Name: インビトロ Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles(GUV)内部の細胞骨格ネットワークの再構成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: 学ぶ 相分離した巨大一重層ベシクル（GUV）内での細胞骨格ネットワーク再構成法。脂質二重層を用いてFtsZやアクチンなどのタンパク質を封入し、膜ドメインでの挙動を解析する合成細胞モデルの構築手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Rideau, E., Dimova, R., Schwille, P., Wurm, F. R., Landfester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+and+polymersomes%3A+a+comparative+review+towards+cell+mimicking%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Liposomes and polymersomes: a comparative review towards cell mimicking.</a> Chem Soc Rev. 47 (23), 8572-8610 (2018).</li>
<li>Imai, M., Walde, P. Giant unilamellar vesicles: From protocell models to the construction of minimal cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aImai%2C+M+%22The+Giant+Vesicle+Book%22">The Giant Vesicle Book</a>. , (2019).</li>
<li>Akbarzadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome%3A+classification%2C+preparation%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Res+Lett%22%5BJournal%5D)">Liposome: classification, preparation, and applications.</a> Nanoscale Res Lett. 8 (1), 102(2013).</li>
<li>Litschel, T., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Reconstitution+Inside+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Protein Reconstitution Inside Giant Unilamellar Vesicles.</a> Annu Rev Biophys. 50 (1), 100620-114132 (2021).</li>
<li>Dimova, R., Aranda, S., Bezlyepkina, N., Nikolov, V., Riske, K. A., Lipowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+giant+vesicles.+Probing+the+membrane+nanoregime+via+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Condens+Matter%22%5BJournal%5D)">A practical guide to giant vesicles. Probing the membrane nanoregime via optical microscopy.</a> J Phys Condens Matter. 18 (28), S1151-S1176 (2006).</li>
<li>Angelova, M. I., Dimitrov, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+electroformation%5BTitle%5D)+AND+%22Faraday+Discuss+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Liposome electroformation.</a> Faraday Discuss Chem Soc. 81 (0), 303-311 (1986).</li>
<li>Abkarian, M., Loiseau, E., Massiera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+droplet+interface+crossing+encapsulation+%28cDICE%29+for+high+throughput+monodisperse+vesicle+design%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Continuous droplet interface crossing encapsulation (cDICE) for high throughput monodisperse vesicle design.</a> Soft Matter. 7 (10), 4610-4614 (2011).</li>
<li>Dürre, K., Bausch, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+phase+separated+vesicles+by+double+layer+cDICE%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Formation of phase separated vesicles by double layer cDICE.</a> Soft Matter. 15 (47), 9676-9681 (2019).</li>
<li>Pautot, S., Frisken, B. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Unilamellar+Vesicles+Using+an+Inverted+Emulsion%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Production of Unilamellar Vesicles Using an Inverted Emulsion.</a> Langmuir. 19 (7), 2870-2879 (2003).</li>
<li>Deshpande, S., Caspi, Y., Meijering, A. E. C., Dekker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octanol-assisted+liposome+assembly+on+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Octanol-assisted liposome assembly on chip.</a> Nat Commun. 7 (1), 10447(2016).</li>
<li>Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+Vesicles%3A+Preparations+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Giant Vesicles: Preparations and applications.</a> ChemBioChem. 11 (7), 848-865 (2010).</li>
