 (4), 1144-1155 (2009).</li>
<li>Vanhatalo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+effects+of+dietary+nitrate+supplementation+on+blood+pressure+and+the+physiological+responses+to+moderate-intensity+and+incremental+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic effects of dietary nitrate supplementation on blood pressure and the physiological responses to moderate-intensity and incremental exercise.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 299 (4), R1121-R1131 (2010).</li>
<li>Qin, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+role+of+nitric+oxide+in+complement-mediated+activation+of+platelets+from+mcd59a+and+mcd59b+double-knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hematol%22%5BJournal%5D)">Balancing role of nitric oxide in complement-mediated activation of platelets from mcd59a and mcd59b double-knockout mice.</a> Am J Hematol. 84 (4), 221-227 (2009).</li>
<li>Radomski, M. W., Palmer, R. M., Moncada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+l-arginine%2Fnitric+oxide+pathway+present+in+human+platelets+regulates+aggregation%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">An l-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation.</a> PNAS. 87 (13), 5193-5197 (1990).</li>
<li>Thomas, D. D., Liu, X., Kantrow, S. P., Lancaster, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+lifetime+of+nitric+oxide%3A+Implications+for+the+perivascular+dynamics+of+NO+and+O2%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">The biological lifetime of nitric oxide: Implications for the perivascular dynamics of NO and O2.</a> PNAS. 98 (1), 355-360 (2001).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+rat+skeletal+muscle+homogenates+for+nitrate+and+nitrite+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of rat skeletal muscle homogenates for nitrate and nitrite measurements.</a> J Vis Exp. (173), e62427(2021).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+roles+of+nitrate+and+nitrite+in+nitric+oxide+metabolism+in+the+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Potential roles of nitrate and nitrite in nitric oxide metabolism in the eye.</a> Sci Rep. 10 (1), 13166(2020).</li>
<li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitrate+uptake+and+metabolism+in+human+skeletal+muscle+cell+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Nitrate uptake and metabolism in human skeletal muscle cell cultures.</a> Nitric Oxide. 94, 1-8 (2020).</li>
<li>Montoliu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+nitric+oxide+and+atrial+natriuretic+peptide+changes+with+altered+cGMP+homeostasis+in+liver+cirrhosis%5BTitle%5D)+AND+%22Liver+Int%22%5BJournal%5D)">Correlation of nitric oxide and atrial natriuretic peptide changes with altered cGMP homeostasis in liver cirrhosis.</a> Liver Int. 25, 787-795 (2005).</li>
<li>Origlia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+cGMP+inversely+correlates+with+age+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol+Invest%22%5BJournal%5D)">Platelet cGMP inversely correlates with age in healthy subjects.</a> J Endocrinol Invest. 27 (2), RC1-RC4 (2004).</li>
<li>Calamera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fret-based+cyclic+GMP+biosensors+measure+low+cGMP+concentrations+in+cardiomyocytes+and+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Fret-based cyclic GMP biosensors measure low cGMP concentrations in cardiomyocytes and neurons.</a> Commun Biol. 2, 394(2019).</li>
