Name: 単核懸濁液のためのマウス嗅覚上皮の迅速な解剖と解離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 42 s
Description: 学ぶマウス嗅覚上皮の迅速解剖と解離法。単核懸濁液を用いた単一細胞シーケンス解析を支援し、嗅覚系の遺伝的基盤研究を促進します。神経科学とゲノミクス分野で応用可能です。

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この研究のすべての動物実験は、ベイラー医科大学 IACUC によって承認され、それに従って実施されました。雌のC57BL/6J(JAX:000664)マウスを使用した。試薬と機器の詳細は 、材料表に記載されています。
1.嗅覚上皮剥離
<ol>
	<li>まず、任意の好ましい方法を使用してマウスを深く麻酔します(施設で承認されたプロトコルに従ってください)。つま先をしっかりとつまんで麻酔の手術面を確認し、少なくとも 10 mL の氷冷 1x PBS の経心臓灌流を進めます。皮膚を取り除いて頭蓋骨を露出させます(図2A)。 注:本体からのヘッドの取り外しはオプションです。頭を切除する場合は、首を切る前に頭蓋骨の周りの皮膚やその他の軟部組織を切除することをお勧めします。</li>
	<li>先端が鋭い細いハサミを使用して、1つのハサミの先端を後眼窩に、もう1つの外耳道に隣接して、扁平上皮骨から頬骨弓を両側に切断するために2つの切開を行います( 図2Bの緑色の線)。</li>
	<li>前頭骨の最前方に沿って眼窩から眼窩へと浅い切開を行います。前頭骨の背側表面(~1〜2 mmの深さ)のみを切開し、眼窩を構成する下にある構造や骨を切断しないように注意します( 図2Bの青い線)。 注:眼窩間の浅い切開を実現するには、はさみを頭蓋骨に対して垂直に持ち、鋭い先端のみを使用して切断します。</li>
	<li>ステップ1.3で前頭骨に行われた眼窩間切開に達するまで、大孔から矢状縫合糸と前頭間縫合糸を通って頭蓋骨の正中線に沿って切断します( 図2Bの赤い線)。</li>
	<li>頭蓋骨の正中線に沿って行われた切開部に鉗子を挿入し、頭蓋骨の半球の一方の半球を横方向にしっかりと引っ張ります。この動作により、眼窩の骨(前頭、上顎、涙)も除去され、嗅鼻甲介の外側が露出します(図2D)。 メモ: この時点から、OE を誤って損傷しないように注意してください。</li>
	<li>鼻骨と切歯を持ち、鉗子を使用して反対側の頭蓋骨蓋を外します。脳(嗅球を含む)を引き裂くときに、骨の半球で脳を取り除きます(図1E)。このステップの後に残る唯一の目に見える骨構造は、頭蓋骨の基部とOEを取り巻く骨です(図2F)。</li>
	<li>一対の骨ニッパーまたはロンジャーを使用して、切歯の付け根まで残っている前頭骨と前上顎(切歯)骨を取り除きます(図2G)。</li>
	<li>骨ニッパーを使用して前頭鼻縫合糸に沿って切断し、篩状板から鼻骨を解放し、下にある露出したOEを損傷したり、篩状板を骨折させたりしないように細心の注意を払います。</li>
	<li>鉗子を使用して鼻骨を篩状プレートから持ち上げ、OEを露出させます(図2H)。残存する前上顎骨が背側OEを覆い隠している場合は、続行する前にそれを除去します( 図1Iの黒い円)。</li>
	<li>先端の細い鉗子を使用して、鼻中隔の背側を篩状プレートとの接合部でそっと固定し、後方に引っ張ります(図2J、K)。最小限の抵抗で、主要な嗅覚上皮は完全に無傷の構造として解放されます(図2L)。</li>
	<li>OE解離を直ちに進めるか、後で処理するために組織をスナップフリーズします。</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68472/68472fig2.jpg"> 
図2:嗅覚上皮の迅速な解剖のための技術。 (A)周囲の軟部組織の除去に続くマウスヘッド。(B)頭蓋円蓋切開用の色分けされたガイド。(C)頭蓋円蓋切開後の外観。(D)嗅上皮に隣接する眼窩の部分とともに、頭蓋円蓋の第1半球の除去。(E)脳とともに頭蓋円蓋の反対側部分の除去。(F)脳と頭蓋骨の除去後の頭。(G) 前頭上顎縫合糸での切開後の、最前方の前頭骨および後部前上顎骨の除去。(H)鼻骨の除去。(I)黒い円は、オプションで除去できる残存前上顎骨の領域を強調表示します。(J)無傷の嗅上皮を除去するための鉗子の配置。(K)後方に引っ張って嗅覚上皮を解放します。(L)嗅覚上皮の全放出。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68472/68472fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
2. 嗅覚上皮解離と単核単離
<ol>
	<li>サンプルごとに 1 本の C チューブと 2 本の 15 mL コニカルチューブを氷上に置きます。</li>
	<li>既製の核抽出バッファーにRNAse阻害剤(最終濃度0.2 U/μLまで)を添加して、溶解バッファーを調製します。</li>
	<li>各15 mLのコニカルチューブに4 mLの1%BSAを加え、短時間ボルテックスし、余分なものを廃棄します。これにより、15 mLのコニカルチューブのそれぞれがBSAでコーティングされ、チューブへの核の接着が最小限に抑えられます。</li>
	<li>1つのOE全体に対して、2 mLの氷冷溶解バッファーを各Cチューブに加えます。</li>
	<li>OEサンプルをCチューブに追加します。#2鉗子を使用して、各サンプルをそれぞれのCチューブにかざし、先端の細いハサミを使用して細かく切ります。</li>
	<li>各サンプルを含むCチューブを逆さまにして、自動組織解離器ブロックに置きます。解離器画面では、各ブロックに対応する四角形が 「自由」 から 「選択」に変わります。</li>
	<li>フォルダアイコンを押して、 Miltenyi フォルダに切り替わります。矢印を使用して、 4C_nuclei_1 プログラム(解離器内にプリロードされたプログラム)までスクロールします。[ OK ] を押してプログラムを各ブロックに適用し、[開始] を押してサイクルを開始します。サイクル完了後 すぐに 解離器からCチューブを取り外します。 注:可能であれば、解離サイクルの間、Cチューブを氷のように冷たく保ちます。サイクル完了直後に解離剤からサンプルを取り出し、核の過剰溶解を避けるためにプロトコルの次のステップに進むことが重要です。</li>
	<li>ピペットを使用して、Cチューブから均質化された懸濁液を吸引し、70 μmのストレーナーを通して最初のBSAコーティングされたコニカルチューブにろ過します。Cチューブの底に蓄積した骨片を吸引しないでください。</li>