<li>Moga, A., Yandrapalli, N., Dimova, R., Robinson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+Inverted+Emulsion+Method+for+High-Yield+Production+of+Biomimetic+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the Inverted Emulsion Method for High-Yield Production of Biomimetic Giant Unilamellar Vesicles.</a> ChemBioChem. 20 (20), 2674-2682 (2019).</li>
<li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization+serves+as+a+membrane+domain+switch+in+model+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization serves as a membrane domain switch in model lipid bilayers.</a> Biophys J. 91 (11), 4064-4070 (2006).</li>
<li>Lopes dos Santos, R., Malo, M., Campillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Control+of+Arp2%2F3-Induced+Actin+Polymerization+on+Phase-Separated+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Spatial Control of Arp2/3-Induced Actin Polymerization on Phase-Separated Giant Unilamellar Vesicles.</a> ACS Synth Biol. 12 (11), 3267-3274 (2023).</li>
<li>Sun, Q., Fu, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+effects+on+hydrophobic+interactions%3A+Implications+for+protein+unfolding%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Temperature effects on hydrophobic interactions: Implications for protein unfolding.</a> Chem. Phys. 559, 111550(2022).</li>
<li>Zimmerle, C. T., Frieden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+on+the+mechanism+of+actin+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature on the mechanism of actin polymerization.</a> Biochemistry. 25 (21), 6432-6438 (1986).</li>
<li>Concha-Marambio, L., Maldonado, P., Lagos, R., Monasterio, O., Montecinos-Franjola, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+adaptation+of+mesophilic+and+thermophilic+FtsZ+assembly+by+modulation+of+the+critical+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Thermal adaptation of mesophilic and thermophilic FtsZ assembly by modulation of the critical concentration.</a> PLoS One. 12 (10), e0185707(2017).</li>
<li>Kanwa, N., Kohyama, S., Fröhlich, L., Desai, A., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutual+dependence+between+membrane+phase+separation+and+bacterial+division+protein+dynamics+in+synthetic+cell+models%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Mutual dependence between membrane phase separation and bacterial division protein dynamics in synthetic cell models.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 64 (6), e202417800(2025).</li>
<li>Reverte-López, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organized+spatial+targeting+of+contractile+actomyosin+rings+for+synthetic+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-organized spatial targeting of contractile actomyosin rings for synthetic cell division.</a> Nat Commun. 15 (1), 10415(2024).</li>
<li>dos Santos, R. L., Campillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+actin-induced+cell+shape+changes+using+Giant+Unilamellar+Vesicles+and+reconstituted+actin+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Studying actin-induced cell shape changes using Giant Unilamellar Vesicles and reconstituted actin networks.</a> Biochem Soc Trans. 50 (5), 1527(2022).</li>
<li>Staufer, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+production+and+characterization+of+biofunctionalized+giant+unilamellar+vesicles+for+targeted+intracellular+cargo+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Microfluidic production and characterization of biofunctionalized giant unilamellar vesicles for targeted intracellular cargo delivery.</a> Biomaterials. 264, 120203(2021).</li>