<li>Rutkowski, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cGMP+signaling+shows+pronounced+differences+between+glomerular+endothelial+cells+and+podocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cGMP signaling shows pronounced differences between glomerular endothelial cells and podocytes.</a> Sci Rep. 14, 26099(2024).</li>
<li>Straub, A. C., Beuve, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+primer+for+measuring+cGMP+signaling+and+cGMP-mediated+vascular+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">A primer for measuring cGMP signaling and cGMP-mediated vascular relaxation.</a> Nitric Oxide. 117, 40-45 (2021).</li>
<li>Huang, K. T., Lin, T. J., Hsu, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+cyclic+GMP+concentration+using+a+gold+nanoparticle-modified+optical+fiber%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Determination of cyclic GMP concentration using a gold nanoparticle-modified optical fiber.</a> Biosens Bioelectron. 26 (1), 11-15 (2010).</li>
<li>Cyclic gmp elisa kit. , 
 <a target="_blank" href="https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf">https://cdn.caymanchem.com/cdn/seawolf/insert/581021.pdf</a> (2024).</li>
<li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+nitrate+metabolism+in+porcine+ocular+tissues+determined+using+15N-labeled+sodium+nitrate+supplementation%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Dietary nitrate metabolism in porcine ocular tissues determined using 15N-labeled sodium nitrate supplementation.</a> Nutrients. 16 (8), 1154(2024).</li>
<li>Cgmp enzyme immunoassay kit, direct technical bulletin. , 
 <a target="_blank" href="https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V">https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/289/571/cg200bul.pdf?srsltid=AfmBOoqWnOVurQ549ESXk_E7DJoqNs7v268ktTabHHYc6I_6NZkc-j_V</a> (2025).</li>
<li>Cyclic gmp competitive elisa lysate and homogenate samples. , 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS Assets/LSG/certificate/Certificates%20of%20Analysis/RA229061_EMSCGMPL.pdf</a> (2025).</li>
<li>Hamad, A. M., Range, S., Holland, E., Knox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cGMP+by+soluble+and+particulate+guanylyl+cyclases+in+cultured+human+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cGMP by soluble and particulate guanylyl cyclases in cultured human airway smooth muscle.</a> Am J Physiol. 273 (4), L807-L813 (1997).</li>
<li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide%2FcGMP%2Fphosphodiesterase-5+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> J Biol Chem. 279 (25), 26149-26158 (2004).</li>
<li>Corbin, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3h%5Dsildenafil+binding+to+phosphodiesterase-5+is+specific%2C+kinetically+heterogeneous%2C+and+stimulated+by+cGMP%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">[3h]sildenafil binding to phosphodiesterase-5 is specific, kinetically heterogeneous, and stimulated by cGMP.</a> Mol Pharmacol. 63 (6), 1364-1372 (2003).