	<li>ストレーナーを1 mLの氷冷1x PBSですすぎ、完全にろ過します。</li>
	<li>ろ過した懸濁液を500 × g でスイングバケット遠心分離機で4°Cで5分間遠心分離します。</li>
	<li>ペレットを乱さないように注意しながら、上清を穏やかに吸引して廃棄します。穏やかなピペッティングにより、核ペレットを1 mLの氷冷1x PBSに完全に再懸濁します。</li>
	<li>再懸濁した核を30μmのストレーナーに通し、2番目のBSAコーティングされた円錐形チューブに通します。核の濃度は、血球計算盤または自動セルカウンターを使用して定量できます。</li>
	<li>選択したダウンストリームプロトコル(FACSの有無にかかわらず)を直ちに実行して、サンプルの完全性を維持し、劣化を防ぎます(図3)。 注: シームレスかつタイムリーに完了するために、ユーザーはこのプロトコル全体の練習実行を実行することを強くお勧めします。</li>
</ol>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68472/68472fig3.jpg"> 
図3:嗅覚上皮解離と単核単離ワークフロー。 解剖後、嗅覚上皮は機械的および化学的に解離されます。次に、ライセートを70μmのストレーナーでろ過し、1x PBSですすぎ、500 × g で5分間遠心分離します。ペレットは、30 μmのストレーナーでろ過される前に、1x PBSに再懸濁されます。得られた核懸濁液は、さまざまな下流のシーケンシングアプリケーションに利用できます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68472/68472fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<ol><li>Graziadei, P. P. C., Graziadei, G. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+and+neuron+regeneration+in+the+olfactory+system+of+mammals.+I.+Morphological+aspects+of+differentiation+and+structural+organization+of+the+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis and neuron regeneration in the olfactory system of mammals. I. Morphological aspects of differentiation and structural organization of the olfactory sensory neurons.</a> J Neurocytol. 8 (1), 1-18 (1979).</li>
<li>Monti Graziadei, G. A., Graziadei, P. P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenesis+and+neuron+regeneration+in+the+olfactory+system+of+mammals.+II.+Degeneration+and+reconstitution+of+the+olfactory+sensory+neurons+after+axotomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Neurogenesis and neuron regeneration in the olfactory system of mammals. II. Degeneration and reconstitution of the olfactory sensory neurons after axotomy.</a> J Neurocytol. 8 (2), 197-213 (1979).</li>
<li>Caggiano, M., Kauer, J. S., Hunter, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Globose+basal+cells+are+neuronal+progenitors+in+the+olfactory+epithelium%3A+a+lineage+analysis+using+a+replication-incompetent+retrovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Globose basal cells are neuronal progenitors in the olfactory epithelium: a lineage analysis using a replication-incompetent retrovirus.</a> Neuron. 13 (2), 339-352 (1994).</li>
<li>Iwai, N., Zhou, Z., Roop, D. R., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+basal+cells+are+multipotent+progenitors+in+normal+and+injured+adult+olfactory+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Horizontal basal cells are multipotent progenitors in normal and injured adult olfactory epithelium.</a> Stem Cells. 26 (5), 1298-1306 (2008).</li>
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<li>Gadye, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injury+activates+transient+olfactory+stem+cell+states+with+diverse+lineage+capacities%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Injury activates transient olfactory stem cell states with diverse lineage capacities.</a> Cell Stem Cell. 21 (6), 775-790.e9 (2017).</li>