<li>Lopes, D., Jakobtorweihen, S., Nunes, C., Sarmento, B., Reis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shedding+light+on+the+puzzle+of+drug-membrane+interactions%3A+Experimental+techniques+and+molecular+dynamics+simulations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Shedding light on the puzzle of drug-membrane interactions: Experimental techniques and molecular dynamics simulations.</a> Prog Lipid Res. 65, 24-44 (2017).</li>
<li>Peetla, C., Stine, A., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+interactions+with+model+lipid+membranes%3A+applications+in+drug+discovery+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Biophysical interactions with model lipid membranes: applications in drug discovery and drug delivery.</a> Mol Pharm. 6 (5), 1264-1276 (2009).</li>
<li>Schulz, M., Werner, S., Bacia, K., Binder, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+Molecular+Recognition+with+Lipid%2FPolymer+Domains+in+Vesicle+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Controlling Molecular Recognition with Lipid/Polymer Domains in Vesicle Membranes.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 52 (6), 1829-1833 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-(1'-rac-グリセロール)(ナトリウム塩)(DOPG)</td>ア<td>バンティ極性脂質</td><td>840475</td>クロ<td>ロホルム</td></tr><tr><td>1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン(DOPC)</td>クロロホルム中のア<td>バンティ極性脂質</td><td>850375</td>クロ<td>ロホルム</td></tr><tr><td>1,2-ジオレオイル-sn-グリセロ-3-ホスホエタノールアミン-N-(キャップビオチン)(ナトリウム塩)(18:1ビオチニルキャップPE)</td>ア<td>バンティ極性脂質</td><td>870273</td><td>クロロホルム</td></tr><tr><td>1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホ-(1'-rac-グリセロール)(ナトリウム塩) (DPPG)</td>ア<td>バンティ極性脂質</td><td>840455</td> クロ<td>ロホルム</td></tr><tr><td>1,2-ジパルミトイル-sn-グリセロ-3-ホスホコリン (DPPC)</td>クロ<td>ロホ</td>ルム <td></td> 96 ウェル平底マイクロプレート (SensoPlate) 中のア<td>バンティ極性脂質</td>850355</tr><tr><td>アク</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>チン (α-アクチン骨格筋、ウサギ)</td><td>HYPERMOL</td><td>8101-01</td><td></td></tr><tr><td>Atto488-アクチン(α-アクチン骨格筋、ウサギ)</td><td>HYPERMOL</td><td>8153-01</td><td></td></tr><tr><td>Atto655-DOPE</td><td>ATTO-TEC</td><td>AD 655-16</td><td>粉末</td></tr><tr><td>浴超音波処理器</td><td>Branson&nbsp;</td><td>1510R-MTH</td><td>ブランソニック超音波洗浄機</td></tr>ビ<tr><td>オチンアクチン (α-アクチン骨格筋、ウサギ)</td><td>HYPERMOL</td><td>8109-01</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>A6003</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5804 R</td><td></td></tr><tr><td>クロロホルム</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>コレステロール (ヒツジ)</td><td>Avanti 極性脂質</td><td>700000</td><td>クロロホルムデ</td></tr><tr><td>カン</td><td>TCI Deutschland GmbH</td><td>D0011</td><td></td></tr><tr><td>ファシン (ヒト、組換え)</td><td>Cytoskeleton Inc (Tebubio GmbH)</td><td>CS-FSC01-A</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll70</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F2878</td><td></td></tr><tr><td>ヨオジキサノール (OptiPrep)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1556</td><td></td></tr><tr><td>LSM800 共焦点レーザー走査型顕微鏡</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>C-Apochromat 40&thinsp;&時間;&thinsp;/1.2 水浸対物レンズ。ダイオード励起固体レーザー:488&thinsp;nmおよび640&thinsp;海里。</td></tr><tr><td>鉱物油</td><td>Sigma Aldrich</td><td>8042-47-5</td><td></td></tr><tr><td>ミオシン II (ウサギ骨格筋)</td><td>Cytoskeleton Inc (Tebubio GmbH)</td><td>MY02-A</td><td></td></tr><tr><td>Neutravidin</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>31000</td><td></td></tr><tr><td>浸透圧計</td><td>Fiske Associates</td><td></td><td>Fiske Micro-Osmometer model 120</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One</td><td>&nbsp;GmbH</td><td>07-000-109</td><td></td></tr></tbody></table>