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD 透明経口シリンジ</td><td>ベクトン・ディキンソン</td><td>50382903052177</td><td></td></tr><tr><td>14 mL 丸底試験管</td><td>隼</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>2.0mlマイクロチューブ、アソート</td><td>オリンパスプラスチック</td><td>24-283A</td><td></td></tr><tr><td>30-300 & マイクロ;L マルチチャンネル ピペット&nbsp;</td><td>エッペンドルフ</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>無水酢酸(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400031</td><td>98%純度 Hazard:可燃性、腐食性:皮膚の重度の火傷、目の損傷、急性毒素 安全な取り扱い:発火源から遠ざけ、換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>cGMPアセチルコリンエステラーゼトレーサー(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>481020</td><td>リン酸二塩基性カリウム、塩化ナトリウム、&nbsp;リン酸カリウム一塩基性、ウシアルブミン、アジ化ナトリウム、EDTA、cGMP AChEトレーサー Hazard:健康被害:反復暴露による臓器毒性、 腐食性:目の損傷、 皮膚および呼吸器刺激物 安全な取り扱い:換気された場所での作業、 手袋を着用する</td></tr><tr><td>cGMP ELISA抗血清(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>481022</td><td>リン酸二塩基性カリウム、塩化ナトリウム、&nbsp;リン酸カリウム一塩基性、ウシアルブミン、&nbsp;アジ化ナトリウム、EDTA、ウサギ抗cGMPポリクローナル抗血清 Hazard:健康被害:反復暴露による臓器毒性、 腐食性:目の損傷、 皮膚および呼吸器刺激性、急性毒性 安全な取り扱い:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>cGMP ELISA標準物質(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>481024</td><td>リン酸二塩基性カリウム、塩化ナトリウム、&nbsp;リン酸カリウム一塩基性、ウシアルブミン、&nbsp;アジ化ナトリウム、EDTA、cGMP規格 Hazard:健康被害:反復暴露による臓器毒性、 腐食性:目の損傷、 皮膚および呼吸器刺激物 安全な取り扱い:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>サイクリックGMP ELISAキット</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>581021</td><td></td></tr><tr><td>ELISA バッファー濃縮物 10X (cGMP キット中)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400060</td><td>1 Mリン酸塩、1%BSA、4 M塩化ナトリウム、10 mM EDTA、0.1%アジ化ナトリウム Hazard:健康被害:反復暴露による臓器毒性、 腐食性:目の損傷、 皮膚および呼吸器刺激物 安全な取り扱い: 換気の良い場所で作業し、蓋を閉める容器に保管し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>ELISA試薬リザーバー</td><td>ピアース(現サーモフィッシャーサイエンティフィック)</td><td>15075</td><td></td></tr><tr><td>Ellman's Reagent(cGMPキット入り)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400050</td><td>リン酸二塩基性カリウム、塩化ナトリウム、リン酸一塩基性カリウム、アセチルチオコリン(ヨウ化物)、5,5'-ジチオビス-(2-ニトロ安息香酸) Hazard:急性毒性、健康被害:臓器毒性、腐食性:眼の損傷、皮膚刺激物、再生性刺激物 安全な取り扱い:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください。</td></tr><tr><td>塩酸</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>320331</td><td><強い>危険性</強い>:腐食性:金属を腐食し、皮膚をひどく火傷する、目の損傷、呼吸器刺激物 <強い>安全な取り扱い</強い>:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>液体窒素</td><td>ロバートの酸素</td><td></td><td>窒素 Hazard: 圧縮ガス: 極低温火傷、凍傷、窒息の危険性 安全な取り扱い: 換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>マウス抗ウサギIgGコーティングプレート(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400006</td><td> 危険: なし</td></tr><tr><td>ニュークラシックMFバランス</td><td>メトラー・トレド</td><td></td><td></td></tr><tr><td>オービタルシェーカー&nbsp;</td><td>ストーバルライフサイエンス株式会社(現IBIサイエンティフィック)</td><td>15-453-211 (変動あり)</td><td></td></tr><tr><td>パラフィルム</td><td>株式会社ベミスカンパニー</td><td>3023-4526 (変動あり)</td><td></td></tr><tr><td>ポリソルベート 20 (cGMP キット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400035</td><td> 危険: なし</td></tr><tr><td>水酸化カリウム(cGMPキット内)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400029</td><td>85%純度 危険性:腐食性:金属や皮膚を腐食し、 目の損傷、急性毒性 安全な取り扱い:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr><tr><td>Precellys Evolution ホモジナイザー</td><td>ベルタンテクノロジーズ</td><td>PE000062-PEVO0-A</td><td></td></tr><tr><td>Precellys 溶解キット硬組織均質化</td><td>ベルタンテクノロジーズ</td><td>P000911-LYSK0-A</td><td></td></tr><tr><td>Sense マイクロプレートリーダー</td><td>ハイデックス</td><td>425-301</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 17R 遠心分離機</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>75002441</td><td></td></tr><tr><td>ティッシュ粉砕機</td><td>セルクラッシャー</td><td>セルクラッシャーキット</td><td></td></tr><tr><td>ボルテックス・ジーニー2</td><td>科学産業&nbsp;</td><td>SI-0246</td><td></td></tr><tr><td>ウォッシュボトル</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>Z423092</td><td></td></tr><tr><td>洗浄バッファー濃縮物 400X (cGMP キット入り)</td><td>ケイマンケミカルカンパニー</td><td>400062</td><td>リン酸二塩基性カリウム、リン酸一塩基性カリウム、水 Hazard:腐食性:眼の損傷、急性毒性、皮膚刺激性、臓器毒性 安全な取り扱い:換気の良い場所で作業し、手袋を着用してください</td></tr></tbody></table>