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<li>Antunes, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+nasal+septa+for+respiratory+epithelial+air-liquid+interface+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Murine nasal septa for respiratory epithelial air-liquid interface cultures.</a> Biotechniques. 43 (2), 195-204 (2007).</li>
<li>Wu, J., Cai, Y., Wu, X., Ying, Y., Tai, Y., He, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcardiac+perfusion+of+the+mouse+for+brain+tissue+dissection+and+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Transcardiac perfusion of the mouse for brain tissue dissection and fixation.</a> Bio Protoc. 11 (5), e3988(2021).</li>
<li>Bakulski, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+the+gene+expression+effects+of+developmental+lead+%28Pb%29+exposure+on+the+mouse+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of the gene expression effects of developmental lead (Pb) exposure on the mouse hippocampus.</a> Toxicol Sci. 176 (2), 396-409 (2020).</li>
<li>Chang, C. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+uncovers+the+individual+alteration+of+intestinal+mucosal+immunocytes+in+Dusp6+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing uncovers the individual alteration of intestinal mucosal immunocytes in Dusp6 knockout mice.</a> iScience. 25 (2), 103738(2022).</li>
<li>Denisenko, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+assessment+of+tissue+dissociation+and+storage+biases+in+single-cell+and+single-nucleus+RNA-seq+workflows%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Systematic assessment of tissue dissociation and storage biases in single-cell and single-nucleus RNA-seq workflows.</a> Genome Biol. 21 (1), 130(2020).</li>
<li>Koenitzer, J. R., Wu, H., Atkinson, J. J., Brody, S. L., Humphreys, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-nucleus+RNA-sequencing+profiling+of+mouse+lung.+Reduced+dissociation+bias+and+improved+rare+cell-type+detection+compared+with+single-cell+RNA+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Cell+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Single-nucleus RNA-sequencing profiling of mouse lung. Reduced dissociation bias and improved rare cell-type detection compared with single-cell RNA sequencing.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 63 (6), 739-747 (2020).</li>
<li>Xiong, A., Zhang, J., Chen, Y., Zhang, Y., Yang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+single-cell+transcriptomic+analyses+reveal+that+GPNMB-high+macrophages+promote+PN-MES+transition+and+impede+T+cell+activation+in+GBM%5BTitle%5D)+AND+%22eBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Integrated single-cell transcriptomic analyses reveal that GPNMB-high macrophages promote PN-MES transition and impede T cell activation in GBM.</a> eBioMedicine. 83, 104239(2022).</li>
</ol>