インビトロ phase separated giant unilamellar vesicles(guv)内部の細胞骨格ネットワークの再構成

In vitro Reconstitution of Cytoskeletal Networks inside Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles (GUVs)

最初のステップとして、膜相分離を有するGUVを、修正逆エマルジョンアプローチに従って作製しました(図1A)。これにより、GUVの収率が高くなり、LdドメインとLOドメインに分離された膜を示すLDドメインと、ラベル化されていないLOドメインに対応する暗領域にAtto 655-DOPEラベルが表されます(図1B)。この方法では、高温で5〜30μm(図1C)の範囲のサイズの位相分離GUVが得られます(すべてのステップを37°Cで実行し、RTでイメージング)。さらに、遠心分離速度は、GUV内に元の成分脂質が取り込まれるように調整され、過剰な過剰増殖を回避しました。
さらに、現在のプロトコルに記載されているエマルジョン法を使用して生体分子のカプセル化が成功することを実証するために、FtsZネットワークとアクチンネットワークの両方を個々の実験で再構成しました。FtsZネットワークはGUVの内部で再現され、2.5 mM GTPおよび50 g/L Ficoll70の存在下で、膜標的配列(MTS)を介してLdドメインに優先的に結合するフィラメントとして出現します(図2を参照)。ネットワークは、カプセル化ステップの約1時間後に観察されました。しかし、アクトミオシンネットワークは、GUV内で再構成した後、(FtsZの厚いネットワークとは対照的に)薄い束として現れます(図3)。ビオチン化脂質は、アクトミオシンネットワークがGUVの膜に結合する上で重要な役割を果たすことに注意する必要があります。ビオチン化脂質がないと、アクトミオシンの束は湾曲した形状をとることができず、長い束の絡み合った網目として膜に付着するのではなく、内腔でまっすぐで短く硬い束として残ります(図4)。
改変エマルジョンプロトコルでは、前述のように、遠心分離速度を調整して相分離GUVを取得します。実際、アクトミオシンネットワークを含むサンプル(600 x g で15分間)の遠心分離速度が速いと、ベシクルが生産ウェル内で組織様に凝集します。したがって、アクトミオシンネットワークのすべての標準的な再構成実験では、最適な遠心分離速度を200 x g に設定して、非凝集GUVを取得しました(図5)。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig1.jpg"> 
図1:ダブルエマルジョントランスファー法による相分離GUVのワンポット作製 (A)ダブルエマルジョントランスファー による ワンポット相分離ベシクル製造のキーステップの実験スキーム。(B)A.で述べた方法により生成されたGUVの共焦点Z投影像。スケールバーは50μm、(C)直径に応じて生成された位相分離GUVの割合を示す棒グラフ。実行された実験はn = 3で、実験ごとに分析されたGUVの総数= 100です。データは平均値として示され、個々のデータポイントは3つの独立した実験です。エラーバーは、3つの実験の標準偏差を表します。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig2.jpg"> 
図2:カプセル化されたFtsZネットワークを持つ位相分離小胞 (A)FtsZネットワークを含む位相分離GUVの完全取得zスタック上で行われた共焦点3D投影画像。(B)小胞の上半分のみで行われた共焦点Z投影画像。GUVの表面上にドメインが不均一に形成されるため、取得した共焦点スライスの3D再構成では、小胞の上部領域と下部領域からの脂質ドメインの重なりが示されています。重複を防ぎ、ドメインの目視検査を容易にするために、取得した Z スタックの下半分がファイルから削除されます。結果として得られる上半分は、標準偏差 による 3D投影に使用されます。スケールバーは両方とも20μmです。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig3.jpg"> 
図3:カプセル化されたアクトミオシンネットワークを持つ位相分離小胞(A)ベシクル生成後のウェルのズームアウトビューを含む、取得したスタック全体の共焦点Z投影画像。得られた小胞の高収率により、小胞内のさまざまなアクトミオシン構造の研究が可能になります。スケールバーは50μmです。 (B)小胞の上半分で行われる共焦点Z投影画像。脂質ドメインの視覚的解析を容易にするために、画像スライスの上半分のみを使用して3D投影を行います。スケールバーは10μmです。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig4.jpg"> 
図4:相分離小胞内の膜結合型アクトミオシンネットワークの生成におけるビオチン化脂質の重要性。 結合していないアクトミオシンネットワークを持つ位相分離小胞を描いた共焦点3Dプロジェクション。ビオチン化脂質が混合物に組み込まれていない場合、アクトミオシン構造は内腔で形成され、小胞の内側のリーフレットに湾曲した形状を獲得しません(右パネル、Atto488で標識されたアクチン)。スケールバーは50μmです。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig5.jpg"> 
図5:エマルジョントランスファーによる相分離小胞の生成に対する遠心分離速度の影響。600 x gの遠心力で15分間生成したGUVサンプルを示す共焦点2D画像。最適化された200 x gよりも高い遠心分離速度により、小胞がウェル内の組織様に凝集します。スケールバーは100μmです。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>

インビトロ Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles(GUV)内部の細胞骨格ネットワークの再構成

Biomimetic lipid membranes in the form of giant unilamellar vesicles (GUVs) are commonly used to mimic cellular membrane behavior because of the ease of ...

in-vitro-reconstitution-cytoskeletal-networks-inside-phase-separated

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

電鋳し、ゲル支援腫れ - 巨人層小胞（GUVs）に貫通タンパク質、KvAPの再構成は、2脱水 - 再水和法について実証されている。両方の方法では、タンパク質を含む小さな単層小胞を蛍光顕微鏡法およびパッチクランプ電気生理学によって研究することができるGUVsを形成するために一緒に融合される。...