競合的酵素結合免疫吸着アッセイ(elisa)を用いた固形組織中の環状グアノシン一リン酸(cgmp)の測定

Measurement of Cyclic Guanosine Monophosphate (cGMP) in Solid Tissues using Competitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

食事性塩化ナトリウム(0.15 mmol / kg)または 15N標識硝酸塩(0.15 mmol / kg)で処理したヨークシャーの家畜豚を、1日1回、5日間連続してチョウのボーラスとして投与し、組織採取前にヘパリンナトリウム(0.9%塩化ナトリウム)溶液で灌流しました。コレクションのすべての詳細は以前に公開されました19。4匹のヨークシャーの家畜豚の臀筋と肝臓のcGMP濃度は、記載されたELISAプロトコルに従って測定されました。肝臓組織を1:5の希釈比で希釈し、臀筋を1:10の希釈比で希釈し、0.1 N塩酸(HCl)でタンパク質を沈殿させました。HClで希釈したホモジネートをアセチル化した後、肝臓と臀筋の両方のサンプルについて、ELISAバッファーで1:2および1:3の希釈比で希釈しました。cGMP濃度は上記のように測定した。吸光度は、調製されたサンプルのミリリットルあたりcGMPのピコモルに変換され、次に上記のプロトコルに記載されているように、組織のグラムあたりcGMPのナノモル(組織nmol / g)に変換されました。
肝臓組織で測定したcGMP濃度は、上記の条件下で最適な実験結果をもたらしました。ブタ肝臓の対照群および硝酸塩処理群のcGMP濃度は、組織0.0202 nmol / g±0.003 nmol / g、組織0.0364 nmol / g±0.011 nmol / gです(図3)。いくつかの値によって、結果の信頼性が確認されます。ブランクを差し引いた B0 ウェルの吸光度は 0.466 から 0.475 で、0.3 AU から 1.0 AU の範囲に収まり、Ellman 試薬による十分なマイクロプレートの発達が実証されています。標準曲線の高品質は、標準 1 から標準 8 への吸光度の増分と、0.99 の決定係数によって検証される標準曲線の線形性の両方によって示されます。測定されたすべての井戸の <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> 率(31.5%-71.2%)は20%から80%の間であり、すべてのサンプルが標準曲線上にあることが実証されています。記載されている特性を持つサンプルは、解釈に適しています。
臀筋組織で測定されたcGMP濃度は、最適ではない実験結果をもたらしました。臀筋ウェルのパーセント <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/68432/68432eq001.jpg" style="margin: auto;"> 値のほとんど(3.69%-27.3%)が20%を下回ったため、吸光度が標準曲線に収まるためには、より希薄なサンプルが必要であったため、最適でないラベルが臀筋の結果に割り当てられています。ブタ大臀筋の対照群と硝酸塩処理群のcGMP濃度は、組織1.22 nmol/g 1±0.49 nmol/g、組織0.732 nmol/g ±0.18 nmol/gです(グラフは示していません)。臀筋サンプルは、肝臓サンプルのB0 ウェルと標準の吸光度を共有します。これらの最適でないサンプルを使用すると、誤った結論が生じる可能性があります。したがって、より希釈されたサンプルの調製とcGMP濃度の再測定が必要です。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2.jpg"> 
図3:肝臓組織におけるcGMP濃度。 塩化ナトリウム(0.15 mmol / kg)または 15N標識硝酸塩(0.15 mmol / kg)で処理したブタ肝臓の平均cGMP濃度(組織nmol / g)。n = 4;エラーバーは標準偏差を示します。データはウェルチのt検定によって分析されました。ns は意味がありません。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68432/68432fig3v2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

競合的酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を用いた固形組織中の環状グアノシン一リン酸(cGMP)の測定

A major pathway that produces cyclic guanosine monophosphate (cGMP) is the nitric oxide (NO)-cGMP pathway. In this pathway, NO stimulates the catalytic ...

measurement-cyclic-guanosine-monophosphate-cgmp-solid-tissues-using

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ランゲルハンス単離したマウスの膵島を用いたin vitroβ細胞機能をアッセイすることは、糖尿病の病態と治療薬の研究に重要な要素である。多くの下流のアプリケーションが利用可能であるが、このプロトコルは、具体的にはβ細胞機能を決定する本質的なパラメータとして、細胞内サイクリックアデノシン一リン酸（cAMP）の測定を記載する。...