マウスの嗅上皮 (OE) は嗅覚系の重要な構成要素であり、匂い信号を検出して中枢神経系に伝達する役割を果たします。その最も表層には、嗅覚感覚ニューロンの匂いを検出する繊毛が含まれており、これらは粘液の層で覆われ、支持する支柱細胞とミクロビラー細胞に囲まれています1,2。OSNは双極性であり、繊毛を頂端に伸ばして粘液層内に格子を形成し、軸索を骨の篩状板を基底に通って嗅球内の糸球体に合体します。これらの糸球体は、OSNと下流ニューロンの間のシナプスの部位です。根底にあるOSNである球形基底細胞と呼ばれるニューロンの前駆細胞は、空気中の毒素、病原体、身体的外傷などの環境的侮辱に直接さらされた後、OSNが死ぬにつれて常にOSNを補充します3。球形基底細胞は、鼻甲介と呼ばれる骨突起の基底層に最も基底に位置し、付着する多能性水平基底細胞4,5の予備プールに由来します。鼻甲介は曲がりくねっているため、OEを分離して均質化することが困難になります。さらに、OE は頭蓋骨の骨に囲まれているため、その領域へのアクセスが困難であり、従来は時間のかかる処置が必要でした。
以前の研究では、骨6,7,8,9,10から嗅覚上皮を放出するために、拡張されたパパインインキュベーションに依存しており、これにより単一細胞懸濁液の下流処理がさらに遅れる可能性があります。OSN軸索のせん断はアポトーシス11を引き起こすため、組織抽出からcDNAライブラリー調製までの時間を最小限に抑えることが不可欠です。さらに、OEの構造と嗅球へのその投影は、単一細胞RNAシーケンシングを成功させるための無傷の細胞の抽出を複雑にします。幸いなことに、単核RNAシーケンシング(snRNA-seq)は、特に単一細胞解離が困難または実用的でない組織において、細胞型分布を維持しながら細胞をプロファイリングするための強力なツールとして浮上しています12,13。
多くの研究6、7、8、10、14、15がマウスOEの単一細胞配列決定を実施していますが、OEの脆弱性と頭蓋骨のさまざまな骨による包み込みを考慮すると、一貫性のある便利な組織収集に最適化された詳細な解剖手順を提供するものはありません。さらに、既存の解剖ガイド16は、速度ではなく解剖学的構造の保存に焦点を当てており、解剖時間が長くなる可能性がある。RNA分解を最小限に抑え、調製された核の品質を最大化するには、適切な組織調製が不可欠であるため17,18、さまざまな下流アプリケーションで使用するために、マウスOEの迅速な解剖および単核懸濁液への均質化のための最適化されたプロトコルが保証されます。
このプロトコル(図1)は、これらの課題を克服するために設計された合理化された方法を提示し、マウスOEの迅速な解剖と核を単離する目的での組織の効率的な解離を可能にします。このアプローチは、高品質の単核シーケンシング19を促進し、嗅覚生物学の分子基盤を調査するための信頼性の高い技術を提供します。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68472/68472fig1.jpg"> 
図1:C57BL / 6マウス頭蓋骨の関連する縫合糸と骨の解剖学的構造、および嗅覚上皮の代表的な断面。 (A)頭蓋骨の縫合糸は色分けされています。縫合糸は頭蓋骨の片側に色分けされていますが、もう片側は参照用にマークされていないままです(左)。それに応じて色分けされた縫合糸の名前(右)。(B)頭蓋骨の骨は色分けされています。骨は頭蓋骨の片側に色分けされていますが、もう片側は参照用にマークされていません(左)。それに応じて色分けされたボーンの名前(右)。(C)OEの中央部分の断面(この記事で説明する方法を使用して解剖)で、鼻甲介は片側に色分けされ、参照用にマークされていない左側(左)。視覚化された鼻甲介の名前(右)。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68472/68472fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>15 mL遠心分離管</td><td>セルトリート</td><td>229411</td><td></td></tr><tr><td>ボーンニッパー&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>16102-11</td><td></td></tr><tr><td>ボンミニチュアアイリスはさみ&nbsp;</td><td>ミルテックス&nbsp;</td><td>18-1392</td><td></td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン溶液</td><td>シグマ・アルドリッチ</td><td>A1595</td><td></td></tr><tr><td>デュモン #3 鉗子&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11231-30</td><td></td></tr><tr><td>メスC57BL/6Jマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>JAX:000664</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Cチューブ&nbsp;</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS オクト解離器&nbsp;</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-096-427</td><td></td></tr><tr><td>MACS スマートストレーナー 30 um&nbsp;</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>MACS スマートストレーナー 70 um&nbsp;</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-098-462</td><td></td></tr><tr><td>マイクロフリードマン・ピアソン・ロンジャーズ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>16220-14</td><td></td></tr><tr><td>核抽出バッファー&nbsp;</td><td>ミルテニー・バイオテック</td><td>130-128-024</td><td></td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水 (PBS)、カルシウムおよびマグネシウムを含まない 1x、PH 7.4 &plusmn;0.1</td><td>コーニング</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>プロテクターRNAse阻害剤&nbsp;</td><td>ミリポアシグマ</td><td>3335402001</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend XTR冷凍遠心分離機</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td>50119927-5</td><td></td></tr></tbody></table>