膜貫通タンパク質の再構成、顕微鏡およびパッチクランプ研究のための巨大単膜小胞への電位依存性イオンチャネル、KvAP、

ジャイアントベシクルは、マイクロメートルサイズの成分を高度に詰め込んだ有用な細胞モデルです。油中水型エマルジョン遠心分離法は、カプセル化された材料で巨大小胞を調製するためのシンプルで強力なツールです。...

油中水型エマルションの遠心分離により巨大ベシクルカプセル化微小球の調製

蛍光顕微鏡による監視対称および非対称のソリューションの条件下での荷電ベシクルの相挙動

多くのタンパク質の細胞感覚し、膜の曲率を誘発します。湾曲した膜体外タンパク質または任意曲率活性分子の相互作用を研究する脂質小胞から膜ナノチューブをプルする方法について述べる。...

巨大リポソームの膜カーボンナノ チューブを引っ張ってください。

ローカライズされたカルシウム イオン勾配を使用して小胞の非接触マイクロマニピュレーション用手法を提案します。巨大な脂質ベシクルの近くのカルシウム...

ローカライズされたカルシウム イオン勾配に対応した膜小胞の膜を改造

この記事では、細胞骨格タンパク質を内包した巨大な単層小胞を迅速に生産するための簡単な方法を紹介します。この方法は、閉じ込めおよび細胞骨格 - 膜相互作用における細胞骨格構造のボトムアップ再構成に有用であることが証明されている。...

巨大な単層小胞内の再構成された細胞骨格の迅速なカプセル化

セプチンは細胞骨格タンパク質である。それらは脂質膜と相互作用し、ミクロンスケールで膜曲率を感知するだけでなく生成することもできる。このプロトコルでは、膜変形、曲率に敏感なセプチン結合、およびセプチンフィラメントの超構造を分析するためのボトムアップ インビトロ...

セプチンの超微細構造組織、膜再形成、および曲率感度挙動をアッセイするためのボトムアップ インビトロ 法

本稿では、F-アクチン細胞骨格を巨大な単層脂質小胞(リポソームとも呼ばれる)に封入する実験技術と、リポソーム膜の内小葉に皮質生物模倣型F-アクチン層を形成する方法を示す。...

インビトロ 巨大単層小胞内のアクチン細胞骨格の再構成

膜タンパク質を再構成し、酵素やその他の水溶性成分をサブマイクロメートルおよびマイクロメートルサイズの脂質小胞にカプセル化するためのプロトコルを提示します。...

ナノ・マイクロメートル小胞における非平衡代謝ネットワークの構築

この記事では、小胞内構造を持ち、内側、環状、および外側の領域で電気伝導性がカスタマイズされた化合物ジャイアントユニラメラベシクル(cGUV)を調製する方法を紹介します。電気形成は単純なGUVを合成し、浸透圧ショックによって気孔細胞やcGUVに変換されるため、有核細胞の生物物理学を研究するための貴重なモデルを提供します。...

化合物巨大ユニラメラ小胞の合成:核細胞の生体模倣モデル

学ぶ 相分離した巨大一重層ベシクル（GUV）内での細胞骨格ネットワーク再構成法。脂質二重層を用いてFtsZやアクチンなどのタンパク質を封入し、膜ドメインでの挙動を解析する合成細胞モデルの構築手法です。

インビトロ Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles(GUV)内部の細胞骨格ネットワークの再構成

さらに動画を探す