マウス膵島の単離と細胞内cAMP測定法

我々のGPCRの様​​々な標的位置に非天然アミノ酸p-アジド-L-フェニルアラニンを遺伝的に符号化し、異なる用途におけるアジド基の汎用性を示している。これらは、GPCRのリガンド結合ポケットに残基を同定するために目標と光架橋技術、およびペプチドエピトープタグまたは蛍光プローブでのGPCRの部位特異的バイオ直交修飾を含む。...

遺伝的にコードされた分子プローブは、Gタンパク質共役受容体を研究する

複雑な生体試料中のバイオマーカーの測定はますます意思決定臨床指導されています。私たちは、同時に心臓ミオシン結合タンパク質C、クレアチンキナーゼMB、および心筋梗塞と健常者の被験者からの血清サンプル中の心筋トロポニンIを測定する高感度な方法を説明します。...

電気化学発光免疫測定法により血清心臓ミオシン結合タンパク質-Cの定量のための高感度で特異的な定量法

アデニリルシクラーゼシグナル伝達の増感における抑制性Gタンパク質共役型の受容体の持続的活性化。本質的な分子経路を同定するために、偏りのないアプローチが必要であるが、この戦略は、スケーラブルな細胞ベースのcAMP増感アッセイの開発を必要とする。ここで、我々は、小分子およびsiRNAスクリーニングのために作アッセイを説明します。...

アデニリルシクラーゼの薬物誘発性感作：アッセイは、小分子およびsiRNAスクリーニング用途のために合理化·小型化

ユビキタスなセカンドメッセンジャーc-di-GMPは、多くの細菌の成長と行動を制御します。私たちは、ほぼすべての細菌種におけるc-di-GMP結合タンパク質を生化学的に同定し、特性評価するための新しいCapture Compound Mass...

捕獲化合物質量分析 - 小説のc-ジ-GMPエフェクタータンパク質を同定するための強力なツール

S1Pは、S1P受容体(S1PR)サブファミリーを介して多様な生理効果を発揮する。ここでは、S1PR...

スフィンゴシン1-リン酸受容体の構造とシグナル伝達経路を調べるパイプライン

ヒト血漿中のカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)濃度に関する公表されたデータは一貫していません。.これらの不一致は、この神経ペプチドを定量するための標準化された検証済みの方法論の欠如が原因である可能性があります。ここでは、ヒト血漿中のCGRPを精製および定量するための検証済みの酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)プロトコルについて説明します。...

修飾酵素結合免疫吸着アッセイを用いたヒト血漿中のカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)の検出と定量(英語)

この研究で提示されたプロトコルは、2つの方法によるcAMPの測定におけるcAMP差分検出器 In Situ...

蛍光cAMP差検出器In Situを用いた生細胞のリアルタイムcAMPダイナミクス

新規抗HER2モノクローナル抗体を用いた検証済みのサンドイッチELISAアッセイを紹介します。このアッセイにより、 in vitro...

細胞から放出され細胞に結合したヒト上皮成長因子受容体2の包括的な測定のための検証済み免疫化学アッセイ

それは広く体内に機械的な力が細胞の分化と増殖に影響を与えることができることが理解される。ここでは、柔軟なマイクロパターン基板上に培養した細胞を食い止めるために一軸周期引っ張り歪みを配信するための特注のバイオリアクターの使用方法を示すビデオプロトコルを提示する。...

繰返し一軸性歪みを用いた幹細胞の機械的刺激

本記事では、競合用ELISAを用いて固形組織における環状グアノシン一リン酸(cGMP)濃度を測定するプロトコルを提示します。

競合的酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)を用いた固形組織中の環状グアノシン一リン酸(cGMP)の測定

さらに動画を探す