単核懸濁液のためのマウス嗅覚上皮の迅速な解剖と解離

Rapid Dissection and Dissociation of the Mouse Olfactory Epithelium for Single-Nucleus Suspensions

解剖と分析のための解剖学的背景を提供するために、C57BL/6マウス頭蓋骨の縫合糸と骨、ならびに嗅覚上皮(OE)の中央部分を視覚化し、色分けしました(図1)。各画像の片面には、関連する縫合糸、骨、鼻甲介を強調するために注釈が付けられ、もう片面は参照用にマークが付けられていませんでした。OE断面は確立されたプロトコル20に従って調製され、鼻甲介の同定は以前の解剖学的特徴付け21に基づいていた。
フローサイトメトリーは核単離後に必須ではありませんが、この原稿に記載されている方法で生成された核の品質を示すために、イメージングフローサイトメトリーからの代表的なデータが生成されました。単一原子核を識別するためのゲート(図4A)と高品質の原子核の量(低偏心、高真円度)(図4B)を示しています。単一事象の大部分は核(53.6...

The murine olfactory epithelium is the initial entry point of the olfactory system, housing various cell types that include olfactory sensory neurons, ...

rapid-dissection-dissociation-mouse-olfactory-epithelium-for-single

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

ケージド化合物の光分解は、様々な生理活性化合物の濃度の急激かつローカライズされた増加の生産を可能にする。ここでは、解離マウス嗅神経細胞における嗅覚情報伝達の研究のためのケージドcAMPまたはケージのCaの光分解を組み合わせたパッチクランプ記録を取得する方法を示します。...

嗅神経細胞の繊毛のケージド化合物のフラッシュフォトリシス

このビデオは、トランスジェニックマウス胚からの眼球運動ニューロン、滑車ニューロン、脊髄運動ニューロンの分離を示しています。胚は、視覚化と同定を容易にするために、緑色蛍光タンパク質(GFP)で標識された運動ニューロンを発現します。運動ニューロンは、蛍光顕微鏡下で外科的に単離され、培地で維持されます。...

マウス胚からの眼球運動ニューロン、Trochlearニューロン、および脊髄運動ニューロンの分離と培養

このビデオでは、マウスの仔から得られた神経細胞懸濁液から初代オリゴデンドロサイト細胞を磁気分離法で単離する方法を実演しています。この技術は、オリゴデンドロサイト抗原に特異的な抗体でコーティングされた磁気ビーズを採用しており、これらの細胞の選択的単離を可能にします。...

免疫磁気ビーズを用いたマウス初代オリゴデンドロサイトの単離

このビデオは、穴あきパッチクランプ技術を使用して、マウスの嗅覚ニューロン(OSN)の電気生理学的記録を示しています。蛍光色素にタグされた匂い受容体を持つOSNを含む嗅上皮は、マウスから単離され、記録チャンバーに固定されます。記録ピペットはOSNの樹状突起ノブに固定され、ピペット内のナイスタチンがメンブレンを穿孔して細胞との電気的接続を形成します。最後に、別のピペットを使用して臭気刺激剤を送達し、パッチを当てた細胞の電気生理学的活性を記録する。...

マウスの嗅覚ニューロンの穿孔パッチクランプ記録

嗅覚ニューロンの繊毛はシグナル伝達カスケードのタンパク質を含んでいますが、その分布の詳細な空間分析は凍結切片では困難です。ここでは、毛様体タンパク質のホールマウントラベリングとエンフェイスビジュアリゼーションのための最適化されたアプローチについて説明します。...

マウスの主嗅覚系における繊毛のホールマウントのラベリング

嗅覚ニューロンの生理学的特性の分析には、まだ技術的な限界があります。ここでは、遺伝子標的マウスの嗅上皮の無傷の準備で穴あきパッチクランプを介してそれらを記録します。この技術により、特定の嗅覚受容体を発現するニューロンの特定のリガンドに対する膜特性と応答の特性評価が可能になります。...

無傷の神経上皮におけるマウス嗅細胞の穿孔パッチクランプ記録：同定された嗅覚受容体を発現するニューロンの機能解析

オリゴデンドロサイトは、中枢神経系の髄鞘細胞です。このプロトコルは、ラット皮質からそれらの前駆体であるオリゴデンドロサイト前駆細胞を単離および培養する方法、および実験要因に応答してin...

デュアル赤外線蛍光スキャンを用いてラットオリゴデンドロサイト前駆細胞培養およびOligodendrogenesisの定量化の準備

体外培養の細胞の迅速かつ特定の分離を可能にするプライマリ マウス オリゴデンドロ...

マウスの主なオリゴデンドロ サイトの特異的・迅速免疫分離

RNA完全性を維持しながら個々のセグメントの収集を可能にするマウス卵管の微小解剖のための方法が提示される。加えて、非酵素的卵管細胞解離手順が記載されている。この方法は、機能的に異なる卵管セグメントおよび解離した卵管細胞のその後の遺伝子およびタンパク質分析に適している。...

マウス卵管の微小解剖と解離:個体セグメントの同定と単一細胞単離

単一細胞/単一核のトランスクリプトミクスおよびマルチオミクスの成功は、細胞/核の品質に大きく依存します。したがって、組織からの細胞/核の分離とその精製は高度に標準化されなければなりません。このプロトコルは下流の単一核のmultiomeの試金のための頭脳および骨髄からの核の準備を記述する。...

単一核マルチオームアッセイのための高品質脳および骨髄核調製(英語)

学ぶマウス嗅覚上皮の迅速解剖と解離法。単核懸濁液を用いた単一細胞シーケンス解析を支援し、嗅覚系の遺伝的基盤研究を促進します。神経科学とゲノミクス分野で応用可能です。

単核懸濁液のためのマウス嗅覚上皮の迅速な解剖と解離

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